荷花成花相关基因NnAP1的克隆与表达
荷花(Nelumbo nucifera Gaern)属于睡莲科,莲属的多年生水生草本花卉,花朵硕大,花香清淡,是我国重要的水生观赏植物。利用转基因技术培育新品种,是园林植物育种的研究热点之一,目前,已经克隆出许多植物的相关成花基因,但是关于荷花的成花基因研究鲜有报道。本研究以'红霞'为试验材料,根据已经克隆出的荷花AP1基因的保守序列和3'片段,运用RT-PCR和RACE,克隆出荷花AP1基因的全长序列,并对其生物信息学进行分析,通过相对荧光定量PCR的方法,对AP1基因在不同器官及不同发育时期中的表达特性进行了分析,同时,成功构建了AP 的植物表达载体。主要研究结果:1.运用RACE技术和RT-PCR技术克隆荷花AP1基因的cDNA全长利用已经获得荷花AP1基因保守片段,设计内外引物进行5' RACE扩增,并获得5'端序列,进行拼接获得荷花AP1基因的全长序列1141bp,其中开放阅读框795bp,编码264个氨基酸,GenBank登录号是:KF361315,命名为NnAP1。序列分析表明,AP1基因含有MADS-box和K结构域,属于MADS-box基因家族。在GenBank中进行同源性检索表明,NnAP1的氨基酸序列与其他植物具有很高的相似性,进化树分析表明,它们起源于相同的祖先。2.采用相对荧光定量的方法进行表达分析设计荧光定量PCR引物,以荷花的18S-rRNA作为内参基因对NnAP1基因在荷花不同时期不同器官的时空表达特性进行分析,不同基因的表达模式不同,实时荧光定量PCR分析表明,AP1基因在不同发育阶段的各个器官中都有表达,其中在盛花期的花中相对表达量为32.09,表达水平最高,在幼叶期和谢花期痕量表达,相对表达量平均都不足1,说明NnAP1与花发育的调控有关。3.AP1表达载体的构建运用酶切方法成功构建了AP 的植物表达载体,首先构建AP1-T载体,... （共55页)
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