滇水金凤花距发育相关基因TCP4的克隆及表达分析

• 花匠小妙招
• 2024-11-14 23:42

Cloning and expression analysis of petal spur development related gene TCP4 in Impatiens uliginosa

LI Yang , ,, LI Fan, MENG Danchen, LI Linju, WEI Chunmei, HUANG Meijuan , ,, HUANG Haiquan , ,

College of Landscape Architecture and Horticulture Sciences, Southwest Forestry University/Southwest Research Center for Engineering Technology of Landscape Architecture (State Forestry and Grassland Administration)/Yunnan Engineering Research Center for Functional Flower Resources and Industrialization/Research and Development Center of Landscape Plants and Horticulture Flowers, Southwest Forestry University, Kunming 650224, Yunnan, China

摘要

为探究滇水金凤（Impatiens uliginosa）TCP4基因（IuTCP4）对花距发育的调控作用，通过反转录聚合酶链反应技术克隆其cDNA全长，对其序列进行生物信息学分析，并采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR）技术探讨IuTCP4基因在花距的不同发育阶段及不同组织部位的时空表达模式。结果表明：滇水金凤IuTCP4基因2个拷贝（IuTCP4.1和IuTCP4.2）的cDNA全长分别为1 194、1 173 bp，各编码397个和390个氨基酸，且均不包含内含子；IuTCP4.1和IuTCP4.2所编码的蛋白均为不稳定的亲水性蛋白，且均不存在信号肽和跨膜结构域，两者与茶（Camellia sinensis）、苦瓜（Momordica charantia）等15个物种TCP4蛋白的同源性达到66.11%。在系统发育树中这2个拷贝聚为一支，推测它们为旁系同源基因。qRT-PCR结果显示：IuTCP4.1在初期、开花期的花距和檐部存在差异性表达，且在初期的檐部表达量最高；IuTCP4.2在3个发育时期的花距和檐部均存在差异性表达，且在初期的花距中表达量最高。综上所述，IuTCP4基因在花距发育过程中具有一定的调控作用，且主要在花距发育初期发挥作用。上述结果为凤仙花花距发育机制、花形改良和新品种培育提供了一定的理论依据。

关键词：滇水金凤;花距;TCP4基因;基因克隆;表达分析

Abstract

To explore the regulation mechanism of TCP4 gene on the development of petal spur of Impatiens uliginosa, the full length cDNA of TCP4 gene in I. uliginosa (named as IuTCP4) was cloned by reverse transcription polymerase chain reaction, and its sequence was analyzed by bioinformatics. Then, real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR) was used to investigate the spatiotemporal expression pattern of IuTCP4 gene at different developmental stages and different tissue locations of petal spur. The results showed that the full-length cDNA of two copies (IuTCP4.1 and IuTCP4.2) of TCP4 gene in I. uliginosa were 1 194 bp and 1 173 bp, encoding 397 and 390 amino acids, respectively, and neither contained introns. Both of IuTCP4.1 and IuTCP4.2 encoded proteins were unstable and hydrophilic without signal peptide and transmembrane domain. The homology of amino acid sequences of TCP4 protein between I. uliginosa and other 15 species, such as tea (Camellia sinensis) and balsam pear (Momordica charantia), reached 66.11%. In the phylogenetic tree, IuTCP4.1 and IuTCP4.2 clustered into one branch, suggesting that the two copies of IuTCP4 are paralogous genes. The results of qRT-PCR showed that IuTCP4.1 was differentially expressed between petal spur and limb at both the early stage and blooming stage, with the highest expression quantity in the limb at the early stage; IuTCP4.2 was differentially expressed between petal spur and limb at all three developmental stages, and the highest expression quantity was observed in the petal spur at the early stage. In conclusion, IuTCP4 plays a certain regulatory role in the development of petal spur and mainly functions at the early stage of petal spur development. It is provided a theoretical basis for the development mechanism of petal spur, flower shape improvement and new variety cultivation of Impatiens.

