康乃馨植物组织培养
1、康乃馨植物组织培养康乃馨植物组织培养实验报告0 8级生物科学(2)班刘姣姣学号:2 0 084081 0 217康乃馨植物组织培养一、实验目的：掌握植物离体快速繁育原理、方法和完整过程。二、实验原理：香石竹(学名：Dia n thus c a r yoph y llu s )又名康乃馨，花 色艳丽，开花时间长，装饰效果好，是世界上最畅销的切花之一，具有 较高经济价值。由于病毒病侵害,常使植株矮化，花朵变小，花色产 生斑点，退色甚至不开花，影响切花产量和质量。通过茎尖分生组织 培养，能够获得“无病毒”的健康植株，对于引进的少而新的脱毒种苗, 再进行一次茎尖培养，进一步降低基础苗中的病毒含量，并通
2、过组织 培养的方法快速繁殖，在短期内，就可以获得大量的脱毒试管苗，使引 入材料迅速在生产上推广应用，取得明显的经济效益。三、实验仪器与材料：仪器:超净工作台、洒精灯、电炉、烧杯、玻璃棒、蹑子、解剖刀、 不锈钢碟子、纱布、记号笔、标签纸试剂：75%乙醇、0. 1%升汞、无菌水、MS培养基、IAA0. lmg/L、 BA 0. 5mg/L、pH5. 8-6,0.蔗糖、琼脂四、实验步骤：培养基的配方1、香石竹的生芽培养基M S + IAA ( 0 . 1 m g / L) + B A( 20mg / L) +NA A (0. 2mg/L) + 蔗糖(30g/L)+ 琼脂(8 g /L), pH5.
3、8-6 . 0,配制 0. 3L, 用小培养瓶分装1015瓶。另外，需要制备无菌水2 0瓶(大培养瓶)，每人3冷瓶,，纱布、 碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。2、香石竹的继代培养基MS+BA( 0. 3mg/L)+NAA (0. 2mg/L)+ 蔗糖(3 0g/L)+琼脂 (8g /L), PH5. 8 -6. 0,配制0. 3L,用小培养瓶分装1 0-15瓶。另外，需要制备无菌水20瓶(大培养瓶)，每人3-4瓶，纱布、 碟子若干,后二者分别用报纸包好一同灭菌。3、香石竹的生根培养基MS+生根培养基为 l/2MS+NAA( 0.075mg /L)+蔗糖(30g/L)+ 琼 脂(8g/L
4、),pH5. 8-60,配制0.3L,用小培养瓶分装10- 1 5瓶。另外，需要制备无菌水20瓶(大培养瓶)，每人3-4瓶，纱布、碟 子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。香石竹的生芽培养1、无菌操作准备将培养基、无菌水、及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯，照 射消毒2 0 -3 0 min,开送风开关,关紫外灯，通风lOmin后，打开照明 日光灯。洗手，用纱布吸取75%酒精擦手，擦拭超净台，擦拭培养 基和无菌水瓶，点燃洒精灯，银子、解剖刀、剪刀等接种工具灼烧灭 菌，待冷却后使用。2、外植体消毒选取香石竹叶腋间生出的侧芽为外殖体，用自来水冲洗半小时, 将材料上的泥土和灰尘及杂质冲洗干净，用
5、解剖刀切取所需组织，放 入培养瓶中，用75%的酒精浸泡消毒30 s ec,将材料移入0. 1%升汞 溶液浸泡1 0分钟，然后在超净台内用无菌水冲洗3 -4次。材料消毒 完成。3、外植体的制备将消毒好的材料用无菌滤纸吸去多余的水份，然后在无菌超净 工作台上，借助解剖刀剥离茎尖，剥取茎尖大小通常在0 . 3 mm左右。 以上操作均需在酒精灯火焰旁进行。4、外殖体接种用灭菌过的银子将切好的外植体接种到配置好的接种培养基上， 每瓶接2 3 （可以更多一些）块。接种培养基为MS + IAAO.lmg / L + 6- BA 0.5mg / L, P II 5 . 8,蔗糖 3%,琼脂 0. 7 5%。接
