一种微体嫁接培育雌雄同株红豆杉的方法与流程
本发明涉及植物的培育领域，具体地涉及一种微体嫁接培育雌雄同株红豆杉的方法。
背景技术
东北红豆杉(taxuscuspidata)属红豆杉科(taxaceae)，红豆杉属(taxus)常绿针叶乔木。东北红豆杉是世界上公认的濒危灭绝的天然珍稀抗癌植物，在地球上已有250万年的历史，是植物活化石。1996年联合国教科文组织将其列为世界珍稀濒危植物；1999年被列为我国一级珍稀濒危野生植物。
绿化与观赏是东北红豆杉用途之一，东北红豆杉树形优美，枝叶四季浓密苍翠，夏秋观果，浆果鲜红色，像红宝石镶嵌在巨大的翡翠中，是东北地区少有的常绿观赏树种。而东北红豆杉雌雄异株，花粉无气囊，飞散距离短，最佳授粉期很短。只有同时养殖东北红豆杉雌雄植株，才能结出果实，否则不能结实，难以实现观赏果实的目的。
技术实现要素：
为解决上述现有技术存在的问题，本发明提供了一种微体嫁接培育雌雄同株红豆杉的方法，以解决单株不能结果的问题。
为了达到上述发明目的，本发明采用了如下的技术方案：
本发明的目的在于提供一种微体嫁接培育雌雄同株红豆杉的方法，包括以下步骤：
s1、初级培养：在无菌条件下，将雌株幼苗接种到装有1号培养基的培养瓶中培养1～2周，将雄性植株枝条接种到装有2号培养基的培养瓶中培养1～2周，分别对雌株砧木和雄株接穗进行初级培养；
s2、微体嫁接：
在无菌条件下，截去雌株砧木至少一个枝条顶芽，准备嫁接；
在无菌条件下，取出雄株接穗，剪平基部，将雄株接穗嫁接到雌株幼苗截去顶芽的枝条上，完成嫁接；
s3、嫁接后管理：
在无菌条件下，密封培养瓶，将嫁接有雄株接穗的雌株砧木继续在装有1号培养基的培养瓶中培养3～4周使嫁接口愈合，得到嫁接苗；
将嫁接苗移栽到腐殖土基质中，放在温室内驯化培养3～4周，培育得到雌雄同株红豆杉幼苗。
优选地，所述s1初级培养具体步骤为：
培养雌株砧木：选择雌性红豆杉植株，剪取1～2年生枝条，所述枝条长度为3～6cm，保留3～5个小枝，速蘸abt生根粉，扦插，扦插基质为腐殖土，温度控制在20±2℃，相对湿度为90～100％，诱导不定根；培养6～7周，陆续生根，待根长0.3～0.5cm时，在无菌室超净工作台内表面杀菌，在无菌条件下，接种到装有1号培养基的培养瓶中，并将装有1号培养基的培养瓶放置于培养室中培养1～2周，剔除染菌株，获得用于嫁接的雌株砧木；
培养雄株接穗：选取直径与雌性枝条相仿的雄性植株枝条，在无菌室超净工作台内表面杀菌，在无菌条件下，接种到装有2号培养基的培养瓶中，并将装有2号培养基的培养瓶放置于培养室中培养1～2周，剔除染菌株，获得用于嫁接的雄株接穗。
优选地，所述1号培养基包括改良ms培养基、6-苄基氨基腺嘌呤、2,4-d和萘乙酸；所述2号培养基包括改良ms培养基、6-苄基氨基腺嘌呤及萘乙酸。
优选地，所述s2嫁接具体步骤为：
选择生长良好的雌株砧木，在超净工作台内无菌条件下，剪去1～2个枝条顶芽，准备嫁接；
在无菌条件下，取出雄株接穗，剪平基部，并将雄株接穗嫁接到雌株幼苗截去顶芽的枝条上，完成嫁接。
优选地，所述剪去1～2个枝条顶芽采用弯型剪刀进行剪切，使得剪切后的枝条断面为水平断面。
优选地，所述弯型剪刀为具有两延伸端的v形，且至少一延伸端的端部具有垂直弯折剪切部。
优选地，所述将雄株接穗嫁接到雌株幼苗截去顶芽的枝条上具体步骤为：
在无菌条件下，使雄株接穗基部的剪平面与雌株幼苗截去枝条顶芽的水平断面接触，以完成嫁接。