Keywords：Impatiens uliginosa;petal spur;TCP4 gene;gene cloning;expression analysis

本文引用格式

李洋, 李凡, 孟丹晨, 李林菊, 魏春梅, 黄美娟, 黄海泉. 滇水金凤花距发育相关基因TCP4的克隆及表达分析. 浙江大学学报（农业与生命科学版）[J]. 2023, 49(3): 341-348 doi:10.3785/j.issn.1008-9209.2022.04.064

LI Yang, LI Fan, MENG Danchen, LI Linju, WEI Chunmei, HUANG Meijuan, HUANG Haiquan. Cloning and expression analysis of petal spur development related gene TCP4 in Impatiens uliginosa. Journal of Zhejiang University （Agriculture & Life Sciences）[J]. 2023, 49(3): 341-348 doi:10.3785/j.issn.1008-9209.2022.04.064

花距是植物的花瓣或萼片延伸形成的管状或兜状结构，广泛分布于凤仙花属（Impatiens）[1]、耧斗菜属（Aquilegia）[2]、柳穿鱼属（Linaria）[3]等多个植物类群中，是植物分类的重要依据之一[4]。花距通常会产生并存储花蜜以作为传粉者的“报酬”[5]，在植物的传粉过程中发挥着至关重要的作用[6]。花距与传粉者的互动会造成相应的选择压力，在长期的适应过程中，花距的形态和传粉者的种类都进化得更加特异，从而促进了生殖隔离，并提高了传粉效率[7]。花距的这种进化过程会促进植物谱系中物种的多样化，提高物种形成率，因此被认为是开花植物的一种关键创新[8-9]，是传粉学、进化论、生态学假说等众多研究的焦点[10-11]。

花距是从相对二维的花瓣原基上进行三维精细化发育的结果[2]，这个过程仅包括细胞分裂和/或各向异性的细胞伸长[12]。耧斗菜属植物与距药草（Centranthus ruber）具有类似的花距发育过程，主要分为2个阶段：第一阶段，花距从花瓣的基部开始生长，通过细胞分裂形成小的囊状凸起；进入第二阶段后，花距上的细胞分裂基本停止，通过高度定向的细胞延伸驱动花距的伸长。由于在第一阶段花距的长度仅占最终长度的很小一部分，因此，对于耧斗菜属植物与距药草而言，各向异性的细胞伸长是其花距发育的主要驱动力[13-15]。然而，对柳穿鱼属植物的研究表明，不同长度的花距中成熟细胞的各向异性没有显著差异，细胞的初始分裂次数及细胞数量是影响花距最终长度的重要因素[3]。这表明物种间会有不同的花距发育模式。

花距发育的物种差异同样也表现在分子机制上。对于柳穿鱼（Linaria vulgaris）、紫斑掌裂兰（Dactylorhiza fuchsii）、金鱼草（Antirrhinum majus）等植物而言，KNOX（KNOTTED 1-like homeobox）基因可能是调控花距形成的关键基因。KNOX不仅在柳穿鱼和紫斑掌裂兰的花瓣中有高水平的表达，而且在金鱼草的花瓣上会产生类花距的囊状突起[12,16-17]。然而，对耧斗菜属植物的研究表明：KNOX基因在整个花距发育时期的表达量都极低，调控花距发育的可能性极小；而特异性表达的TCP4基因与耧斗菜属植物花距的形成与发育密切相关[2]。TCP（TEOSINTE BRANCHED/CYCLOIDEA/PCF）转录因子具有调节花发育和影响花型结构的功能[18-21]。在耧斗菜花距发育的早期，AqTCP4起到细胞分裂抑制因子的作用，将细胞分裂限制在花距着生的特定圆形区域内，使细胞分裂从圆周向圆心推进，促使花距在花瓣上凸起；在之后的发育过程中，AqTCP4通过调控花距上细胞的精准定向使花距保持正确的形态生长，沉默AqTCP4的成熟花距会表现出极端的向外侧弯曲的形态畸变，且花距外侧会生长出多个畸形的囊状凸起[2]。由此可见，花距的形成和正常生长依赖于TCP4基因的特异性表达。TCP4基因通过调控细胞的增殖和定向对耧斗菜属植物花距的发育起到关键作用，但这种调控作用在包括凤仙花属的其他物种中尚未被研究证实，需要进一步的探索。

