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铁皮石斛组培营养基配置.docx

花匠小妙招
2025-12-05 00:03

含量较高，被广泛的用于器官、花药、细胞核原生质体培养。而1/2MS是将MS的大量元素减半其他不变而配置的培养基，这主要是降低无机盐浓度，作用和MS大致相同只是不同植物不同要求而已 1 MS培养基的配制包括以下步骤。培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的 20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20（50 mL）或1/200（5 mL），加水稀释，制成培养液现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。大量兀素（母液I ） mg / L NH4NO3 33 000 KN03 38 000 CaCI2 -2H2O 8 800 MgS04 7H2O 7 400 KH2PO4 3 400 微量元素（母液U ） KI 166 H3BO3 1 240 MnSO4 4H2O 4 460 ZnSO4- 7H2O 1 720 Na2MoO4 2H2O 50 CuSO4 5H2O 5 CoCl2 -6H2O 5 铁盐（母液川） TOC o 1-5 h z FeS04? 7H2O5 560 Na2-EDTA? 2H2O7 460 有机成分（母液W ） A 肌醇20 000 B 烟酸100 盐酸吡哆醇（维生素B6）100 盐酸硫胺素（维生素B1）100 甘氨酸400 以上各种营养成分的用量，除了母液I为 20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。上述几种母液都要单独配成1L的贮备液。其中，母液I、母液U及母液V的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L o 母液川的配制方法是：将称好的 FeS04 7H2O和Na2-EDTA 2H2O分别放到 450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将 pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。 MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）、萘乙酸（NAA）、6- 苄基嘌呤（6BA）等植物生长调节物质，并且分别配成母液（0.1 mg/mL ）。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2, 4-D和NAA用少量（1 mL）无水乙醇预溶，将6BA用少量（1 mL）的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH 溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为 0.1 mg/mL的母液。配制培养液用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液I为 50 mL,母液A 和W B 各 5 mL。再取 2, 4-D 5 mL、NAA 1 mL，与各种母液一起放入烧杯中。配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗 2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1 000 mL ,搅拌均匀。调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的 pH试纸（5.4?7.0）测培养基的pH，一直到培养基的pH为5.8为止（培养基的pH必须严格控制在5.8 ）。 2 BA为细胞分裂素NAA是萘乙酸，为生长素的一种 3适于百合根的激素暂时没找到以下是叶片和胚的激素：对麝香百合（LiliumlongiflorumThunb）叶片进行离体培养,可成功获得无菌苗。试验结果表明：培养基MS +BA 0 1mg/L +NAA 1 0mg/L 适于初代培养，有助于根和芽的分化;MS +BA 0 5mg/L +NAA1 5mg/L 适于增殖培养，利于愈伤组织的产生，并促进芽的分化；生根培养基为1/ 2MS +NAA 1 0mg/L +多效唑10 0mg/L ;当试管苗根长1cm时移栽易成活在含有1 mg/ L IAA,1 m g/ L GA3,6 0 0 m g/ L CH 的MS培养基上培养，蔗糖含量为6 %?8%