6、种 完成后盖上瓶盖，贴标签，注明材料名称、接种日期和姓名。5、培养与观察将培养瓶表而用酒精擦拭消毒，置于培养室培养。整理，清洁超净 工作台。香石竹的培养条件为温度251C, 昼夜光照16h,光照强 度2000 1 xo经过10天左右的培养，大部分茎尖开始萌动，逐渐长大, 2 0天左右即可长成一小丛植株。定期观察培养情况，包括观察日 期、生长情况、以及污染情况等,并做好记录。香石竹的继代培养1、无菌操作准备将培养基及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯，照射消毒 2 0 -30mi n ,开送风开关，关紫外灯，通风1 0 m i n后,打开照明日光 灯。洗手，用纱布吸取7 5 %酒精擦手，擦拭超
7、净台，擦拭培养基和无 菌水瓶，点燃酒精灯，银子、解剖刀、剪刀等接种工具灼烧灭菌，待冷 却后使用。2、无菌操作接种酒精灯火焰旁打开香石竹芽苗培养基，用银子取出香石竹芽苗，置于 无菌不锈钢碟子,用解剖刀将芽苗簇切割成含23芽苗，然后切去芽 苗的上端。3、培养将培养瓶表而用酒精擦拭消毒，置于培养室进行光照培养。整理、 清洁超净工作台。4、观察记录定期观察培养情况，包括观察日期、生长情况、以及污染情况等, 并做好记录。香石竹芽苗的诱导生根1、无菌操作准备将培养基、无菌水、及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯，照 射消毒2 0 -30min,开送风开关，关紫外灯，通风lOmin后，打开照 明日光灯。洗
8、手，用纱布吸取7 5 %酒精擦手,擦拭超净台，擦拭培养 基和无菌水瓶，点燃洒精灯，银子、解剖刀、剪刀等接种工具灼烧灭 菌，待冷却后使用。2、无菌操作接种酒精灯火焰旁打开香石竹培养瓶，用银子取出香石竹芽苗，置 于无菌不锈钢碟子,用解剖刀将芽苗的每个小芽分开。用蹑子将单个小芽插入生根培养基，每瓶接3个。盖上瓶盖，贴 上标签，注明材料名称、接种日期和姓名。3、培养将培养瓶表而用酒精擦拭消毒，置于培养室进行黑暗培养。整理、 清洁超净工作台。4、观察记录定期观察培养情况，包括观察日期、生长情况、以及污染情况等, 并做好记录。缓苗移栽试管苗在移栽前几天一般都需要进行炼苗，让它有个逐步适应 环境的过渡阶段，
9、一般方法是先将培养瓶从培养室拿到常温下放置， 然后将试管苗容器口上包扎的塞子或纸去掉放置几天,此时需注意保 持空气湿度，并防止朵菌污染，尤其是在炎热的夏季，由于气温较高， 当封口打开后，该容器就由原来的无菌状态转为有菌状态，朵菌容易 很快生长而污染试管苗。在去掉封口时采用培养基上加薄层水的处理 效果较好,即可提高湿度又可减少朵菌生长，但若放置时间较长则需 换水。待试管苗逐步适应外界的光照、温度和湿度后再进行移栽，即 可提高移栽成活率。(二)移栽技术移栽时，首先将试管苗从所培养的瓶中取出，取时要用银子小 心地操作，切勿把根系损坏，然后把根部粘附的琼脂漂洗掉，要求全 部除去，而且动作要轻，以减少伤根伤苗。琼脂中含有多种营养成份， 若不去掉，一旦条件适宜，微生物就会很快滋生，从而影响植株的生 长，甚至导致烂根死亡。移栽前，先将基质浇透水，并用一个筷子粗的竹签在基质中开一 穴，然后再将植株种植下去，最好让根舒展开，并防止弄伤幼苗。种 植时幼苗深度应适中，不能过深或过浅，覆土后需把苗周围基质压实, 也可只将容器摇几下待基质紧实即可，以防损伤试管苗的细弱根系和 根毛。移栽时最好用银子或细竹筷夹住苗后再种植在小盆内，移栽后 需轻浇薄水，再将苗移入高湿的环境中，保证空间湿度达90%以上。 五、实验结果与分析参考文献：1 王莲英，朱秀珍，虞佩珍.中国名贵花卉鉴
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