优选地，所述s3嫁接后管理的具体步骤为：
在无菌条件下，密封培养瓶，将嫁接有雄株接穗的雌株砧木继续在装有1号培养基的培养瓶中培养3～4周使嫁接口愈合，得到嫁接苗；
打开培养瓶口，对嫁接苗进行适应性锻炼，5～7天后取出嫁接苗，并洗净嫁接苗根部黏附的培养基；
将嫁接苗在杀菌剂水溶液中药浴，然后移栽到腐殖土基质中，放在温室内练苗，驯化培养3～4周后，培育得到雌雄同株红豆杉幼苗。。
优选地，练苗期间温度控制在22±2℃；练苗初期相对湿度80～90％，以后逐渐降低空气相对湿度，每隔5天喷施一次杀菌剂，防止嫁接幼苗感染杂菌。
优选地，所述杀菌剂为多菌灵。
与现有技术相比，通过本发明的一种微体嫁接培育雌雄同株红豆杉的方法培育得到的雌雄同株红豆杉，其既有雌花枝，又有雄花枝，实现东北红豆杉雌雄同株，提高观赏效果。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为培育的雌株砧木；
图2为培育的雄株接穗；
图3为通过本发明的一种微体嫁接培育雌雄同株红豆杉的方法培育的雌雄同株红豆杉幼苗；
图4为剪去雌株砧木枝条顶芽时所用的弯型剪刀的实拍图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行详细地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实例，而不是全部实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护范围。
本发明实施例的一种微体嫁接培育雌雄同株红豆杉的方法，本实施例以雌株幼苗为砧木，雄性植株枝条为接穗进行微体嫁接，具体的包括以下步骤：
s1、初级培养：在无菌条件下，将雌株幼苗接种到装有1号培养基的培养瓶中培养1～2周，同样在无菌条件下，将雄性植株枝条接种到装有2号培养基的培养瓶中培养1～2周，分别对雌株砧木和雄株接穗进行初级培养。
其中装有1号培养基的培养瓶中的所述1号培养基包括改良ms培养基、6-苄基氨基腺嘌呤、2,4-d和萘乙酸。优选的，6-苄基氨基腺嘌呤为0.3～0.6mg/l，2,4-d为0.05～0.15mg/l，萘乙酸为0.1～0.3mg/l。优选地，1号培养基包括改良ms培养基、0.5mg/l的6-苄基氨基腺嘌呤、0.1mg/l的2,4-d及0.3mg/l的萘乙酸。
其中装有2号培养基的培养瓶中的所述2号培养基包括改良ms培养基、6-苄基氨基腺嘌呤及萘乙酸。优选的，6-苄基氨基腺嘌呤为0.3～0.6mg/l，萘乙酸为0.1～0.3mg/l。；优选地，2号培养基包括改良ms培养基、0.5mg/l的6-苄基氨基腺嘌呤及0.2mg/l的萘乙酸。
具体的，s1中培养砧木与接穗具体步骤为：
培养雌株砧木：参见图1所示，选择雌性红豆杉植株，剪取1～2年生枝条，剪取长度为3～6cm，保留3～5个小枝，速蘸abt生根粉，扦插，扦插基质为腐殖土，温度控制在20±2℃，相对湿度为90～100％，诱导不定根；培养6～7周，陆续生根，待根长0.3～0.5cm时，在无菌室超净工作台内表面杀菌，在无菌条件下，接种到装有1号培养基的培养瓶中，并将装有1号培养基的培养瓶放置于培养室中培养1～2周，剔除染菌株，获得用于嫁接的雌株砧木；
培养雄株接穗：参见图2所示，选取直径与雌性枝条相仿的雄性植株枝条，在无菌室超净工作台内表面杀菌，在无菌条件下，接种到装有2号培养基的培养瓶中，并将装有2号培养基的培养瓶放置于培养室中培养1～2周，剔除染菌株，获得用于嫁接的雄株接穗。
