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不同品种竹叶主要化学成分分析及竹叶牙膏的制备

花匠小妙招
2024-11-04 04:25

摘要

目的:本课题对竹叶及其易混淆品种淡竹叶、苦竹叶开展主要化学成分分析和抗氧化活性成分研究,从而优选竹叶为主要原料,考察竹叶最佳提取工艺、蜂胶前处理方法和牙膏成型工艺,制备一款竹叶蜂胶牙膏,并为其初步建立质量标准,为竹叶健康产品的开发奠定基础。方法:首先,采用高效液相色谱法建立竹叶及其易混淆品种淡竹叶、苦竹叶中绿原酸、异荭草苷、荭草苷、异牡荆素等7种成分含量测定的方法,并进行方法学考察。其次,通过比较三种常用的抗氧化活性评价方法,优选DPPH自由基清除法对其活性成分和提取物进行体外抗氧化活性测定。再者,利用多元相关与回归的统计分析方法研究其成分含量与提取物抗氧化能力的相关性,探讨其主要的抗氧化活性成分,并优选出成分含量较高、活性较好的品种。通过单因素考察、正交试验设计和多指标综合评分法确定该品种的最佳提取工艺,再按《中国药典》(2015年版)一部蜂胶项下方法对蜂胶进行了质量研究,通过单因素试验考察了蜂胶的前处理方法,并以感官性状为主要指标优选牙膏最佳配方,合理制备了一款竹叶蜂胶牙膏。结果:1.确定了竹叶及其易混淆品种淡竹叶、苦竹叶的含量控制方法。借助高效液相色谱技术对其进行了成分分析,建立了以绿原酸、异荭草苷、荭草苷、异牡荆素、木犀草苷、木犀草素和芹菜素为指标成分的HPLC含量测定方法,该方法具有良好的准确性和可重复性(RSD<3%)。成分分析结果发现,淡竹叶中含日当药黄素,而苦竹叶和竹叶中均不含日当药黄素。淡竹叶各指标成分整体含量较低,而竹叶中活性成分整体含量较高,多数成分含量均明显高于淡竹叶和苦竹叶,其中异荭草苷含量约为淡竹叶的14倍,异牡荆素含量约为淡竹叶的29倍。2.通过抗氧化活性成分研究确定了优质品种。预试验中分别采用了ABTS法、FRAP法和DPPH法对竹叶及其易混淆品种淡竹叶、苦竹叶的指标成分和提取物的抗氧化能力进行了测定。结果发现,DPPH法稳定性好,可重复性强,数据准确、可靠,被选作本研究中抗氧化活性的评价方法,并以抗坏血酸VC、维生素E类似物Trolox等作为阳性药对照。结果表明,7个指标成分中有4个成分的抗氧化活性强于阳性对照VC(IC50=0.926 m M)和Trolox(IC50=0.973 m M),以木犀草素(IC50=0.422 m M)和木犀草苷(IC50=0.427 m M)抗氧化活性最强。7批淡竹叶清除DPPH自由基的IC50值为5.07±2.67 mg/m L,10批苦竹叶清除DPPH自由基的IC50值为3.24±1.15 mg/m L,9批竹叶清除DPPH自由基的IC50值为1.98±0.42 mg/m L,三者中以竹叶活性最强,且不同产地间差异最小,质量更稳定,为较优品种。多元相关与回归分析结果表明,芹菜素含量与淡竹叶抗氧化活性呈显著性正相关(P<0.01),异荭草苷含量与苦竹叶提取物抗氧化活性呈显著性正相关(P<0.01),荭草苷含量与竹叶提取物抗氧化活性呈显著性正相关(P<0.01)。因此进一步优选产地为浙江衢州(风干)的竹叶为后续产品制备的最佳原料药材。3.通过竹叶提取工艺研究确定了竹叶的最佳提取方法。以指标成分含量、总黄酮含量、DPPH自由基清除率为参考指标,并采用正交试验法、单因素考察法、综合评分法对竹叶进行了提取工艺的优化,确定了竹叶最佳提取工艺:竹叶药材中加入40倍量80%乙醇,浸泡30 min,加热回流提取两次,每次1 h,合并两次提取液,滤过,即得。该工艺条件下得到的提取液总黄酮转移率高达88.08%,DPPH自由基清除率为73.16%,结果稳定(RSD<3%),工艺合理可行。4.通过对蜂胶的质量研究及前处理方法考察,选择了经检验符合《中国药典》(2015年版)规定的合格蜂胶药材,并以适量80%乙醇充分浸提蜂胶得到蜂胶醇溶液,再以适当比例加入竹叶蜂胶牙膏的制备。单因素试验考察结果表明,以80%乙醇处理蜂胶,较药典方法而言,其提取液中各指标成分转移充分,且未见其余成分的明显缺失,结果稳定,方法合理、可行。5.确定了竹叶蜂胶牙膏的制备工艺。本课题选用了湿法溶胶制膏法进行竹叶蜂胶牙膏的制备,优化得到配方工艺为:非离子瓜尔胶0.75 g,羧甲基纤维素钠0.25 g,山梨醇40 g,甘油20 g,尼泊金乙酯0.1 g,尼泊金丙酯0.05 g,糖精钠0.35 g,二氧化硅18 g,十二烷基硫酸钠2 g,薄荷油1 g,水适量,竹叶提取液2 g,蜂胶提取液0.5 g。其制备工艺为:首先取配方量非离子瓜尔胶和羧甲基纤维素钠分散于甘油、山梨醇中,另取尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、糖精钠、提取物预溶于适量水中加入,搅拌、陈化,再依次加入二氧化硅、十二烷基硫酸钠、薄荷油,搅拌、陈化,即得。6.通过质量标准研究确定了竹叶蜂胶牙膏的质量标准(草案)。成品牙膏每支装100 g,外观呈细腻光亮的浅黄色膏体,气芳香,具清凉口感。试验表明,单一成分在牙膏中含量过低无法被准确检测,而黄酮类物质是竹叶和蜂胶中的主要有效成分,且含量较单一成分高,可实现定量研究,故选择以有效组分总黄酮的含量作为竹叶蜂胶牙膏的含测指标,并初步建立了竹叶蜂胶牙膏质量标准。本品每支含有效成分以总黄酮计算,不得少于400 mg。结论:本课题经实验研究,建立了可用于淡竹叶、苦竹叶和竹叶含量控制的方法,初步探索了其抗氧化活性物质基础,优化考察了竹叶的提取工艺、蜂胶的前处理方法和竹叶蜂胶牙膏成型工艺,合理制备了一款竹叶蜂胶牙膏,为竹叶资源的合理利用和竹叶系列健康产品的后续开发打下了坚实基础。展开▼