2020.05.26 回答
(1)外植体的选择 常用的外植体有两类,一类是带芽的外植体,如茎尖、侧芽、鳞芽、原球茎等,一类根、茎、叶等营养器官和花药、花瓣、花轴、花萼、胚珠、果实等生殖器官。其中最常用的外植体是茎尖,通常切块在0.5厘米左右,培养脱毒种苗,常用茎尖分生组织部,长度为0.1毫米以下。
(2)外植体的灭菌 常用的消毒剂有次氯酸钙、升汞、次氯酸钠、双氧水、70%酒精等。
(3)外植体接种 外植体接种需在无菌条件下进行。工作人员应穿工作服,戴口罩,用70%酒精擦手,超净工作台上要用70%酒精擦净。接种用的剪刀、镊子和器皿都要求无菌。接种后的培养容器置培养室,室温应控制在23~26℃,每天12~16小时光照,光照度为1000~3000勒克斯。
(4)诱导侧芽、不定芽或胚状体 常用的基本培养基为MS培养基。激素的种类和浓度对外植体的分化和增殖起着重要的作用,不同的花卉对激素的种类和浓度要求有差异。
(5)诱导生根 继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根,要促使试管苗生根,须转移到生根培养基上,生根培养基一般应用1/2MS培养基,因为降低无机盐浓度有利于根的分化。不同盆栽花卉诱导生根时所需要的生长素的种类和浓度不同,一般常用吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)和吲哚丁酸(IBA)三种。
(6)炼苗 首先打开试管瓶塞,放阳光充足处让其锻炼1~2天,然后取出幼苗,用温水将琼脂冲洗掉,移栽到泥炭、珍珠岩、蛭石、砻糠灰等组成的基质中。基质使用前需高温消毒。移栽后要适当遮荫,可用塑料薄膜覆盖,保持较高空气湿度,温度维持在25℃左右,勿使阳光直晒。7~10天后要注意通风和补充浇水。20~40天,新梢开始生长后,小苗可转入正常管理。
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