s2、微体嫁接；
在无菌条件下，截去雌株砧木至少一个枝条顶芽，准备嫁接；
在无菌条件下，取出雄株接穗，剪平基部，将雄株接穗嫁接到雌株幼苗截去顶芽的枝条上，完成嫁接。
具体的，s2中嫁接的具体步骤为：
选择生长良好的雌株砧木，在超净工作台内无菌条件下，剪去1～2个枝条顶芽，准备嫁接；
在无菌条件下，取出雄株接穗，剪平基部，并将雄株接穗嫁接到雌株幼苗截去顶芽的枝条上，完成嫁接。嫁接具体为，在无菌条件下，使雄株接穗基部的剪平面与雌株幼苗截去枝条顶芽的水平断面接触，以完成嫁接。
其中，参见图4所示，剪去1～2个枝条顶芽采用弯型剪刀进行剪切，使得剪切后的枝条断面为水平断面。
进一步，所述弯型剪刀为具有两延伸端的v形，且至少一延伸端的端部具有垂直弯折剪切部。
s3、嫁接后管理；
具体的，参见图3所示，s3中嫁接后管理的具体步骤为：
s31、密封培养瓶，在无菌条件下，将嫁接有雄株接穗的雌株砧木继续在装有1号培养基的培养瓶中培养3～4周使嫁接口愈合，得到嫁接苗；
s32、打开培养瓶口，对嫁接苗进行适应性锻炼，5～7天后取出嫁接苗，并洗净嫁接苗根部黏附的培养基；
s33、将嫁接苗在杀菌剂水溶液中药浴，然后移栽到腐殖土基质中，放在温室内练苗，驯化培养3～4周后，培育得到雌雄同株红豆杉幼苗。
其中，练苗期间温度控制在22±2℃；练苗初期相对湿度80～90％，以后逐渐降低空气相对湿度，每隔5天喷施一次杀菌剂，防止嫁接幼苗感染杂菌。
优选的，所述杀菌剂为多菌灵。
实施例1
本实施例选择雌性东北红豆杉植株，剪取1年生枝条，长度4～5cm，保留3～5个小枝，速蘸abt生根粉，扦插，扦插基质为腐殖土，温度控制在20±2℃，相对湿度90～100％，诱导不定根。
培养6～7周，陆续生根，根长0.3～0.5cm时，在无菌室超净工作台内表面杀菌，在无菌条件下，移栽到事先配制好的ms培养基中，放在培养室内培养。
同时，选取直径相同的雄性植株枝条，在无菌室超净工作台内表面杀菌，在无菌条件下，接种到事先配制好的ms培养基中，放在培养室内培养接穗。雌性幼苗和雄性接穗在ms培养基中培养1～2周，剔除染菌株。
选择生长良好的雌性幼苗，在超净工作台内无菌条件下，用特制弯型剪刀剪去1～2个枝条，取出雄性穗条，剪平基部，嫁接到雌性幼苗断枝上，封好瓶盖，放回培养架上继续培养。
培养3～4周嫁接口愈合，在培养室内去掉瓶盖，对嫁接苗进行适应性锻炼，5～7天后，取出嫁接苗，洗净根部黏附的培养基，在800倍多菌灵水溶液中药浴，移栽到腐殖土基质中，放在温室内练苗。
练苗期间温度控制在22±2℃；练苗初期相对湿度80～90％，以后逐渐降低空气相对湿度；每隔5天喷施一次杀菌剂，防止幼苗感染杂菌。在温室内驯化培养3～4周，即可以自然生长，此时管理措施与东北红豆杉扦插苗相同。至此东北红豆杉雌雄同株苗木培育成功。
通过本发明的一种微体嫁接培育雌雄同株红豆杉的方法培育得到的雌雄同株红豆杉，其即有雌花枝，又有雄花枝，实现东北红豆杉雌雄同株，提高观赏效果。
虽然已经参照特定实施例示出并描述了本发明，但是本领域的技术人员将理解，在不脱离由权利要求及其等同物限定的本发明的精神和范围的情况下，可在此进行形式和细节上的各种变化。
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