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月季提取物、含其制品及其制备方法和应用与流程

花匠小妙招
2025-10-14 14:38

本发明涉及一种月季提取物、含其制品及其制备方法和应用。
背景技术：
：马拉色菌是人类及温血动物皮肤上的常驻菌群，属于嗜脂性担子菌纲酵母属。早在上世纪几十年代之前，人们已经在温血动物皮肤上发现了三种马拉色菌，它们分别为：糠秕马拉色菌、厚皮马拉色菌和合轴马拉色菌。而后在人们的研究中，发现马拉色菌共有7种，即除上述3种外还有球形马拉色菌、钝形马拉色菌、限制性马拉色菌和斯洛菲马拉色菌。马拉色菌主要生长在人类的表皮角质层中，是一种嗜脂性的菌群，主要以皮肤表面的三酰基甘油和游离的脂肪酸为营养，而影响三酰基甘油和游离脂肪酸分泌较少而降低。马拉色菌以酵母相和菌丝相生长，在正常人皮肤上以酵母相生长，7种马拉色菌种糠秕马拉色菌可单独以氨基酸为中介生长，其他六种则无此特性。马拉色菌属于条件性致病菌，可以引起多种疾病，尤其是皮肤病。因此，近几年对它的致病因素有了越来越广泛的研究。大量研究表明，马拉色菌引起的皮肤疾病是有多种因素综合作用的结果，疾病的发生于该菌的密度，菌种及代谢产物均有密切关系。大量研究表明，马拉色菌可以引起头皮屑、脂溢性皮炎、特应性皮炎和银屑病等。头皮屑通常是肉眼难以观察的鳞屑，其存在形式通常是角质化单细胞形成，但当一定量的角质化单细胞黏附在一起时，临床上就可以观察到片状的白色鳞屑。behrman是第一个研究头皮屑的学者，他总结了大量的资料，按临床表现将头皮屑分为两型：单纯糠疹型和脂溢性糠疹型。单纯糠疹型为出现在正常头皮上的灰白疏松干燥的头屑；脂溢性糠疹型则表现为鳞屑多，且油腻易黏附，可形成蜡样痂皮，并伴有少量的黏性渗出。正常头皮的角质层包含了完全角质化并相互紧贴的25-30层角质化细胞，而头皮屑的头皮角质层里通常少于10层角质化细胞，而且这些角质化细胞经常角化功能不全，排列不齐，细胞间有缝隙。头皮屑的产生过程很可能始于一个不连续的，真皮乳头区的毛细血管扩张。中性粒细胞和单核细胞迁移进入乳头区、表皮，造成表皮间细胞水肿，部分细胞坏死形成小水疱，随后颗粒层消失，出现角化不全。不久以后，水肿减轻，炎症细胞逐渐消失。表皮自行修复，角质层表面形成鳞屑。与头皮屑病因相关的最重要的微生物是马拉色菌，已有大量的临床和实验室研究的相关学说。正常的头皮上分布着多种微生物，密度大约是103-105/mm2，其中包括葡萄球菌、丙酸杆菌和马拉色菌。马拉色菌在体内外营养条件不同的情况下，表现为酵母相或菌丝相，其生长有严格的脂质需求。马拉色菌在分子水平上的不同亚型可以引起临床和病理上不同的炎症反应和多种疾病，而且菌丝相和某些酵母相都可以致病。早在20世纪60年代就有人通过试验支出，治疗头皮屑使用真菌抑制剂的疗效明显优于细菌抑制剂。近来有许多报道，口服或外用酮康唑、和吡硫锌等抗真菌药物可以有效的治疗头皮屑过多。脂溢性皮炎是一种发生在皮脂溢出基础上的慢性皮肤炎症。临床上以头面部及上背部黄红色斑片伴油腻性鳞屑及结痂为特征米并伴有明显的炎症反应。皮肤表面皮脂增多及化学成分的改变，是存在于皮肤的正常菌群大量异常增殖，侵犯皮肤从而引起发病。自1874年malassez首次提出马拉色菌与脂溢性皮炎的发病有关，马拉色菌与脂溢性皮炎关系一直存在争议。heng等人证实，皮损的消退与马拉色菌含量下降成正相关。