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一种牵牛花快速繁殖培养基配方的制作方法

花匠小妙招
2024-10-12 19:21

一种牵牛花快速繁殖培养基配方的制作方法
【技术领域】
[0001 ]本发明属于植物组织培养领域，涉及一种牵牛花快速繁殖培养基配方。
【背景技术】
[0002]牵牛花为夏秋季常见的蔓性草花，可作小庭院及居室窗前遮阴、小型棚架、蓠垣的美化，也可作地被栽植;除栽培供观赏外，种子为常用中药，名丑牛子(云南）、黑丑、白丑、二丑(黑、白种子混合），入药多用黑丑，白丑较少用。牵牛花有泻水利尿，逐痰，杀虫的功效。花色是植物观赏的最重要特征之一，也是花卉改良的重点目标之一。传统杂交、诱变育种及定向选择技术有很大的弊端，使传统育种技术在创造新花色上很难有所突破。基因工程的兴起为改良和修饰花色提供了全新的思路，可以定向修饰花色而保留其他原有性状，通过导入外源基因而改变植物花色的方法，已在多种植物上获得成功。作为花色基因工程研究的经典材料，矮牵牛的分子生物学研究开展较早，比较深入，是花色基因的分离、转化的主要模式植物之一，但牵牛花在这方面的研究还是空白状态，组织培养是转基因的基础。
[0003]植物组织培养(广义)又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。植物组织培养(狭义)指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
[0004]植物组织培养中要用到各种培养基。培养基是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素）以及维生素和水等。不同培养基可根据实际需要，添加一些自身无法合成的化合物，即生长因子。
[0005] 但是目前，还没有专门适合于牵牛花组织培养的培养基，严重影响了对牵牛花这种经典材料的研究。

【发明内容】

[0006] 本发明的第一目的是提供一种牵牛花快速繁殖培养基配方，专门适合于牵牛花组织培养，一方面可以进行名贵品种的快速繁殖，另一方面为牵牛花花色基因工程的研究奠定基础。
[0007] 本发明的第二目的是提供上述牵牛花快速繁殖培养基配方的用途。
[0008] 本发明通过以下技术方案来实现：
[0009] -、一种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0010] 愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤0.8-1.4毫克/升、萘乙酸 1.5-2.5毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7-8克/升；
[0011]愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤0.5-2.0毫克/升、萘乙酸 0.1-0.5毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7-8克/升；
[0012]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲噪乙酸0.5-1.5晕克/升、鹿糖20克/升、植物琼脂7-8克/升，水500毫升。
[0013] 二、根据上述的一种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0014] 愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.0-1.2毫克/升、萘乙酸 1.5-2.0毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7-8克/升；
[0015] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.0-1.5毫克/升、萘乙酸 0.1-0.3毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7-8克/升；
[0016] 生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸0.75-1.25毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼脂7-8克/升，水500毫升。
[0017] MS培养基作为本技术方案的基本培养基，为本领域技术人员的公知常识，所含有的组分及含量如表1:
[0018] 表1 MS培养基的配方
[0019]
[0020]
[0021] 三、上述的培养基配方在牵牛花快速繁殖培养中的应用。
[0022] 采用上述技术方案的积极效果:本发明的培养基配方专门适合于对牵牛花的快速繁殖使用，愈伤组织诱导培养基可以诱导组织快速形成愈伤组织，愈伤组织分化培养基用于促进愈伤组织分化，提高增殖系数，生根培养基则可以大大促进组织的生根率，进而提高牵牛花的成活率;本发明的三个培养基配方协同作用，方便牵牛花组织的快速繁殖，为牵牛花花色基因工程的研究奠定基础。
【具体实施方式】
[0023] 下面通过实施例和试验例对本发明的技术方案做进一步的说明，但不应理解为对本发明的限制：
[0024] 实施例1
[0025] -种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0026]愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤0.8毫克/升、萘乙酸1.0毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0027] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6_节氨基噪呤0.5晕克/升、萘乙酸0.1晕克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0028]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸0.5毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨7克/升，水500毫升。配制时，先量取MS培养基，添加吲哚乙酸，加入蔗糖，加水，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌（121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0029] 实施例2
[0030] -种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0031] 愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤0.8毫克/升、萘乙酸1.5毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂8克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0032] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-节氨基噪呤0.5晕克/升、萘乙酸0.3晕克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂8克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0033]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸0.75毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨7克/升，水500毫升。配制时，先量取MS培养基，添加吲哚乙酸，加入蔗糖，加水，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌（121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0034] 实施例3
[0035] -种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0036] 愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤0.8毫克/升、萘乙酸2.0毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，

