多花黄精 Polygonatum cyrtonema Hua 是百合科黄精属多年生草本植物,它繁殖方式主要是有性繁殖(种子)和无性繁殖(根茎)两种方式。由于黄精种子难收集、种子发芽率低、而且种子繁殖育苗时间又长,这样就大大增加了黄精的栽培成本,种苗问题成了人工大面积种植的瓶颈。而现有黄精栽培基地的黄精品种也迫切需要对其进行提纯复壮,以培育高产抗病脱毒的种苗,此次试验对黄精的繁殖从无菌体系到种苗这一过程进行系统研究,以期直接供生产实践应用,从而促进黄精种苗的工厂化生产。
1 试验材料
多花黄精带芽根茎。
2 试验方法
2.1 外植体消毒由于采用黄精的带芽根茎,不可避免会在其表面附着许多杂菌,采用常规的灭菌方法污染较严重。延长灭菌时间,外植体损伤较重,不利于增殖。
本次外植体消毒流程:将黄精根茎从土中挖出,洗去泥土;用刀切取带芽根茎于洗洁精水溶液中浸泡5分钟,然后用自来水冲洗干净;再用75%乙醇擦洗表面,再用自来水冲洗干净;然后用洗洁精水浸泡5分钟,自来水冲洗60分钟;(以下步骤在超净工作台中完成)用75%乙醇浸泡30秒,无菌水清洗2次后,2.5%次氯酸钠浸泡3次,每次5分钟,期间用无菌水清洗2次,取出用无菌滤纸吸干水份,用刀切去伤口坏死部分准备接种。
采用多次短时灭菌法,虽然延长了灭菌时间,但降低了污染概率和灭菌剂对外植体的损伤。
2.2 芽诱导培养将上述外植体处理后接种在芽诱导培养基MS + 6-BA 2mg/L + 2,4-D 0.2mg/L上,30天后外植体均明显膨大,获得大量的无菌材料。将膨大的外植体切成0.25平方厘米小块接于上述培养基,再培养30天,即可获得大量无菌材料。
2.3 芽增殖壮苗培养将分化有不定芽的块茎切成直径0.5厘米大小接于不定芽的增殖与壮苗的培养基培养MS + 6-BA 4.0mg/L + 2,4-D 0.2mg/L + GA3 0.5mg/L上,培养45天左右,每块可增殖6-8棵可用于生根的无根苗,苗壮。
2.4 生根培养将得到的粗壮无根苗(同带芽根茎)单个切下接于生根培养基1/2MS + IBA 0.7mg/L上。培养30天左右,生根率可达95%。
2.5 培养条件培养基中均添加3%的蔗糖和0.5%的琼脂,pH值均为5.8-6.0,培养温度25±2℃,光照强度1500-2000lux,光照时间12小时/天。
2.6 组培苗移栽将已生根的黄精带芽根茎敞口炼苗3天,选取根数在4棵以上、平均跟长1cm以上的黄精根茎,用自来水冲去琼脂,栽种到基质(珍珠岩与蛭石2∶1混合)中。每隔7天施用1次营养液,30天后统计成活率达到85%以上。
2.1 外植体消毒 2.2 芽诱导培养 2.3 芽增殖壮苗培养 2.4 生根培养 2.5 培养条件 2.6 组培苗移栽目录
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