抗真菌药用于治疗脂溢性皮炎后，马拉色菌数量明显减少，皮损得到改善，这给马拉色菌与脂溢性皮炎的关系提供了有力证据。pechere等人研究发现，马拉色菌的致病性并不取决于其在皮肤上的密度，而是由马拉色菌亚型决定的。tajima等人运用pcr技术分析显示，患者皮肤上的主要菌种是球形马拉色菌和限制性马拉色菌；并且，脂溢性皮炎与限制性马拉色菌的特定亚型有关。特应性皮炎以瘙痒、红斑、脱屑，皮肤肥厚为主要特征。好发于婴幼儿、年轻人及青春期后女性，尤其在面颈部多见。遗传因素在其中也起重要作用。国内外一些文献表明，特应性皮炎患者血清中ige水平升高。大量研究表明，特应性皮炎患者马拉色菌特异性ige抗体阳性率为20％-100％，马拉色菌为特应性皮炎的病因之一。可考虑加用抗真菌药，但临床应用时需根据具体情况而定。银屑病主要表现为炎性红色丘疹，纳米粒至绿豆大小，后逐渐融合为棕红色斑丘疹及斑块，边界清楚，周围炎性浸润，表面覆盖多层干燥的银白色鳞屑。国外曾报道以灭活的生存的糠枇孢子菌做斑贴实验，在人和兔体表都能引起银屑病样皮损。也有研究发现银屑病患者血清中存在一种抗糠枇马拉色菌抗体，而糠枇马拉色菌的可溶性成分(蛋白质)对银屑病患者的多形核中性粒细胞具备明显的趋化作用，提示糠枇马拉色菌可能参与银屑病的同形反应。月季(rosachinensisjacq.)为蔷薇科植物，其干燥花是我国的传统中药材。近年来随着现代医学的发展，发现月季提取物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、活血等药理作用。但目前，尚未见月季提取物可以抑制马拉色菌的报道。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是提供一种月季提取物的制备方法，制得的月季提取物可以抑制马拉色菌。为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：本发明提供了一种月季提取物的制备方法，其包括以下步骤：(1)提取月季花得提取液，其中，溶剂为50～90％乙醇水溶液，月季花与溶剂的质量比为1：(6～15)，提取温度为50～70℃；(2)过滤提取液，得滤液；(3)大孔树脂吸附滤液后洗脱，得洗脱液；(4)浓缩洗脱液后干燥，即得。本发明中，所述月季花为蔷薇科植物月季(rosachinensisjacq.)的干燥花。所述50～90％乙醇水溶液表示乙醇水溶液中乙醇的体积分数为50～90％，其他以此类推。步骤(1)中，所述溶剂较佳地为60～80％乙醇水溶液，更佳地为70％乙醇水溶液。步骤(1)中，所述月季花与溶剂的质量比较佳地为1：(8～12)，更佳地为1:10。步骤(1)中，所述提取温度较佳地为55～65℃，更佳地为60℃。步骤(1)中，所述提取的时间可为1～3h，较佳地为2h。步骤(1)中，所述提取可采用本领域常规提取方法，较佳地为煎煮或循环渗滤，更佳地为循环渗滤。步骤(2)中，所述过滤可采用本领域常规的过滤方法，较佳地采用80～200目筛网，更佳地为100目。步骤(2)中较佳地还包括将所述滤液絮凝沉淀后再次过滤。所述絮凝沉淀的较佳的操作方法为：向所述滤液中加入絮凝剂，搅拌后静置。其中，所述絮凝剂可为本领域常用絮凝剂，例如壳聚糖、聚丙烯酰胺或明矾，较佳地为壳聚糖。