滇水金凤是隶属凤仙花科（Balsaminaceae）凤仙花属的一年生或多年生草本植物，在其唇瓣上生有一枚弯曲的花距，花形奇特、花色丰富艳丽，并具有花期长、抗逆性强、适应性广等特点，其野生种群覆盖面积广，生物量丰富，是优良的野生植物种质资源。目前，国内外对滇水金凤的研究主要集中在花色[22]和系统进化[23]等方面，而关于其花距发育机制的研究极少。经调查发现，滇水金凤的花距在长度、曲率及颜色等方面存在个体差异，尤其是位于云南省昆明市捞鱼河国家湿地公园内的种群还被发现在花距数量上变异的个体，目前，这一现象在其他植物上未见相关报道。因此，滇水金凤是非常理想和宝贵的花距研究材料。本研究对滇水金凤花距发育相关基因TCP4（命名为IuTCP4）进行了克隆和表达分析，以期为凤仙花花距发育机制、花形改良及新品种培育提供一定的基础数据和理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与处理

于云南省昆明市捞鱼河国家湿地公园内采集野生滇水金凤的种子并种植于西南林业大学苗木基地大棚中。在生长健壮的成熟植株上选择发育中期的花苞，取其完整唇瓣，立即置于液氮中冷冻，带回实验室后保存于－80 ℃冰箱中。

1.2 基因克隆

从本课题组所测的滇水金凤转录组数据中筛选出被注释为TCP4基因的2条序列，分别命名为IuTCP4.1和IuTCP4.2，设计扩增其全长的特异性引物，相关信息如表1所示。使用植物总RNA提取试剂盒（美国Omega Bio-Tek公司）和植物基因组DNA提取试剂盒（北京百泰克生物技术有限公司）分别提取滇水金凤花瓣的总RNA及基因组DNA（genomic DNA, gDNA），使用反转录试剂盒（北京全式金生物技术股份有限公司）进行第一链cDNA的合成。分别以滇水金凤cDNA及gDNA为模板进行聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）扩增。PCR扩增体系：2×Hieff® PCR Master Mix 25 μL，cDNA或gDNA模板1 μL，IuTCP4.1或IuTCP4.2特异性引物2 μL，用ddH2O补足至50 μL。PCR扩增程序：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，53 ℃（IuTCP4.1）或54 ℃（IuTCP4.2）退火30 s，72 ℃延伸75 s，35个循环；最后，72 ℃延伸10 min。

表1  IuTCP全长扩增引物序列

Table 1  Primer sequences of IuTCP for full length amplification

基因

Gene

引物序列（5´→3´）

Primer sequence (5´→3´)

IuTCP4.1

F: ATGGGAGGAGATACTCATAATACC

R: TTAATGGCGAGAATCGGAG

IuTCP4.2

F: ATGGGAAGAGGAGCTAACTC

R: TCAATCGATAATATTATTATGTTGAGAGTCGG

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PCR产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳检测后，使用胶回收试剂盒（北京百泰克生物技术有限公司）进行纯化。纯化产物与pMD18-T载体（日本TaKaRa公司）在16 ℃恒温金属浴锅中连接75 min，将连接产物转入大肠埃希菌（Escherichia coli）DH5α感受态细胞（德国Qiagen公司），于37 ℃摇床上振荡培养1 h，再将产物转入Luria-Bertani（LB）固体培养基，37 ℃培养12 h后，挑选白色单菌落到LB液体培养基中，37 ℃振荡培养12 h。以培养完成的菌液为模板，使用扩增全长的特异性引物（表1）进行PCR扩增，将阳性菌液送至生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序。

1.3 序列分析

使用DNAMAN软件翻译IuTCP4.1和IuTCP4.2的氨基酸序列，使用NCBI的BLAST工具（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）对这2个基因的核苷酸序列和氨基酸序列进行同源性比对，使用ProtParam在线软件（https://web.expasy.org/protparam/）进行蛋白质理化性质分析，通过德泰生物在线软件（http://www.detaibio.com/tools/）进行信号肽和跨膜结构域预测分析，使用MEGA-X软件构建系统进化树。

1.4 表达模式分析

取滇水金凤初期、中期、开花期的花距和檐部（图1），分别提取其RNA，反转录合成第一链cDNA并稀释10倍用作实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR）模板。设计qRT-PCR引物，内参基因为IuActin，引物序列如表2所示。qRT-PCR扩增体系：Hieff ® qPCR SYBR® Green Master Mix 10 μL，稀释10倍的第一链cDNA模板1 μL，IuTCP4.1或IuTCP4.2引物0.4 μL，用ddH2O补足至20 μL。qRT-PCR扩增程序：95 ℃预变性5 min；95 ℃变性10 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸20 s，40个循环。每个样品重复3次。

