首页 > 分享 > 花卉植物组织培养技术综述.docx

花卉植物组织培养技术综述.docx

花匠小妙招
2024-11-12 00:22

花卉植物组织培养技术学院：专业：姓名：学号：花卉的组织培养作者：迎彬、陈学政、卢文、王静、李振致淄博师专学2011第1期总第23期吊兰又称垂盆草、桂兰、钩兰、折鹤兰,西欧又叫蜘蛛草或飞机草,原产于南非,百合科多年生常绿草本植物。根肉质,叶细长,似兰花。叶簇生,似花朵,四季常绿,是著名的观叶花卉,被人们誉之为“空中花卉”。一、实验材料1.初代培养:选用一年生生长健壮无病害吊兰带芽茎段作外植体。材料来源是生物实验室吊兰。2.继代培养:初代培养后诱导出的胚性愈伤组织及丛芽。由于时间和实验室条件限制,我们直接将初代培养的吊兰丛芽转移到新的生根培养基进行生根培养。3.生根培养:各个初代培养试验中生长健壮的无根苗。4.移栽试验:生根培养和培养中长出根和茎的健壮幼苗。5.其它供试材料:萘乙酸(NAA)为分析纯级,中国医药(集团)上海化学试剂公司生产,有效成分≥99.0%;6-苄基腺嘌呤(6-BA)(分析纯),为中国医药(集团)上海化学试剂公司生产,有效成分98.0%;凝固剂用琼脂粉(化学纯),为上海SCRC国药集团化学试剂有限公司生产的琼脂粉(凝胶强度≥400)。糖为天津市化学试剂一厂生产的蔗糖(化学纯)。二、试验方法1.外植体的选取:带芽茎段选取健壮无病虫害幼茎为外植体,然后从盆栽母株中分割出当年长出的新生分株,从茎尖开始,在超净工作台上割为1cm长的茎段作为初代培养的外植体进行培养。2.初代培养:吊兰带芽茎段培养试验从无病虫害的盆栽母株中分割出当年长出的新生分株,用自来水冲洗干净,除去根及下部老化组织,小心剥去外面老叶(注意不要弄伤腋芽),然后在顶芽以上横切,去除叶片。先在实验室用洗衣粉液浸泡5min,后用不间断自来水冲洗10min。在超净工作台上,再从基部开始切为1cm长作为外植体(带有芽体的)。去掉没有芽体的茎段后,用75%酒精浸30秒,无菌水冲洗一次。再用10%NaClO浸泡,灭菌时间分别10min,然后用无菌水冲洗5～8次,接种到培养基上。培养7d后,统计污染率。一个月后统计分化率。3.生根试验：将生长健壮的无根苗单株切下,接到各生根培养基中。每个星期记录生根和整个植株的生长发育情况。4.小苗移栽试验将长出根的小苗放在阴棚中炼苗,一段时间后,洗净组培苗上面的培养基,假植到沙床上,浇透水,盖上薄膜,一星期后揭膜。7d后统计假植成活率,20d后移栽到花盆或大田。三、实验处理1.基本培养基基本培养基为MS,初代培养基和增殖培养基附加糖3%,琼脂0.5%;生根培养基不加说明的都用1/2MS附加糖6%,琼脂0.5%;配加不同浓度的激素;PH值为5.8～6.0。2.各阶段的培养基(1)吊兰茎段初代培养MS+6-BA1.0～3.0(单位为mg/L,下同)十NAA0.1～0.5,共9种培养基,分别为:MS+6-BA1.0+NAA0.1;MS+6-BA1.0+NAA0.2;MS+6-BA1.0+NAA0.5;MS+6-BA2.0+NAA0.1;MS+6-BA2.0+NAA0.2;MS+6-BA2.0+NAA0.5;MS+6-BA3.0+NAA0.1;MS+6-BA3.0+NAA0.2;MS+6-BA3.0+NAA0.5。(2)不定芽增殖培养MS+6-BA0.5～3.0(单位为mg/L,下同)十NAA0.1～0.5,共12种培养基,分别为:MS+6-BA0.5+NAA0.1;MS+6-BA0.5+NAA0.2;MS+6-BA0.5+NAA0.5;MS+6-BA1.0+NAA0.1;MS+6-BA1.0+NAA0.2;MS+6-BA1.0+NAA0.5;MS+6-BA2.0+NAA0.1;MS+6-BA2.0+NAA0.2;MS+6-BA2.0+NAA0.5;MS+6-BA3.0+NAA0.1;MS+6-BA3.0+NAA0.2;MS+6-BA3.0+NAA0.5。(3)生根试验①糖浓度对无菌苗生根的影响设5个浓度梯度:1/2MS+糖3%+NAA0.8;1/2MS+糖5%+NAAO.8;1/2MS+糖6%+NAAO.8;1/2MS+糖9%+NAAO.8;1/2MS+糖10%+NAA0.8。②大量元素浓度对无菌苗生根的影响设四个浓度梯度:1/4MS+糖6%+NAAO.8;1/2MS+糖6%+NAAO.8;3/4MS+糖6%+NAAO.8;MS+糖6%+NAAO.8。3.培养基的灭菌所有培养基均在1.1kg/cm2,121℃饱和蒸汽压下灭菌20min。四、培养条件培养室温度为22℃ ～28℃ ,每天光照12h,光照强度1600～2000Lx。五、结果与分析(一)无性培养系的建立1.外植体灭菌效果根据吊兰茎段的老嫩情况和受环境污染情况,将选取的材料在10%NaC