加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0037] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-节氨基噪呤0.5晕克/升、萘乙酸0.5晕克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0038]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸1.0毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨7克/升，水500毫升。配制时，先量取MS培养基，添加吲哚乙酸，加入蔗糖，加水，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌（121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0039] 实施例4
[0040] -种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0041] 愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤0.8毫克/升、萘乙酸2.5毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂8克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0042] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤0.1毫克/升、萘乙酸0.1毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂8克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0043]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸1.25毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨8克/升，水500毫升。配制时，先量取MS培养基，添加吲哚乙酸，加入蔗糖，加水，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌（121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0044] 实施例5
[0045] -种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0046]愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.0毫克/升、萘乙酸1.0毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0047] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.0毫克/升、萘乙酸0.3毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0048]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸1.5毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨7克/升，水500毫升。配制时，先量取MS培养基，添加吲哚乙酸，加入蔗糖，加水，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌（121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0049] 实施例6
[0050] -种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0051 ]愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.0毫克/升、萘乙酸1.5毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂8克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0052] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.0毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂8克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0053]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸0.5毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨8克/升，水500毫升。配制时，先量取MS培养基，添加吲哚乙酸，加入蔗糖，加水，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌（121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0054] 实施例7
[0055] -种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0056]愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.0毫克/升、萘乙酸2.0毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0057] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.5毫克/升、萘乙酸0.1毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0058]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸0.75毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨7克/升，水500毫升。配制时，先量取MS培养基，添加吲哚乙酸，加入蔗糖，加水，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌（121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0059] 实施例8
[0060] 一种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0061]愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.0毫克/升、萘乙酸2.5毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂8克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0062] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-节氨基噪呤1.5晕克/升、萘乙酸0.3晕克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂8克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0063]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸1.0毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨8克/升，水500毫升。配制时，先量取MS培养基，添加吲哚乙酸，加入蔗糖，加水，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌（121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0064] 实施例9
[0065] -种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0066]愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.2毫克/升、萘乙酸1.0毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7克/升。配制时，先量取MS培

养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0067] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6_节氨基噪呤1.5晕克/升、萘乙酸0.5晕克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0068]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸1.25毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨7克/升，水500毫升。配制时，先量取MS培养基，添加吲哚乙酸，加入蔗糖，加水，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌（121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0069] 实施例10
[0070] -种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0071] 愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.2毫克/升、萘乙酸1.5毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂8克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0072] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤2.0毫克/升、萘乙酸0.1毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂8克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0073]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸1.5毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨8克/升，水500毫升。配制时，先量取MS培养基，添加吲哚乙酸，加入蔗糖，加水，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌（121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0074] 实施例11
[0075] -种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0076] 愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.2毫克/升、萘乙酸2.0毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0077] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤2.0毫克/升、萘乙酸0.3毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0078]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸0.5毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨7克/升，水500毫升。配制时，先量取MS培养基，添加吲哚乙酸，加入蔗糖，加水，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌（121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0079] 实施例12
[0080] 一种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0081]愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.2毫克/升、萘乙酸2.5毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂8克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0082] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-节氨基噪呤2.0晕克/升、萘乙酸0.5晕克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂8克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0083]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸0.75毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨8克/升，水500毫升。配制时，先量取MS培养基，添加吲哚乙酸，加入蔗糖，加水，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌（121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0084] 实施例13
[0085] -种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0086]愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.4毫克/升、萘乙酸1.0毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0087] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6_节氨基噪呤1.0晕克/升、萘乙酸0.1晕克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0088]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸1.0毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨7克/升，水500毫升。配制时，先量取MS培养基，添加吲哚乙酸，加入蔗糖，加水，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌（121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0089] 实施例14
[0090] -种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0091] 愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.4毫克/升、萘乙酸1.5毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂8克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0092] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.0毫克/升、萘乙酸0.3毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂8克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0093]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸1.25毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨8克/升，水500毫升。配制时，先量取MS培养基，添加吲哚乙酸，加入蔗糖，加水，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌（121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0094] 实施例15
[0095] -种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0096]愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，