图1

图1  滇水金凤花距的3个发育时期（A）及其组织部位（B）

Fig. 1  Three stages of development (A) and tissue location (B) of petal spur in Impatiens uliginosa

表2  IuTCP qRT-PCR引物序列

Table 2  Primer sequences of IuTCP for qRT-PCR

基因

Gene

引物序列（5´→3´）

Primer sequence (5´→3´)

IuTCP4.1

F: AGATTGTCGAGGTTCAGGGC

R: TCACTCTGTTTCCTGCGGTC

IuTCP4.2

F: GGAGGAGTTCGTGGGACAAG

R: GCACCTACCGGGAAGAACA

IuActin

F: TGAATGTCCCTGCTGTTTG

R: ACCTTCCGCATAACTTTACC

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2 结果与分析

2.1 滇水金凤 IuTCP4 基因克隆及序列分析

分别以滇水金凤cDNA和gDNA为模板进行PCR扩增，其结果符合预期长度（图2）。IuTCP4.1和IuTCP4.2（GenBank登录号分别为ON107241和ON107242）的cDNA全长分别为1 194、1 173 bp，各编码397个和390个氨基酸，测序结果表明两者的gDNA序列与cDNA序列完全一致，说明IuTCP4不含内含子。

图2

图2  IuTCP4.1 和 IuTCP4.2 的PCR扩增结果

M：DL2000+ DNA标志物（marker）；1：IuTCP4.1 cDNA；2：IuTCP4.1 gDNA；3：IuTCP4.2 cDNA；4：IuTCP4.2 gDNA。

Fig. 2  PCR amplification results of IuTCP4.1 and IuTCP4.2

2.2 滇水金凤IuTCP4蛋白生物信息学分析

对滇水金凤IuTCP4蛋白进行生物信息学分析，结果如表3所示。IuTCP4.1和IuTCP4.2的分子量分别为42.81 kDa和42.83 kDa，理论等电点分别为6.43和6.22，不稳定指数分别为61.65和71.13，脂肪族氨基酸指数分别为56.24和60.28，亲水性平均系数均为负值，表明两者均为不稳定的亲水性蛋白，且均不存在信号肽和跨膜结构域。

表3  滇水金凤IuTCP4蛋白生物信息学分析

Table 3  Bioinformatics analysis of IuTCP4 protein in Impatiens uliginosa

参量 ParameterIuTCP4.1IuTCP4.2

分子量

Molecular weight/kDa

42.8142.83

理论等电点

Theoretical isoelectric

point (pI)

6.436.22

分子式

Molecular formula

C1 854H2 826N570O597S5C1 854H2 863N563O594S9

原子总数

Total number of atoms

5 8525 883

不稳定指数

Instability index

61.65（不稳定）71.13（不稳定）

脂肪族氨基酸指数

Aliphatic index

56.2460.28

亲水性平均系数

Grand average of

hydropathicity

－0.770－0.784

信号肽

Signal peptide

无无

跨膜结构域

Transmembrane

domain

无无

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2.3 滇水金凤IuTCP4蛋白序列同源性分析

将IuTCP4基因的2条蛋白序列在NCBI的BLAST中进行比对，结果（图3）表明，两者与茶（XP_028068857.1）、苦瓜（XP_022142918.1）等15个物种的TCP4蛋白同源，其平均序列同源性达到66.11%，尤其在位于N端20～105个氨基酸的位置具有很强的保守性（红色方框区），该区域属于TCP超家族的保守结构域。

图3

图3  滇水金凤IuTCP4蛋白序列同源性比对

Fig. 3  Sequence homology alignment of IuTCP4 protein in Impatiens uliginosa

2.4 滇水金凤IuTCP4蛋白系统进化分析

基于滇水金凤IuTCP4蛋白的同源序列构建系统进化树。如图4所示，该进化树分为2个大分支，其中，IuTCP4.1和IuTCP4.2单独聚为一个分支，其他物种聚为另一个分支。在该进化树中，同属的物种基本聚在一个分支内，如黄瓜属（Cucumis）、南瓜属（Cucurbita）、杨属（Populus）、凤仙花属，推测TCP4的蛋白结构在属内相对保守。IuTCP4.1和IuTCP4.2这一分支的支持度为99%，推测IuTCP4的2个基因为旁系同源关系；两者与其他物种均不在一个分支内，推测TCP4在滇水金凤中相较于其他物种变异较大；根据两者的分支长度推测，IuTCP4.1相对原始，而IuTCP4.2的进化时间相对较晚，变异相对较大。

