火龙果DREB1D基因参与逆境应答的分子调控
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第一章 前 言
1.1 植物抗逆转录因子的种类
1.2 植物DREB转录因子
1.2.1 DREB的结构特点
1.2.2 DREB的分类与功能
1.2.3 DREB参与植物的抗逆性
1.3 火龙果抗逆研究进展
1.4 目的与意义
1.5 技术路线
第二章 火龙果DREB转录因子的生物信息学及表达模式分析
2.1 植物材料
2.2 胁迫处理
2.3 实验试剂与仪器
2.3.1 实验试剂
2.3.2 实验仪器
2.3.3 引物序列
2.4 实验方法
2.4.1 HmDREB1D基因生物信息学分析
2.4.2 火龙果RNA提取及cDNA的合成与检测
2.4.3 HmDREB1D基因在非生物胁迫下的实时荧光定量分析
2.5 结果与分析
2.5.1 总RNA提取及反转录检测
2.5.2 非生物胁迫下HmDREB1D基因表达量
2.5.3 HmDREB1D基因的生物信息学分析
2.6 讨论
第三章 HmDREB1D基因的克隆、亚细胞定位及遗传转化
3.1 实验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 载体与菌株
3.1.3 实验所用培养基
3.2 实验试剂与仪器
3.2.1 实验试剂
3.2.2 实验仪器
3.2.3 引物序列
3.3 实验方法
3.3.1 HmDREB1D基因克隆
3.3.2 HmDREB1D基因启动子克隆及生物信息分析
3.3.3 转化农杆菌GV3101
3.3.4 HmDREB1D亚细胞定位分析
3.3.5 浸花法转化拟南芥
3.3.6 过表达转基因拟南芥的分子检测
3.3.7 叶盘法转化烟草
3.3.8 过表达转基因烟草的分子检测
3.4 结果与分析
3.4.1 HmDREB1D基因克隆及瞬时表达载体构建
3.4.2 HmDREB1D蛋白亚细胞定位
3.4.3 HmDREB1D基因启动子克隆
3.4.4 HmDREB1D基因启动子的顺式作用元件分析
3.4.5 HmDREB1D基因的克隆及稳定遗传载体构建
3.4.6 HmDREB1D过表达转基因拟南芥的获得
3.4.7 HmDREB1D超表达转基因拟南芥的鉴定
3.4.8 HmDREB1D基因过表达烟草植株的筛选
3.4.9 HmDREB1D超表达转基因烟草的鉴定
3.5 讨论
第四章 HmDREB1D基因的功能分析
4.1 实验材料
4.2 实验试剂
4.2.1 实验试剂
4.2.2 实验仪器
4.2.3 引物序列
4.3 实验方法
4.3.1 非生物胁迫下转基因株系抗逆性的研究
4.3.2 转基因拟南芥抗逆生理生化指标的测定
4.3.3 转基因拟烟草干旱胁迫的耐受性评价
4.3.4 数据统计分析
4.4 结果与分析
4.4.1 转基因拟南芥的生长指数
4.4.2 干旱胁迫对HmDREB1D转基因拟南芥形态的影响
4.4.3 高温胁迫对HmDREB1D转基因拟南芥形态的影响
4.4.4 低温胁迫对HmDREB1D转基因拟南芥形态的影响
4.4.5 干旱、高温和低温胁迫下生理生化指标的变化
4.4.6 逆境下转基因拟南芥应激相关基因的表达量
4.4.7 转基因烟草的生长指数
4.4.8 逆境下转基因烟草应激相关基因的表达量
4.5 讨论
第五章 结论与展望
5.1 主要结论
1）HmDREB1D基因及启动子克隆、生物信息学
2）HmDREB1D基因表达及亚细胞定位分析
3）HmDREB1D基因抗旱性分析
4）HmDREB1D基因功能分析
5.2 创新点
5.3 后续工作展望
致谢
参考文献
附录
声明
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