细菌和真菌双重荧光定量PCR试剂盒(探针法)
产品货号：
BTN15-688600
中文名称：
细菌和真菌双重荧光定量PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
Bacteria and Fungus Duplex Probe PCR Kit
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本产品仅可用于科研实验，严禁用于其他非科研用途！
本制品是百奥莱博公司以探针法PCR技术为基础开发的，专门用于细菌和真菌进行研究检测的qPCR试剂盒。
细菌(Bacteria)和真菌(Fungus)是两类重要的微生物。细菌是单细胞生物，个体微小，结构简单，没有成形的细胞核，属于原核生物。细菌形态多样，有球状、杆状和螺旋状等。细菌广泛分布于自然界，在物质循环、生物共生等方面发挥着重要作用。但部分细菌能引起人类和动植物的多种疾病。真菌具有真正的细胞核，属于真核生物。真菌形态和大小差异较大，有单细胞的酵母菌，也有多细胞的霉菌和大型真菌。真菌在食品加工、酿造、医药生产等领域有重要应用，然而也有一些真菌会引发人类和动植物的感染性疾病。总之，细菌和真菌在生态系统和人类生活中既有有益的一面，也可能带来一定的危害。因此对细菌和真菌进行快速检测具有重要的意义。
引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。
提供阳性对照，便于排除假阴性结果。
特异性高，引物是根据细菌和真菌DNA高度保守区设计，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
本制品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
细菌的探针用FAM标记，真菌的探针用Cy5标记。
本制品只能用于科研。
保存：-20℃，有效期一年。
细菌和真菌双重PCR引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入220μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
一、样品DNA的制备
用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
三、Probe PCR反应
做定性分析只做1次重复，需标记N+3+3个PCR管，其中N+3个用于上步得到的N+3个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于细菌PCR阳性对照，1个用于真菌PCR阳性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
成分样品管
N+3个PCR
阴性对照细菌PCR
阳性对照真菌PCR
阳性对照2×Probe qPCR MasterMix各10μL10μL10μL10μL细菌和真菌双重PCR引物-探针混合液各4μL4μL4μL4μLN+3个待测DNA样本各6μL不加不加不加超纯水不加6μL6μL6μL细菌PCR阳性对照(104拷贝/μL)不加不加5μL不加真菌PCR阳性对照(104拷贝/μL)不加不加不加5μL盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程温度时间预变性95℃5minPCR反应
(45个循环)95℃15sec60℃30sec(采集FAM通道和Cy5通道的
荧光信号，淬灭基团均为TAMRA)
四、数据处理
如果扩增阳性对照或制备阳性对照结果为阴性，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要重做扩增或制备或跟厂家联系。如果扩增阴性对照或制备阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系，购买新的引物和探针。如果阴性对照和阳性对照正常，则实验有效，可以进入后续分析。
对定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照的Ct必须大于40，或者没有Ct值。阳性对照的荧光信号必须有对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40。对待测样品，如果其FAM通道的Ct大于40则为细菌阴性，如果小于或等于40则为细菌阳性。如果其Cy5通道的Ct大于40则为真菌阴性，如果小于或等于40则为真菌阳性。
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