图4

图4  TCP4蛋白同源序列的系统进化树

Fig. 4  Phylogenetic tree of TCP4 protein homologous sequences

2.5 滇水金凤 IuTCP4 基因表达分析

由图5可以看出：IuTCP4.1在花距中的表达呈逐渐降低的趋势；而在檐部的表达呈先降低后升高的趋势，其中，在初期的檐部表达量最高，其次是在开花期的檐部，且在这2个时期，IuTCP4.1在檐部的表达量分别是在花距中的6.6倍和7.8倍，存在显著差异（P＜0.05）。IuTCP4.2在花距中的表达呈先降低后升高的趋势，而在檐部的表达呈先升高后降低的趋势；在初期的花距中IuTCP4.2表达量最高，其次是在中期的檐部；IuTCP4.2在花距的3个发育时期均有差异性表达，其中，在初期和开花期，IuTCP4.2在花距中的表达量显著高于檐部，而在中期，其在檐部的表达量显著高于花距（P＜0.05）。综上所述，IuTCP4.1和IuTCP4.2在不同发育时期的花距和檐部基本存在差异表达的现象，推测IuTCP4基因参与了花距的发育调控，且主要在花距的发育初期起作用；而2个基因呈现出相反的表达模式，推测两者在花距发育过程中发挥了不同的功能。

图5

图5  IuTCP4 基因在滇水金凤3个时期花距和檐部的相对表达量

短栅上不同小写字母表示在P＜0.05水平差异有统计学意义，n=3。

Fig. 5  Relative expression quantity of IuTCP4 genes in petal spur and limbat three stages of Impatiens uliginosa

Different lowercase letters above bars show significant differences at the 0.05 probability level, and n=3.

3 讨论

目前，已报道的一些物种的TCP4为单拷贝基因[24-26]，而在滇水金凤中IuTCP4基因有2个拷贝，两者的cDNA全长分别为1 194 bp和1 173 bp，各编码397个和390个氨基酸，其gDNA序列与cDNA序列完全一致，不含内含子，这与在柑橘（Citrus）[27]、毛竹（Phyllostachys edulis）[28]、芥菜（Brassica juncea）[29]等植物中TCP4基因不包含内含子的结果一致。生物信息学分析表明，IuTCP4为不稳定的亲水性蛋白，不存在信号肽和跨膜结构域，与魏沙沙等[30]在茶树中的研究结果一致。同源性分析表明，2个IuTCP4蛋白与茶、苦瓜等15个物种中的TCP4蛋白同源性相对较高，平均达到66.11%，且均在N端20～105个氨基酸的位置具有高度保守的TCP超家族结构域；系统进化分析表明，2个IuTCP4蛋白在系统进化树中单独聚为一支，支持度达99%。以上结果说明，IuTCP4的2个拷贝编码的蛋白具有典型的TCP超家族结构域，两者高度保守，推测为旁系同源基因。