6-苄氨基嘌呤1.4毫克/升、萘乙酸2.0毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0097] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.5毫克/升、萘乙酸0.1毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0098]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸1.5毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨7克/升，水500毫升。配制时，先量取MS培养基，添加吲哚乙酸，加入蔗糖，加水，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌（121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0099] 实施例16
[0100] -种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，
[0101] 愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.4毫克/升、萘乙酸2.5毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂8克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0102] 愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-节氨基噪呤1.5晕克/升、萘乙酸0.3晕克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂8克/升。配制时，先量取MS培养基，添加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌(121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0103]生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸1.0毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨8克/升，水500毫升。配制时，先量取MS培养基，添加吲哚乙酸，加入蔗糖，加水，待蔗糖溶解后，调整pH到5.8，加入植物琼脂，加热使植物琼脂融化，高温高压灭菌（121°C，25分钟），冷却成固体备用。
[0104] 试验例1
[0105] 本试验例说明用培养基对牵牛花的快速繁殖过程以及各种参数的优化。
[0106] 1、种子消毒
[0107] 取健康饱满的牵牛花种子，先用自来水冲洗lOmin，再用无菌蒸馏水冲洗5次，将其放于灭过菌的三角瓶中，先用体积百分比为75%的乙醇处理5min，然后用质量百分比为 0.1 %的氯化萊处理lOmin，最后用无菌蒸馏水冲洗5遍，备用。
[0108] 2、牵牛花无菌苗的获得
[0109] 将消毒后的种子接种到MS培养基中，（25±2)°C暗培养5天，然后于光下培养，培养 14天获得4-5cm高的无菌苗。
[0110] 3、愈伤组织的诱导
[0111] 将无菌苗的下胚轴切成0.4-0.6cm长的小段放入培养愈伤组织诱导培养基中培养，愈伤组织诱导培养基是指添加有0.5-1.5mg/L 6-苄氨基嘌呤、1.0-2.5mg/L萘乙酸的MS 固体培养基（实施例1-16)。培养到5d时，下胚轴开始膨大，培养到15d时，形成直径1. Ο-? .2cm 的愈伤组织。实验结果如表 2:
[0112] 表2愈伤组织诱导培养基实验结果
[0113]
[(
[0115] 如表所示，愈伤组织诱导率最高可达99 %。
[0116] 4.愈伤组织分化培养
[0117] 将继代4-5次后稳定的愈伤组织接种到愈伤组织分化培养基中培养，愈伤组织分化培养基是指添加有0.5-2.Omg/L 6-苄氨基嘌呤、0.1-0.5mg/L萘乙酸的MS固体培养基(实施例1-12)。实验结果如表3:
[0118]表3愈伤组织分化培养基实验结果 Γηι10? L〇12〇」如表所示，愈伤组织分化率最高达到
89%，增值糸数为4-6。
[0121] 5、生根培养
[0122] 将愈伤组织分化出的组培苗培养到4-5cm高时，将其接种于生根培养基中培养，生根培养基是指添加有0.5-1.5mg/L的吲哚乙酸的1/2MS固体培养基(实施例1-5)。实验结果如表4:
[0123] 表4生根培养基实验结果 [01241
[
[0126] 如表所示，生根率达到100%，生根数为8-10条。
[0127] 6、组培苗移栽
[0128] 当植株根长长至1.5-2cm时，打开封口膜进行炼苗2-3天，移栽入砂:蛭石的重量比为1:1、经过温度为121°C以及压强为lOOkPa灭菌的基质中，前5-6天盖好封口膜，保持湿度为80%-90%，23-27°C条件下生长15-18天，期间每3天浇一次MS培养基无机盐溶液，之后移至室外土壤中生长，大大提高了牵牛花的成活率。
[0129] 本发明的培养基配方专门适合于对牵牛花的快速繁殖使用，愈伤组织诱导培养基可以诱导组织快速形成愈伤组织，愈伤组织分化培养基用于促进愈伤组织分化，提高增殖系数，生根培养基则可以大大促进组织的生根率，进而提高牵牛花的成活率;本发明的三个培养基配方协同作用，方便牵牛花组织的快速繁殖，为牵牛花花色基因工程的研究奠定基础。
【主权项】
1. 一种牵牛花快速繁殖培养基配方，其特征在于:包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤0.8-1.4毫克/升、萘乙酸1.5-2.5毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7-8克/升；愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤0.5-2.0毫克/升、萘乙酸0 . ΙΟ. 5毫克 /升、蔗糖30克 /升、植物琼脂7-8克 /升；生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸0.5-1.5毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼月旨7-8克/升，水500毫升。2. 根据权利要求1所述的一种牵牛花快速繁殖培养基配方，其特征在于:包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种，其中，愈伤组织诱导培养基配方:MS培养基1升，6-苄氨基嘌呤1.0-1.2毫克/升、萘乙酸1.5-2.0毫克/升、蔗糖30克/升、植物琼脂7-8克/升；愈伤组织分化培养基配方:MS培养基1升，6-节氨基噪呤1.0_1.5晕克/升、萘乙酸0 . ΙΟ. 3毫克 /升、蔗糖30克 /升、植物琼脂7-8克 /升；生根培养基配方:MS培养基500毫升、吲哚乙酸0.75-1.25毫克/升、蔗糖20克/升、植物琼脂7-8克/升，水500毫升。3. 权利要求1或2所述的培养基配方在牵牛花快速繁殖培养中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种牵牛花快速繁殖培养基配方，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基和生根培养基三种。本发明的培养基配方专门适合于对牵牛花的快速繁殖使用，愈伤组织诱导培养基可以诱导组织快速形成愈伤组织，愈伤组织分化培养基用于促进愈伤组织分化，提高增殖系数，生根培养基则可以大大促进组织的生根率，进而提高牵牛花的成活率；本发明的三个培养基配方协同作用，方便牵牛花组织的快速繁殖，为牵牛花花色基因工程的研究奠定基础。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105580733
【申请号】CN201510990256
【发明人】王丽艳, 荆瑞勇, 郭永霞, 孙强, 殷奎德
【申请人】黑龙江八一农垦大学
【公开日】2016年5月18日
【申请日】2015年12月25日