花生（Arachis hypogaea L.）花药和游离小孢子培养研究
【摘要】： 生物技术的发展和完善为花生育种提供了新的思路和手段,花药培养和游离小孢子培养技术的应用加快了许多作物的育种进程,为单倍体育种及遗传研究奠定基础,而有关栽培花生品种的花药培养研究鲜有报道。研究者进行野生花生花药培养,但只是获得愈伤组织,未分化出单倍体植株,关于花生小孢子培养的研究尚未报道。花药本文以22份花生栽培品种为材料进行花药和游离小孢子培养,同时对花培材料的小孢子发育时期、接种、诱导培养、继代培养、分化愈伤组织进行相关的研究讨论,以期建立高效的花培诱导体系,为单倍体育种及创制DH系提供理论依据。本试验结果如下:1小孢子发育时期与愈伤组织诱导率的关系(1)当花蕾纵径长为1.5~3.0 mm,以四分体时期为主;3.1~4.7 mm,以单核期为主;4.8~10 mm,以双核期为主。(2)花药培养结果表明,四分体时期、单核靠边期和双核期的愈伤组织诱导率分别为0.83%、30.42%和14.58%;小孢子培养结果表明,单核靠边期的诱导率最高,达到9.38%。2花药培养条件的筛选(1)不同的基因型材料具有不同的愈伤组织诱导率,在接种的22份材料中,花生栽培品种邢花4号最容易诱导出愈伤组织,诱导率达到30.42%。(2)本试验中蔗糖的浓度均为3%,在1/2MS+0.8mg/L NAA+8mg/L 6-BA+0.02mg/L KT的改良培养基内,愈伤组织的诱导效率最高,可到达26.25%。(3)通过研究培养基中不同激素种类及其组合对愈伤组织的诱导作用,在添加6-BA、NAA、IBA、TDZ、KT及其它们的组合中,以添加8.0 mg/L 6-BA、0.8 mg/L NAA、0.02 mg/L KT的MS培养基上愈伤组织诱导效果较好,且诱导的愈伤组织长势好、致密、绿色。在添加1.0 mg/L 6-BA、0.5 mg/L NAA的MSB5培养基中,可分化出茎和根,分化率达3%,比其它激素组合的培养基中分化率高。3游离小孢子培养条件的筛选(1)最易诱导出愈伤组织的品种是四粒红,小孢子单核靠边期取材最好,诱导率达9.38%;四粒红单蕾产胚数最多,平均每蕾产胚数为0.1个。(2)采用MS液体培养基进行游离小孢子培养,诱导率达9.38%;NLN液体培养基的诱导率为1.0%。(3)在附加4 mg/L 2,4-D,3 mg/L 6-BA和0.3 mg/L NAA改良的MS液体培养基上,小孢子的诱导率达到16.7%。(4)血球计数板测量小孢子密度为2.5×10~4个/mL时,花生品种四粒红获得了较高的愈伤组织的诱导率,为12.5%。
【学位授予单位】：河北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
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