作为TCP基因家族的一员，TCP4基因广泛参与植物的生长发育过程，例如：在矮牵牛（Petunia hybrida）中TCP4基因参与调控植株的分枝、开花及叶片大小[31]；在拟南芥（Arabidopsis thaliana）中，TCP4基因通过抑制细胞分裂来调控叶片的形态[32]；抑制拟南芥[33]和仙客来（Cyclamen persicum）[34]花瓣中TCP4基因的表达会使花瓣形态发生改变，产生褶皱和弯曲。在耧斗菜中，AqTCP4基因准确的时空表达使花距上的细胞分裂在正确的时间和位置发生，从而调控花距的正常生长发育，且其在花距发育初期的檐部的表达量显著高于花距；作为细胞分裂抑制因子，AqTCP4使檐部与花距连接的圆周区域停止细胞分裂活动，但花距上细胞分裂仍正常进行，促使花距从花瓣上延伸出来[2]。在本研究中，IuTCP4.1在花距发育初期的表达模式与耧斗菜中AqTCP4基因一致，推测IuTCP4.1在滇水金凤花距发育的初期发挥着类似的调控作用，即抑制檐部基部花距着生处的细胞分裂以使花距生长；在发育中期，檐部与花距的表达量没有差异且比初期较低，推测在此阶段花距上的细胞分裂基本完成，进入了细胞伸长阶段；在开花期，花距中的表达量仍然维持在一个相对较低的水平，而在檐部的表达量大幅上升且显著高于花距，这可能与花瓣着色或花香物质合成等花发育晚期的活动有关。IuTCP4.2与IuTCP4.1的表达模式相反，且在系统进化树中IuTCP4.2的进化时间晚于IuTCP4.1，因此，推测IuTCP4.2进化出了不同的功能，在花距发育过程中发挥着不同的作用。尽管在耧斗菜花距发育中，AqTCP4起到抑制细胞分裂的作用，但是在拟南芥和金鱼草中，CIN型TCP基因具有促进花瓣细胞分裂的作用[35]，因此，IuTCP4.2可能是对IuTCP4.1功能的一种补充，在花距中发挥着正调控作用，促进花距生长发育。今后将结合细胞学、激素及基因功能验证等进一步研究IuTCP4基因在滇水金凤花距发育中的调控机制。

4 结论

本研究克隆了滇水金凤花距发育相关基因IuTCP4，并发现该基因在滇水金凤中有2个拷贝（IuTCP4.1和IuTCP4.2），它们的cDNA全长分别为1 194、1 173 bp，具有典型的TCP超家族结构域，说明两者为旁系同源基因。表达分析表明，IuTCP4基因在滇水金凤花距发育中起到一定的调控作用；但2个拷贝具有相反的表达模式，说明滇水金凤的花距发育可能有比耧斗菜等其他物种更精细化的调控机制，也说明花距的发育模式在不同物种间存在差异。本研究为滇水金凤花距发育机制与变异机制研究提供了科学依据。

参考文献

[1]

VLAŠÁNKOVÁ A, PADYŠÁKOVÁ E, BARTOŠ M, et al.

The nectar spur is not only a simple specialization for long-proboscid pollinators

[J]. New Phytologist, 2017, 215(4): 1574-1581. DOI: 10.1111/nph.14677

[本文引用: 1]

[2]

YANT L, COLLANI S, PUZEY J, et al.

Molecular basis for three-dimensional elaboration of the Aquilegia petal spur

[J]. Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences, 2015, 282(1803): 20142778. DOI: 10.1098/rspb.2014.2778

[本文引用: 5]

[3]

CULLEN E, FERNÁNDEZ-MAZUECOS M, GLOVER B J.

Evolution of nectar spur length in a clade of Linaria reflects changes in cell division rather than in cell expansion

[J]. Annals of Botany, 2018, 122(5): 801-809. DOI: 10.1093/aob/mcx213

[本文引用: 2]

[4]

RAHELIVOLOLONA E M, FISCHER E, JANSSENS S B, et al.

Phylogeny, infrageneric classification and species delimitation in the Malagasy Impatiens (Balsaminaceae)

[J]. PhytoKeys, 2018, 110: 51-67. DOI: 10.3897/phytokeys.110.28216

[本文引用: 1]

[5]

[本文引用: 1]

SUN H Q, LI A, BAN W, et al.

Morphological variation and its adaptive significance for Changnienia amoena, an endangered orchid

[J]. Biodiversity Science, 2005, 13(5): 376-386. (in Chinese with English abstract)

DOI:10.1360/biodiv.050070     [本文引用: 1]

[6]

STANG M, KLINKHAMER P G L, VAN DER MEIJDEN E.

Asymmetric specialization and extinction risk in plant-flower visitor webs: a matter of morphology or abundance?

[J]. Oecologia, 2007, 151(3): 442-453. DOI: 10.1007/s00442-006-0585-y

[本文引用: 1]

[7]

PACINI E, NEPI M, VESPRINI J L.

Nectar biodiversity: a short review

[J]. Plant Systematics and Evolution, 2003, 238(1/2/3/4): 7-21. DOI: 10.1007/s00606-002-0277-y

[本文引用: 1]

[8]

HODGES S A.

