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菊花花瓣的组织培养.doc

花匠小妙招
2024-11-07 09:21

PAGE / NUMPAGES 生物技术综合实验（I）论文菊花组织培养专业名称：生物技术学生姓名：学号：电话：指导老师：涂毅 2016年12月目录 TOC o 1-3 h z u 生物技术综合实验（I）论文 1 菊花组织培养 1 理论部分 3 摘要 3 关键词 3 引言 3 实验部分 4 实验材料 4 实验方法 5 结果与讨论 10 实验结果 10 实验讨论 12 参考文献： 13 理论部分摘要通过组培试验，初步得出了菊花组培育苗时最佳的诱导培养墓配方:用花瓣做外植体，在诱导培养基上接种诱导成愈伤组织，然后再在分化培养基上快速分化，之后在生根培养基上生根壮苗，再出瓶培养成生产用苗。关键词菊花、组织培养、愈伤组织、激素引言菊花，菊科菊属，又称白帝、帝女花等，多年生宿根草本植物，原产我国，现世界各地均有栽培，品种多，花期各异，有春菊、夏菊、秋菊、寒菊等，花型多样，色彩繁多，分布广泛，在园林上应用广泛且深受人们喜爱。现在生产上多用扦插和嫁接繁殖，但该方法大面积绿化使用时成苗慢，尤其在北方地区冬季严寒，夏秋季为主要绿化季节；冬春季节为育苗季节，相对来说任务重，成本高。随着组培技术的发展，其快速、高效、保优等都将改变这种不足，因此推动菊花走向组培育苗的道路在北方地区有着广阔的前景。实验部分实验材料材料于10月初在武汉东湖学院附近菜市场购买的菊花（白色）的初开花瓣。试剂配制MS培养基母液所需药品、植物激素6-BA和NAA、HCl溶液和NaOH(AR)、95%乙醇、蔗糖、琼脂、2%次氯酸钠、Tween-80、75%乙醇、无菌水。仪器天平、烧杯、容量瓶、量筒、微量移液器、药匙、称量纸、玻璃棒、电炉（SK2-2-10，上海卓爵仪器设备有限公司）、PH试纸（5.0-7.0）、培养瓶、灭菌锅（YX-280B，上海三申医疗设备厂）、超净工作台（SW-CJ-2FD，浙江苏净器械厂）、光照培养箱（OLB-211GZ，上海博讯实业有限公司医疗设备厂）、酒精灯、培养皿、镊子、剪刀、解剖刀、无菌水、标签纸、记号笔。实验方法 MS基本培养基母液配方母液种类药品名称规定用量/（g/L）扩大倍数称取量/g 母液定容体积/ml MSI NH4NO3 KNO3 CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O KH2PO4 1.65 1.9 0.44 0.37 0.17 20 33 38 8.8 7.4 3.4 1000 MSⅡ KI H3BO3 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O 0.00083 0.0062 0.0223 0.0086 0.00065 0.000025 0.000025 200 0.0332 0.248 0.892 0.344 0.01 0.001 0.001 200 MSⅢ FeSO4·7H2O Na2-EDTA·2H2O 0.027785 0.03725 200 7.45 1.114 200 MSⅣ 烟酸盐酸吡哆醇盐酸硫胺醇甘氨酸肌醇 0.0005 0.0005 0.0001 0.002 0.1 200 0.01 0.01 0.002 0.04 2 200 注：将配制好的母液与4℃冰箱中保存备用，最好在1-2月用完。如发现霉菌或产生沉淀结晶，则不能再使用。培养基的配制及保存量取所需培养基总体积的2/3体积的蒸馏水。根据表上表中培养基配方，量取所需的各种元素的母液，称量各类药品。 MS基本培养基配方（200ml）所需成分加入体积或质量 MSI（大量元素母液20X） MSII（微量元素母液200X） MSIII(铁盐母液200X) MSVI（有机物母液200X）蔗糖琼脂 10mL 1mL 1mL 1mL 6g 1.4g 调节培养基的PH，用PH试纸测定。分别用1mol/L NaOH溶液或1mol/L HCl溶液来调节所配制培养基的PH至6-7之间（在调节时要比目标PH偏高因为在灭菌过程中由于糖等物质的降解PH会下降0.2-05）。分装培养基加热到至沸腾片刻，使琼脂充分溶解，烧杯内溶液呈透明。将配制并加热好的培养基分别装于洁净的平底试管中，塞上硅胶塞，然后和用报纸包好的培养基及用三角瓶装的蒸馏水一起在121℃高压灭菌20min。配置流程如下：称取琼脂1.4g，蔗糖6g 500ML的烧杯中加入150ML左右的水，加入琼脂，加热熔化，再加糖加入10ml的贮备液I，1ml贮备液II，1ml贮备液III，1ml贮备液IV 加1.5mg/L 6BA 40ul和0.5mg/L NAA 10