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蓝星花组培育苗方法及应用

花匠小妙招
2024-11-10 08:31

蓝星花组培育苗方法及应用

本发明涉及观赏植物组培，具体来说是一种蓝星花组培育苗方法及应用。

背景技术：

1、蓝星花（ evolvulus nuttallianus roem.et schult.）旋花科、土丁桂属植物。原产自美洲，在我国广东、广西、江西、云南和贵州等地均有引种种植。

2、目前蓝星花的繁育方法主要为种子繁殖，种子繁殖需使用当年采收的种子，且在播种前需要60℃的热水浸种，温热水催芽12-24小时后再播种，幼苗出土时病苗或弱苗居多，存在品质参差不一成活率不理想。同时在种子量不能满足时，扦插繁殖作为蓝星花的辅助繁殖方式，但扦插繁殖存在茎腐发生率高，扦插成活率大多在30%以内等缺点。

3、与此同时，蓝星花部分品种，如粉花单瓣，其几乎不能结籽，又有其扦插成活率低，使得不能结籽的粉化单瓣等品种的蓝星花几乎不能繁殖。

4、对于蓝星花，其存在茎中空，全株有白色汁液，茎、芽、叶等包被绒毛等，使得蓝星花在组培无菌体系建立过程中消毒技术难度极大。

技术实现思路

1、本发明针对目前蓝星花存在的问题，提供了一种消毒方便高效、可短时间内大量生产蓝星花优质种苗的组培繁育技术方法。

2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种蓝星花组培育苗方法，步骤包括：

3、（1）外植体选择与清洁：选择顶端幼嫩枝条，使用多菌灵50%粉剂500倍液浸泡24～36h后，用清水洗净；

4、（2）外植体消毒：先用75%酒精消毒20～30s、无菌水涮洗1～3次，后用0.2%双氧水浸泡消毒8～10h、无菌水涮洗3～5次，再用0.02%升汞消毒15～17min、无菌水涮洗7～8次，最后使用0.05%升泵消毒4～5min、无菌水涮洗2～3次；

5、（3）初代丛生芽诱导：消毒的外植体接种于初代丛生芽诱导培养基中，置于温度25±2℃，每日照光12h，光强2000～3000lx的光暗交替下培养50～60天；

6、所述初代丛生芽诱导培养基配方为：ms培养基+2,4-d 0.01～0.02mg/l+naa 0.02～0.04mg/l+zt 0.3～0.4mg/l+2-ip 0.1～0.3mg/l；

7、（4）继代丛生芽增殖：初代诱导丛生芽切成单芽接种于继代丛生芽增殖培养基中，置于温度25±2℃，每日照光12h，光强2000～3000lx的光暗交替下培养30～35天；

8、所述继代丛生芽增殖培养基配方为：改良ms培养基+naa 0.02～0.04mg/l+tdz0.5～0.7mg/l+br 0.01～0.04mg/l；

9、所述改良ms培养基配方为：硫酸镁浓度为1.04g/l，磷酸二氢钾浓度为0.47g/l，氯化钙浓度为0.10g/l，糖浓度为65g/l，ph调至5.2，其余元素不变；

10、（5）丛生芽生根：继代丛生芽切成单芽接种于生根培养基中，置于温度25±2℃，每日照光14h，光强2000～3000lx的光暗交替下培养20～25天；

11、所述生根培养基配方为：改良b5培养基+iaa 0.5～0.6mg/l+naa0.2～0.3mg/l+椰汁50～60ml/l+活性炭0.2～0.3mg/l；

12、所述改良b5培养基配方为：硫酸镁浓度为1.04g/l，磷酸二氢钠浓度为0.30g/l，氯化钙浓度为0.07g/l，糖浓度为40g/l，ph调至5.2，其余元素不变。

13、进一步的，步骤（2）中，先用75%酒精消毒25s、无菌水涮洗2次，后用0.2%双氧水浸泡消毒9h、无菌水涮洗4次，再用0.02%升泵溶液消毒16min、无菌水涮洗7次，最后使用0.05%升泵溶液消毒4min、无菌水涮洗3次。