Floral nectar spurs and diversification

[J]. International Journal of Plant Sciences, 1997, 158(S6): S81-S88. DOI: 10.1086/297508

[本文引用: 1]

[9]

KAY K M, WHITTALL J B, HODGES S A.

A survey of nuclear ribosomal internal transcribed spacer substitution rates across angiosperms: an approximate molecular clock with life history effects

[J]. BMC Evolutionary Biology, 2006, 6: 36. DOI: 10.1186/1471-2148-6-36

[本文引用: 1]

[10]

KRAMER E M, HODGES S A.

Aquilegia as a model system for the evolution and ecology of petals

[J]. Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences, 2010, 365(1539): 477-490. DOI: 10.1098/rstb.2009.0230

[本文引用: 1]

[12]

BOX M S, DODSWORTH S, RUDALL P J, et al.

Charac-terization of Linaria KNOX genes suggests a role in petal-spur development

[J]. The Plant Journal, 2011, 68(4): 703-714. DOI: 10.1111/j.1365-313X.2011.04721.x

[本文引用: 2]

[13]

PUZEY J R, GERBODE S J, HODGES S A, et al.

Evolution of spur-length diversity in Aquilegia petals is achieved solely through cell-shape anisotropy

[J]. Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences, 2012, 279(1733): 1640-1645. DOI: 10.1098/rspb.2011.1873

[本文引用: 1]

[14]

SHARMA B, YANT L, HODGES S A, et al.

Understanding the development and evolution of novel floral form in Aquilegia

[J]. Current Opinion in Plant Biology, 2014, 17: 22-27. DOI: 10.1016/j.pbi.2013.10.006

[15]

MACK J L K, DAVIS A R.

The relationship between cell division and elongation during development of the nectar-yielding petal spur in Centranthus ruber (Valerianaceae)

[J]. Annals of Botany, 2015, 115(4): 641-649. DOI: 10.1093/aob/mcu261

[本文引用: 1]

[16]

GOLZ J F, KECK E J, HUDSON A.

Spontaneous mutations in KNOX genes give rise to a novel floral structure in Antirrhinum

[J]. Current Biology, 2002, 12(7): 515-522. DOI: 10.1016/s0960-9822(02)00721-2

[本文引用: 1]

[17]

BOX M S, DODSWORTH S, RUDALL P J, et al.

Flower-specific KNOX phenotype in the orchid Dactylorhiza fuchsii

[J]. Journal of Experimental Botany, 2012, 63(13): 4811-4819. DOI: 10.1093/jxb/ers152

[本文引用: 1]

[19]

TRÉMOUSAYGUE D, GARNIER L, BARDET C, et al.

Internal telomeric repeats and ‘TCP domain’ protein-binding sites co-operate to regulate gene expression in Arabidopsis thaliana cycling cells

[J]. The Plant Journal, 2003, 33(6): 957-966. DOI: 10.1046/j.1365-313x.2003.01682.x

[20]

BROHOLM S K, TÄHTIHARJU S, LAITINEN R A E, et al.

A TCP domain transcription factor controls flower type specification along the radial axis of the Gerbera (Asteraceae) inflorescence

[J]. PNAS, 2008, 105(26): 9117-9122. DOI: 10.1073/pnas.0801359105

[21]

[本文引用: 1]

ZHANG H Y, HU J Q, XIANG T H, et al.

Study on transformation of tobacco plant with flower symmetry gene LjCYC3 in Lotus japonicus

[J]. Journal of Zhejiang University (Agriculture and Life Sciences), 2011, 37(1): 13-21. (in Chinese with English abstract)

DOI:10.3785/j.issn.1008-9209.2011.01.003     [本文引用: 1]

[22]

[本文引用: 1]

LI X Y, LI Y, HUANG W L, et al.

Cloning and expression analysis of TTG1 homologous genes in Impatiens uliginosa

[J]. Molecular Plant Breeding, 2021, 19(21): 7030-7036. (in Chinese with English abstract)

DOI:10.13271/j.mpb.019.007030     [本文引用: 1]

[23]

LUO C, LI Y, BUDHATHOKI R, et al.

