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大花杓兰内生真菌多样性的研究
大花杓兰内生真菌多样性的研究 摘要：对大花杓兰（Cypripedium macranthum Sw.）内生真菌类群组成及多样性进行了分析。结果表明，从大花杓兰植株中分离到内生真菌59 株，利用ITS-rDNA序列分子鉴定法将大花杓兰内生真菌鉴定为18 个分类单元，分布在7纲9目11科16属。北京大花杓兰内生真菌包括12个属，内生真菌的多样性指数H=1.39、D=0.96，优势菌群为毛壳菌属（Chaetomium）和茎点霉属（Phoma）真菌，分别占总菌株数的15.25%和8.47%；吉林大花杓兰样品内生真菌归于9个属，内生真菌的多样性指数H=1.31、D=0.93，以毛壳菌属（Chaetomium）为优势菌群，占总菌株数的23.73%。由此可见，北京大花杓兰中内生真菌多样性高于吉林大花杓兰。 关键词：大花杓兰（Cypripedium macranthum Sw.）；内生真菌；分离；鉴定；多样性 中图分类号：Q939.5 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）06-1357-04 DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.06.019 Abstract： The composition and diversity of endophytic fungal taxa in Cypripedium macranthum Sw was analyzed. The results showed that a total of 59 fungal strains were isolated from C. macranthum. These fungi were belonged to 18 taxa containing 7 classes， 9 orders， 11 families and 16 generas with analyzing ITS-rDNA sequence. Endophytic fungal groups in Beijing C. Macranthum included to 12 generas， with the diversity index H of 1.39 and D of 0.96. Chaetomium（15.25%） and Phoma （8.47%） were two major fungal groups. Endophytic fungal groups in Jilin C. Macranthum included 9 generas， with the diversity index H of 1.31 and D of 0.93.Chaetomium belonged to the core group（23.73%）. Diversity of endophytic fungi in Beijing C. Macranthum was higher than that of Jilin C. Macranthum. Key words：Cypripedium macranthum； endophytic fungi； isolation； identification； diversity 大花杓兰（Cypripedium macranthum Sw.）为兰科杓兰属植物，其花大而艳丽，不仅是名贵的观赏花卉，还是濒危紧缺的药用植物，对全身浮肿、小便不利、风湿性腰腿痛、带下及跌打损伤等具有治疗作用[1]，疗效确切，经济价值很高。由于该植物的生态环境遭到严重破坏，资源几近枯竭。大花杓兰的繁殖率很低，虽可以产生大量的成熟种子，但因不含胚乳，自然条件下极难萌发。研究表明，几乎所有兰科植物均与真菌形成共生关系，很多内生真菌能促进兰科植物的种子萌发，加快植株的生长，提高繁殖率，增加宿主抗逆性，产生许多药用成分和新化合物等。通过对大花杓兰内生真菌的多样性进行研究，以期更加深入地了解大花杓兰与内生真菌的共生关系，为利用内生真菌促进大花杓兰种子萌发和生长，实现大花杓兰的快速繁殖提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 试验材料 供试材料为大花杓兰，分别采自北京市房山区百花山和吉林省通化县富江乡。 1.2 培养基 所用培养基为PDA培养基（马铃薯200 g，葡萄糖 20 g，琼脂12 g，去离子水1 000 mL）。 1.3 方法 1.3.1 内生真菌的分离 随机选取大花杓兰健康的根、茎、叶，用清水洗净，切成1 cm左右小段。采用体积分数为70%的乙醇浸泡30 s，无菌水冲洗，3% 次氯酸钠浸泡消毒，根、茎、叶消毒时间分别为2 min、4 min、1 min。无菌
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