14、进一步的，所述初代丛生芽诱导培养基配方为：ms培养基+2,4-d 0.01mg/l+naa0.03mg/l+zt 0.4mg/l+2-ip 0.2mg/l。

15、进一步的，所述继代丛生芽增殖培养基配方为：改良ms培养基+naa 0.03mg/l+tdz0.6mg/l+br 0.03mg/l。

16、进一步的，所述生根培养基配方为：改良b5培养基+iaa 0.55mg/l+naa 0.25mg/l+椰汁55ml/l+活性炭0.25mg/l。

17、本发明的有益技术效果是：

18、1、本发明在无菌体系建立过程中，采用多菌灵500倍液浸泡进行前期处理，消毒时使用适宜的浓度和消毒时长的酒精、双氧水消毒，同时使用低浓度升汞长时间消毒和高浓度升汞短时间消毒相结合，一方面可将蓝星花外植体的消毒污染率控制在40%以内，同时还能几乎不损伤外植体，使无污染的外植体几乎都能诱导出丛生芽。

19、2、本发明在初代时采用适宜浓度的2,4-d 、naa 、zt 和2-ip的组合，可使初代诱导率达到76%以上，在继代时采用适宜浓度的naa 、tdz 和br的组合，可使增殖系数高达4.5以上，而在生根培养时采用适宜浓度的iaa 和naa的组合，可使生根率达到98%及以上。

20、3、蓝星花在增殖以及生根过程中，极易发生老叶黄化并脱落，顶芽出现枯稍，从而使得整株生长缓慢甚至停滞，特别是在生根过程中，若出现老叶黄化脱落或顶芽枯稍，一方面影响苗的商品性，另一方面生根率大幅下降，本发明在增殖以及生根时，通过调整钙、镁、磷、钾以及糖的用量，同时降低ph至5.2，可有效降低老叶黄化脱落的发生，使蓝星花苗更加健康。

21、4、蓝星花一般栽植高度在8～15cm，茎较为健壮，但蓝星花在组培时，普遍存在茎细弱，顶芽过高等与蓝星花苗高质量标准相悖的状态，本发明在生根时使用适宜浓度的生长素，同时配合一定浓度的椰汁，一方面可使苗生根时间缩短到30～35天，另一方面可使苗更加矮壮（3～6cm）。

技术特征：

1.蓝星花组培育苗方法，其特征在于，步骤包括：

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤（2）中，先用75%酒精消毒25s、无菌水涮洗2次，后用0.2%双氧水浸泡消毒9h、无菌水涮洗4次，再用0.02%升泵溶液消毒16min、无菌水涮洗7次，最后使用0.05%升泵溶液消毒4min、无菌水涮洗3次。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述初代丛生芽诱导培养基配方为：ms培养基+2,4-d 0.01mg/l+naa 0.03mg/l+zt 0.4mg/l+2-ip 0.2mg/l。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述继代丛生芽增殖培养基配方为：改良ms培养基+naa 0.03mg/l+tdz 0.6mg/l+br 0.03mg/l。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述生根培养基配方为：改良b5培养基+iaa0.55mg/l+naa 0.25mg/l+椰汁55ml/l+活性炭0.25mg/l。

6.根据权利要求1-5任一项所述方法在蓝星花育苗中的应用。

技术总结
本发明涉及观赏植物组培技术领域，具体来说是一种蓝星花组培育苗的方法及应用，包括选取蓝星花顶端幼嫩枝条为外植体，清洁处理、消毒后接种至初代丛生芽诱导培养基中诱导出丛生芽，后转接至继代增殖培养基中获得更多的丛生芽，丛生芽最后接种于生根培养基中形成生根苗。本发明采用酒精、双氧水浸泡和升汞溶液消毒，较现有的消毒技术效果更佳，其主要是通过采用常规的酒精和升汞的同时，在中间环节添加了一定浓度的双氧水进行消毒，同时配合不同升汞浓度以及采用适宜的消毒时间方式，使外植体损伤降到最低，而有效的降低污染率，使得初代丛生芽诱导率可高达80%以上。

技术研发人员：邓国宾,赵腾飞,曾祥飞,邓清,宋文静,张洁,普伟,杨朝龙
受保护的技术使用者：西南林业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/8/15