Complete chloroplast genomes of Impatiens cyanantha and Impatiens monticola: insights into genome structures, mutational hotspots, compara-tive and phylogenetic analysis with its congeneric species

[J]. PLoS ONE, 2021, 16(4): e0248182. DOI: 10.1371/journal.pone.0248182

[本文引用: 1]

[24]

[本文引用: 1]

LIU C H, LIANG N S, YU L, et al.

Cloning, analyzing and homologous expression of TCP4 transcription factor under abiotic stress and hormone signal in Fraxinus mandschurica

[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2017, 39(6): 22-31. (in Chinese with English abstract)

DOI:10.13332/j.1000-1522.20160359     [本文引用: 1]

[25]

LEI N, LI S X, PENG M.

Cloning and expression analysis of MeTCP4 transcription factor from cassava and construction of plant expression vector

[J]. Molecular Plant Breeding, 2018, 16(5): 1517-1523. (in Chinese with English abstract)

DOI:10.13271/j.mpb.016.001517    

[26]

朱煜.

紫草LeTCP4基因的克隆及功能分析

[D].

江苏,南京:

南京大学,2012.

[本文引用: 1]

ZHU Y. Cloning, expression and functional analysis of LeTCP 4

gene in Lithospermum erythrorhizon

[D].

Nanjing, Jiangsu:

Nanjing University, 2012. (in Chinese with English abstract)

[本文引用: 1]

[27]

[本文引用: 1]

ZHOU Y P, ZHANG Y J, YI H L.

Bioinformatics identification and expression analysis of the Citrus TCP gene family

[J]. Journal of Fruit Science, 2016, 33(5): 513-522. (in Chinese with English abstract)

DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20150192     [本文引用: 1]

[28]

[本文引用: 1]

LIU J, HUANG R, CHENG Z C, et al.

Genome-wide identification and the whole analysis of TCP gene family in moso bamboo (Phyllostachys edulis)

[J]. Genomics and Applied Biology, 2018, 37(12): 5388-5397. (in Chinese with English abstract)

DOI:10.13417/j.gab.037.005388     [本文引用: 1]

[29]

[本文引用: 1]

LI K J, TAN S S, SUN B, et al.

Genome-wide identification and analysis of TCP transcription factor family in Brassica juncea

[J]. Journal of Sichuan Agricultural University, 2019, 37(4): 459-468. (in Chinese with English abstract)

DOI:10.16036/j.issn.1000-2650.2019.04.005     [本文引用: 1]

[30]

[本文引用: 1]

WEI S S, QIU X F, CAI X L, et al.

Cloning and sequence analysis of transcription factors TCP4 gene in Tieguanyin (Camellia sinensis)

[J]. Acta Tea Sinica, 2018, 59(3): 113-119. (in Chinese with English abstract)

DOI:10.3969/j.issn.1007-4872.2018.03.001     [本文引用: 1]

[31]

陶聪聪.

矮牵牛TCP3和TCP4基因敲除对生长发育的影响

[D].

重庆:

西南大学,2018.

[本文引用: 1]

TAO C C.

Effects of TCP3 and TCP4 gene knockout on growth and development in Petunia

[D].

Chongqing:

Southwest University, 2018. (in Chinese with English abstract)

[本文引用: 1]

[32]

PALATNIK J F, ALLEN E, WU X L, et al.

Control of leaf morphogenesis by microRNAs

[J]. Nature, 2003, 425(6955): 257-263. DOI: 10.1038/nature01958

[本文引用: 1]

[33]

KOYAMA T, OHME-TAKAGI M, SATO F.

Generation of serrated and wavy petals by inhibition of the activity of TCP transcription factors in Arabidopsis thaliana

[J]. Plant Signaling & Behavior, 2011, 6(5): 697-699. DOI: 10.4161/psb.6.5.14979

[本文引用: 1]

[34]

TANAKA Y, YAMAMURA T, OSHIMA Y, et al.

Creating ruffled flower petals in Cyclamen persicum by expression of the chimeric cyclamen TCP repressor

[J]. Plant Biotechnology, 2011, 28(2): 141-147. DOI: 10.5511/plantbiotechnology.10.1227a

[本文引用: 1]

[35]

COSTA M M R, FOX S, HANNA A I, et al.

Evolution of regulatory interactions controlling floral asymmetry

[J]. Develop-ment, 2005, 132(22): 5093-5101. DOI: 10.1242/dev.02085

[本文引用: 1]

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