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植物花药培养.ppt

花匠小妙招
2025-11-11 09:05

植物花药培养

植物花药培养技术实施方案花药培养（anther culture）是指把发育到一定阶段的花药接种在适宜培养基上，使其中的花粉发育成单倍体植株的过程。由于花药培养采用的外植体是植物的雄性器官，所以属于器官培养范畴。 1.植物花药培养离体培养花药或将花粉粒从花药中分离出来进行培养，可以得到单倍体花粉植株（pollen plant），因为单倍体植株的单套染色体不存在显性基因掩盖隐性基因的问题，所以在育种时便于正确而快速地进行选择，而且可方便地经染色体加倍而获得纯合二倍体。这些特点给育种工作带来了很大的便利，可大大缩短育种周期，简化选育程序，提高选择效率，花药和花粉培养已成为一种在植物育种上十分有效的技术。花药培养意义植物花药培养优势利用花药组培再生植株，主要基于植株在形成性器官、性细胞时，部分或全部病毒被脱离。其优点是从愈伤组织形成到分化出茎叶过程中，可以脱除病毒，并且脱毒率比较高。国内外研究表明，植物花药培养所获植株不带病毒，其生长发育表现往往优于母株，可省去病毒鉴定程序，可以在病毒种类不清和缺乏指示植物鉴定条件下使用。 2.实验器材超净工作台、冰箱、过滤除菌装置、高压蒸汽灭菌锅、光照培养箱、剪刀、镊子、酒精灯、培养瓶、培养皿、电子天平、容量瓶、量筒、烧杯等 3.培养基方案诱导组织培养基： MS+BA (1.0mg/L)+NAA (0.5mg/L) (1) MS+BA(1.0mg/L)+2,4-D(0.5mg/L) (2) 各加肌醇100mg/L，水解酪蛋白100mg/L，蔗糖30g/L，琼脂 8g/L，PH5.8。丛生增值培养基： MS+BA(0.5mg/L)+NAA(0.1mg/L) (3) 诱导生根培养基： 1/2MS+NAA((0.2mg/L) (4) (3)(4)培养基各加0.3%蔗糖，0.8%琼脂，PH5.8。培养温度250℃，光照强度1200LX，光照时间12h/d。试剂 BA 6-苄基氨基嘌呤（细胞分裂素） NAA 萘乙酸（生长素） 2,4-D 2,4-氯苯氧乙酸（生长素）肌醇、水解酪蛋白、蔗糖、琼脂等 4.试剂（包括培养基）配制 0.1﹪升汞溶液的制备：用电子天平称取0.1g氯化汞，放入装有100mL水烧杯中，用玻璃棒搅拌，使氯化汞充分溶解。 75﹪酒精溶液的制备：倒取150mL无水乙醇于500mL中，加入50mL的蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀。 MS培养基（单位：mg/L） 5、实验操作一、材料的选择 1.材料草莓花药取自田间未脱毒苗。选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素。一般来说，花粉发育至单核靠边期的花药，花药培养成功率最高。为了挑选到单核期的花药，选择完全未开放的花蕾。通常花粉单核靠边期的草莓花蕾形态是:花萼未开放，花蕾略长于花冠或花冠刚露白，花冠白色或者淡绿且不松动，花药微黄而充实。二、预处理与消毒 1.材料的预处理：最常用的是低温预处理，将采取的新鲜花药用湿纱布包裹后再用塑料袋套起，放在冰箱中预处理。不同材料所需的温度和时间不同。低温预处理是草莓花培养中的一个重要步骤，其作用主要是改善花粉的生理状态，延缓花粉退化，提高内源激素的水平，启动雄核发育，能显著提高花药诱导率。 2.材料的消毒 1、先用自来水将花药冲洗干净，用纱布轻轻擦干，然后用70%-75%的酒精浸润10-30s 2、无菌吸水纸吸干花药表面的水分 3、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中15min （也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） 4、无菌水冲洗3-5次用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。三、接种和培养 1.接种置于超净工作台无菌纸上剥取花药，并接种于培养基上。在剥离花药时，要尽量不损伤花药（否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。（带有花丝的花药易形成花丝的愈伤组织，而花药愈伤组织形成受到严重抑制） 2.培养通常每瓶接种花药7-10个，温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。花药培养过程 6.影响植物花药培养的主要因素 1.培养材料基因型 2.花药的发育时期 3.外植体的预处理 4.培养基成分 5.培养方式与环境 1.