所述絮凝剂的添加量可为0.01～10％，较佳地为0.01～0.05％，或者0.05～0.1％，或者0.1～0.5％，或者0.5～1％，或者1～5％，或者5～10％，所述百分比为所述絮凝剂占所述滤液的质量百分比。所述搅拌的温度较佳地为30～50℃，更佳地为45℃。所述搅拌的时间较佳地为5～30min，更佳地为10min。所述静置的时间较佳地为10～60min，更佳地为30min。步骤(3)中，所述大孔树脂可为本领域常规型号的大孔树脂，较佳地为非极性大孔树脂或弱极性大孔树脂，例如hp20大孔树脂、d101大孔树脂或ab-8大孔树脂。所述hp20大孔树脂可购自天津南开大学树脂科技有限公司，所述d101大孔树脂可购自上海华震科技有限公司，所述ab-8大孔树脂可购自日本三菱公司。步骤(3)中，所述洗脱的洗脱剂可为50～90％乙醇水溶液，较佳地为60～80％乙醇水溶液，更佳地为70％乙醇水溶液。步骤(4)中，所述浓缩可采用本领域常用的减压浓缩或常压浓缩。步骤(4)中，所述干燥可采用本领域常规的干燥方法，例如喷雾干燥、真空干燥或冷冻干燥，较佳地为真空干燥。本发明还提供了一种所述月季提取物的制备方法制得的月季提取物。本发明还提供了一种制品，其包含所述月季提取物。本发明中，所述月季提取物占所述制品的质量分数可为0.0001-50％，较佳地为0.01-5％，或10～25％，更佳地为0.2～0.5％。本发明中，所述制品较佳地为外用制剂或日化品。其中，所述外用制剂可采用本领域常规的剂型，较佳的剂型为喷雾剂、软膏或乳膏。所述外用制剂可采用本领域常规的方法制备。所述日化品可为洗发水、护发素、膏霜、洗手液、沐浴露或乳液。所述日化品可采用本领域常规的方法制备。本发明中，所述外用制剂和/或日化品的使用方式一般为皮肤外用。本发明还提供了所述月季提取物在制备治疗马拉色菌引起的皮肤疾病的药物中的应用。本发明中，所述马拉色菌引起的皮肤疾病一般为马拉色菌引起的头屑过多、特应性皮炎、脂溢性皮炎和银屑病，所述头屑过多包括单纯糠疹型和脂溢性糠疹型。本发明中，所述马拉色菌可为糠秕马拉色菌、厚皮马拉色菌、合轴马拉色菌、球形马拉色菌、钝形马拉色菌、限制性马拉色菌和斯洛菲马拉色菌中的一种或多种。在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。本发明所用试剂和原料均市售可得。本发明的积极进步效果在于：本发明的月季提取物取材方便，制备方法简单，可制成外用制剂或日化品等制品，用于治疗马拉色菌引起的皮肤疾病，应用前景广阔。具体实施方式下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。以下实施例和对比例中所用的试剂均为常规市售产品，其中d101大孔树脂购自上海华震科技有限公司。实施例1月季提取物的制备(1)向月季花1kg中加入70％乙醇水溶液10kg，60℃循环渗滤提取2h，得提取液；(2)100目筛网过滤提取液，得滤液，加入1％壳聚糖溶液500g(壳聚糖溶液中溶剂为2％醋酸水溶液)，40℃搅拌10min，静置30min，再次过滤至澄清；(3)将澄清液倒入d101大孔树脂进行吸附，以70％乙醇水溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；(4)将洗脱液减压浓缩，除去乙醇和水后，通过真空干燥，即得月季提取物。