首页 > 分享 > 十字花科蔬菜细菌性黑斑病菌快速检测方法的建立

十字花科蔬菜细菌性黑斑病菌快速检测方法的建立

花匠小妙招
2024-11-10 21:11

十字花科蔬菜细菌性黑斑病菌快速检测方法的建立

【摘要】：十字花科细菌性黑斑病是世界范围内为害比较严重的十字花科蔬菜细菌性病害之一,由丁香假单胞杆菌斑生致病变种(Pseudomonas syringae pv. maculicola)引起。近年来,细菌性黑斑病的发生趋势有所上升,对我国十字花科蔬菜生产造成严重威胁。十字花科细菌性黑斑病菌为典型的种传细菌性病害,因此种子检疫成为防治此病害的重要手段。但常规的病种子检测方法大多存在时间过长、精度不高、专一性不强等缺点。有鉴于此,本研究建立了一套快速、准确、灵敏的检测方法,用于检测十字花科蔬菜种子携带的病原细菌。本研究配制了选择性培养基,用于细菌性黑斑病菌的富集培养,同时抑制其他杂菌的生长;制备了细菌性黑斑病菌的抗血清,并使用间接ELISA法模拟种子带菌检测;设计并合成了特异性的细菌性黑斑病菌PCR检测引物,在模拟种子带菌检测实验中,菌体PCR的检测精度可达3×105CFU/ml;设计了TaqMan水解探针,并使用实时定量PCR对细菌性黑斑病菌进行了检测,检测精度达到3×103CFU/ml;成功地利用免疫超顺磁珠将免疫检测与PCR检测方法有机地结合起来,构建了IMS-PCR检测方法,并将检测精度提高到了3×102CFU/ml。本研究最终将PBS分离细菌、选择性培养基培养、免疫磁性分离与实时荧光定量菌体PCR等技术融合成为一套种子带菌的快速检测方法(BIO-IMS-(Realtime)-PCR),可成功地检测出1000粒种子中的一粒带菌种子,且信号较强。此检测方法的建立,为十字花科蔬菜生产中检测细菌性黑斑病,防治该病提供有力的技术支持。

【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010

1234187246572142592

1 喻法金;赵毓潮;毛张菊;秦仙姣;萝卜细菌性黑斑病在高山菜区发生规律观察[J];湖北植保;2007年03期 2 许志刚;沈秀萍;赵毓潮;萝卜细菌性黑斑病的检测与防治[J];植物检疫;2006年06期 3 廖晓兰,朱水芳,赵文军,罗宽,漆艳香水稻白叶枯病菌和水稻细菌性条斑病菌的实时荧光PCR快速检测鉴定[J];微生物学报;2003年05期 4 朱建裕,廖晓兰,高必达,朱水芳,陈红运,戴富泉梨火疫细菌实时荧光PCR和诱捕PCR-ELISA检测方法的建立[J];植物检疫;2003年01期 5 张长全花椰菜细菌性黑斑病的综合防治[J];蔬菜;2002年07期 6 王宁,韩金祥定量PCR技术研究进展[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2000年06期 7 郭立安,陈万录,朱宝泉,陈代杰磁性免疫微球的合成及其在基因重组IL-2纯化中的应用[J];细胞与分子免疫学杂志;1999年01期 8 李爱贞，李宣铿PAS－ELISA对感染细菌性条斑病稻种的带菌检测[J];湖南农业科学;1994年01期 9 许志刚,刘凤权,方中达用免疫分离法检测稻种上的白叶枯病菌[J];植物病理学报;1995年01期 10 许莉萍,赖文姜,罗瑞仙,许东,曾宪铭分泌抗水稻细菌性条斑菌单克隆抗体杂交瘤株的建立及其在种子检验上的应用[J];华南农业大学学报;1990年02期

1289887717202591744