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花匠小妙招
2025-11-27 14:38

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及est-ssr标记组合及其在评价萱草品种遗传多样性及开花性状连锁分析中的应用。

背景技术：

1、萱草(hemerocallis spp.)是阿福花科萱草属多年生宿根草本花卉，在我国有近三千年的栽培历史。我国是萱草属植物的自然分布中心，萱草属目前全世界约有15个种，在我国就有11个种。公元前300年左右萱草经由丝绸之路从远东带到了欧洲，目前已成为欧美庭院中广泛应用的园林植物。萱草自然花期5～7月，适宜种植在绿荫下和道路旁，丛植、孤植都可以起到很好的景观美化作用，配上丰富多彩的花色，观赏价值极高。近年来，国外广泛开展萱草的育种和应用研究，仅北美就有三百多个萱草展示园，而我国推广使用的萱草品种主要依赖进口，具有自主知识产权的品种相对较少。

2、萱草的品种选育以传统杂交为主，目前在美国萱草协会登录的品种超过9万个，育种目标主要集中在花型、花香、花期、抗性等方面。传统育种对目标性状选育存在很大的盲目性和不可预测性，且周期较长。随着高通量测序的发展，分子标记辅助选择育种越来越受重视，相关的基因和功能性标记陆续被开发。借助分子育种手段，破解重要性状的遗传重组规律，选择合适的亲本聚合目标基因，可以显著提高育种效率，加快新品种选育进程。

3、ssr标记由于共显性、稳定性、多态性等优点，广泛用于不同植物的遗传多样性、图谱构建和基因定位分析。近年来，国内外学者在萱草的标记开发、遗传多样性分析、连锁图谱构建、基因功能分析做了大量工作，为萱草观赏性状的精细定位和分子育种奠定重要基础。但是，有关萱草开花性状相关的研究不够深入，可用的分子标记和功能基因仍然不足，严重阻碍了萱草的分子育种进程。

4、有鉴于此，本发明利用收集的60份主流的萱草属种质资源，基于转录组开发est-ssr进行群体遗传多样性分析，同时调查花色、花葶高度、花朵直径、开花早晚、开花天数和连续开花特性6个表型性状，通过基因型和表型性状的连锁分析，获得显著相关的分子标记。本发明有望开发与萱草开花性状紧密连锁的分子标记，推进萱草种质资源的分子育种研究，为今后培育更多的优良萱草新品种提供技术支撑。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供est-ssr标记组合及其在评价萱草品种遗传多样性及开花性状连锁分析中的应用。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一方面，本发明提供了est-ssr标记组合，包括编号为hf3、hf4、hf5、hf10、hf12、hf13、hf19、hf21、hf28、hf29、hf31、hf34、hf36、hf38、hf39、hf41、hf44、hf47、hf50、hf55的20对多态性est-ssr标记；其中：

4、hf3引物序列为：

5、正向引物：tgacggtggaggagggttta；

6、反向引物：tactgcactgtagggctcct；

7、hf4引物序列为：

8、正向引物：aggtggtgaggctgtaggat；

9、反向引物：cgaagacactctatccgccc；

10、hf5引物序列为：

11、正向引物：gcccctccattggcttatct；

12、反向引物：cgaagcagctggagagagag；

13、hf10引物序列为：

14、正向引物：tccgaacgtggtcaatcctt；

15、反向引物：cgcaagtgcatgctaccatt；hf12引物序列为：

16、正向引物：ccaccatcaaacgagcatagc；反向引物：tattgtacatgaggcggcgg；hf13引物序列为：

17、正向引物：agagcaatggaagtggctcc；反向引物：ttaggacggagcactctgga hf19引物序列为：

18、正向引物：aggaggaggagcagtctcag；反向引物：ggccgagtatcgctgcttat hf21引物序列为：

19、正向引物：accaagaagtcaaccgcctt；反向引物：cactctccgatcgcttctcc；hf28引物序列为：

20、正向引物：ctagtagtggtggtggtggc；反向引物：atagccacctgcagctgttt；hf29引物序列为：

21、正向引物：gatgaagccgatgccaaacc；反向引物：tccttcctgcgctcttttct；hf31引物序列为：

22、正向引物：gagggtgggaagcttctgag；反向引物：acgaacccgcatcagatcaa；hf34引物序列为：

23、正向引物：caagagggacttcagcgagg；反向引物：tcctctcgaacaacaggcac；hf36引物序列为：

24、正向引物：accagccatatgccttgaact；反向引物：aacaaagcccgtaccccaaa；hf38引物序列为：

25、正向引物：gtgcttccaggcccaactta；

26、反向引物：atgatggaaggtctgatgcatcct；

27、hf39引物序列为：

28、正向引物：tgtatttgacacagcaaggcg；

29、反向引物：taccaaagcacggtggctag；

30、hf41引物序列为：

31、正向引物：ttcatggccagttctcgctt；

32、反向引物：tcgtgcaccttcctctttga；

33、hf44引物序列为：

34、正向引物：cgagtacattggggcaaagc；

35、反向引物：tgacctgcatgactacacgg；

36、hf47引物序列为：

37、正向引物：aaagcaaaggggcacacaac；

38、反向引物：gaggaagtgacagaggtggc；

39、hf50引物序列为：

40、正向引物：agggctaagagagagagggc；

41、反向引物：acgaggggtttcttcttcctc；

42、hf55引物序列为：

43、正向引物：agcaaagcaataaaatagacagca；

44、反向引物：ttactctccgcccacctcat。

45、另一方面，本发明还提供了上述的est-ssr标记组合在评价萱草品种遗传多样性及开花性状连锁分析中的应用，其中，开花性状包括花色、花葶高度、花朵直径、开花早晚、开花天数和连续开花特性6个表型性状。

46、与现有技术相比，本发明的技术效果：

47、本发明利用转录组测序大量开发est-ssr标记，筛选出20对高多态性的est-ssr标记，可用于萱草不同资源间的遗传多样性评价。同时基于20对高多态性的est-ssr标记和花色、花葶高度、花朵直径、开花早晚、开花天数、连续开花特性6个表型性状进行连锁分析，获得与花朵直径等表型性状的显著相关的est-ssr标记，并解释了表型变异。综上，本发明提供的est-ssr标记组合，将加快推进萱草种质资源的分子辅助育种进程，为今后培育更多的优良萱草新品种提供技术支撑。