实施例2月季提取物的制备向月季花1kg中加入50％乙醇水溶液6kg，50℃循环渗滤提取2h，得提取液；其余步骤同实施例1。实施例3月季提取物的制备向月季花1kg中加入90％乙醇水溶液15kg，70℃循环渗滤提取2h，得提取液；其余步骤同实施例1。对比例1月季提取物的制备向月季花1kg中加入40％乙醇水溶液5kg，40℃循环渗滤提取2h，得提取液；其余步骤同实施例1。对比例2月季提取物的制备向月季花1kg中加入95％乙醇水溶液16kg，50℃循环渗滤提取2h，得提取液；其余步骤同实施例1。对比例3月季提取物的制备向月季花1kg中加入50％乙醇水溶液17kg，75℃循环渗滤提取2h，得提取液；其余步骤同实施例1。应用实施例1护发素的制备各原料及用量见表1，其中月季提取物为实施例1制备所得。制备工艺：将a相升温至80～85℃，搅拌均匀。将b相升温至80～85℃，搅拌均匀。将a相加入b相中，均质3min。降温搅拌。降温至40℃以下，加入c相，搅拌均匀，即得护发素。应用实施例2洗发水的制备各原料及用量见表2，其中月季提取物为实施例1制备所得。表2制备工艺：(1)将a相去离子水、无水柠檬酸先加入乳化锅(主锅)中，在快速搅拌中缓慢加入carbopol980，然后升温至80～85℃；继续加入b相中的rsawesb70/za，完全溶解后加入氢氧化钠和尼泊金甲酯，搅拌完全后降温。(2)在水锅中加入c相中的去离子水和柠檬酸，在快速搅拌下缓慢加入n-hance3196，然后升温至80～85℃，完全溶解后降温至低温待用。(3)待主锅降温至50～60℃时加入d相，搅拌均匀；待主锅降温至40～45℃时加入e相和c相料体，缓慢搅拌，控制气泡。(4)取样测其ph值和粘度，合格后降温至35℃，100目过滤出料，即得洗发水。应用实施例3喷雾剂的制备月季提取物0.5％、乙醇20％、(70％)山梨醇10％、甘油5％、ph-601.5％、naf0.03％、香精1.0％、糖精0.1％、苯甲酸钠0.1％、柠檬酸适量、去离子水余量。制备工艺：去离子水加热到85℃，保温30分钟。降温至60～70℃，依次加入其余各成分，搅拌均匀。降温至40℃以下，即得喷雾剂。应用实施例4沐浴露的制备各原料及用量见表3，其中月季提取物为实施例1制备所得。表3制备工艺：去离子水加热到85℃，将a相各组分依次加入，搅拌均匀。降温至60～70℃，加入b相，搅拌均匀。降温至40℃以下，加入c相，搅拌均匀，即得沐浴露。应用对比例1护发素的制备各原料、用量及制备方法同应用实施例1，其中月季提取物为对比例1制备所得。应用对比例2洗发水的制备各原料、用量及制备方法同应用实施例2，其中月季提取物为对比例1制备所得。应用对比例3喷雾剂的制备各原料、用量及制备方法同应用实施例3，其中月季提取物为对比例1制备所得。应用对比例4沐浴露的制备各原料、用量及制备方法同应用实施例4，其中月季提取物为对比例1制备所得。效果实施例1月季提取物抑制马拉色菌的抑菌圈实验实验菌株：糠秕马拉色菌(malasseziafurfur，atcc44344)培养基：马拉色菌固体培养基：葡萄糖40g/l，琼脂14g/l，蛋白胨10g/l，蒸馏水溶解，调节ph为6.8～7.0，在115℃和高压条件下灭菌20min；马拉色菌液体培养基：葡萄糖40g/l，蒸馏水溶解，调节ph为6.8～7.0，在115℃和高压条件下灭菌20min。实验方法：将受试菌在马拉色菌固体培养基上传代培养后，确保菌落的纯化和活力，挑取单克隆至50ml马拉色菌液体培养基，30℃培养24h，用比浊仪(生物梅里埃公司)调整其至麦氏4号比浊管浓度。用液体培养基稀释菌液，使其最终菌浓度为106cfu/ml，然后吸取100ul涂在固体培养基上。用牛津杯法测定实施例1～3和对比例1～3所制得的月季提取物在1mg/ml时的抑菌圈大小，以判断月季提取物的抑菌活性。实验结果：月季提取物对马拉色菌的抑制作用见表4。表4从表4可知，实施例1～3的月季提取物对马拉色菌形成的抑菌圈均不低于19mm，而对比例1～3的月季提取物无抑菌圈。可见，本发明的月季提取物对马拉色菌有良好的抑菌效果，使用极低含量的本发明的月季提取物就可以形成对马拉色菌较大的抑菌圈平均值。效果实施例2月季提取物抑制马拉色菌的最小抑菌浓度(mic值)测定实验菌株：糠秕马拉色菌(malasseziafurfur，atcc44344)培养基：马拉色菌液体培养基：葡萄糖40g/l，蒸馏水溶解，调节ph为6.8～7.0，在115℃高压条件下灭菌20min。实验方法：将受试菌在马拉色菌固体培养基上传代培养后，以确保菌落的纯化和活力，挑取单克隆至50ml马拉色菌液体培养基，30℃培养24h，用比浊仪(生物梅里埃公司)调整其至麦氏4号比浊管浓度。直接用马拉色菌液体培养基分别将实施例1～3和对比例1～3所制得的月季提取物稀释成试验浓度，分别为400、200、100、50、25、12.5μg/ml。在96孔板微孔中加入菌液100μl和药液100μl，同时设不加菌的阴性对照和不加药液的正常生长对比照，每种药做3个平行，取平均值。置30℃湿盒孵育，48h后观察结果。由于马拉色菌为嗜脂性的，菌落浮在液体表面，微黄色，薄薄一层漂浮在透明的液基表面，肉眼观察非常清晰，采用直接法读取数据。结果判断的前提是生长对照良好，空白对照无菌生长清晰，其它孔随药物浓度梯度升高而菌的生长受到抑制。实验结果：不同月季提取物浓度下菌生长情况见表5。表5“-”代表无菌生长；“+”代表有菌生长。由表5可知，实施例1～3的月季提取物对马拉色菌的mic值不超过50μg/ml，而对比例1～3的月季提取物对马拉色菌的mic值为≥400μg/ml。可见，本发明的月季提取物对马拉色菌有良好的抑菌效果。效果实施例3将上述应用实施例1～4制备的护发素、洗发水、喷雾剂和沐浴露在具有本文中叙述的由马拉色菌引起的皮肤症状的人群中进行临床使用15～20天，均具有良好的抑制单纯糠疹型和脂溢性糠疹型头屑和银屑病功效；喷雾剂还具有治疗特应性皮炎、脂溢性皮炎的功效。临床研究案例：将上述应用实施例1～3制备的护发素、洗发水和喷雾剂应用于临床研究。受试人群：头皮有较多头屑者30人，15男性，15女性。实验方法：将实施例1和2的护发素和洗发水应用于去头屑实验，每两天洗一次头，用洗发水轻摩头发3分钟，洗净后用护发素按摩5分钟，然后使用实施例4的喷雾剂喷头皮10次。20天后给予受试者调查表进行数据统计。实验结果：根据受试者调查表进行数据统计，统计后的结果见表6。表6评价标准人数百分比治愈(使用20天后无头屑生成)620％有效(使用20天后头屑明显减少)1550％一般(使用20天后头屑有少量减少)620％无明显改变(使用20天后无明显改变)310％很差(使用20天后头屑越来越多)00％在应用于头屑过多的人群中进行临床使用20天，有效率超过70％，可见本发明制备的洗发水、护发素和喷雾剂具有良好的抑制头屑生成功效。当前第1页12