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【正文】 1948年,崔徴和 Skoog发现激素杠杆现象 1956年,发现 KT 细胞 胚状体 植株 Steward 胡萝卜 1958年 发展历史 2 20世纪 60年代后期,植物组织培养开始走向大规模应用阶段。 法国 Morel(1952年 )等以大丽花茎尖进行培养试验,得到了无病毒植株。通过原球茎途径快繁,成为“兰花工业” 19641966年,印度科学家 Guha 和Maheswari 在曼陀罗花药培养中首次由花粉诱导得到了单倍体植株。 1972年, Carlson 通过两个种的烟草原生质体融合培养,获得了第一个体细胞杂交的杂种植株。 植物组织培养的基本步骤 培养基的准备 培养材料的采集 消毒 制备外植体 接种和培养 芽和根的诱导 练苗移栽 涉及内容: 培养基及其配制 外植体的选择及处理 接种和培养(环境条件的控制) 芽和根的诱导 组培苗的练苗和移栽 ( 1)、培养基及其配制 基本培养基 MS, B5, HE, SH, ER, NT, KM8P, White, N6, RM, BM, Hoagland, CPW等 完全培养基 培养基中包括植物生长所必需的 16种营养元素和某些生理活性物质。 生长物质配制: IAA、 IBA、 GA3先溶于少量 95%酒精,再加水定容至一定浓度; NAA可溶于热水或少量 95%酒精中,再加水定容至一定浓度 2, 4D用 1MNaOH溶解后,再加水定容至一定浓度 KT和 BA先溶于少量 1MHCl中,再加水定容 玉米素先溶于少量 95%酒精中,再加热水至一定浓度。 培养基的配制 配制母液:按顺序加药,避免沉淀; 配制培养基:琼脂、糖、大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素、调 pH值 常用培养基 富盐平衡培养基: MS、 LS、 BL、 BM、ER 高硝态氮培养基: B N SH。 中盐培养基: Nitsch、 Miller、 Blaydes、H 低盐培养基: White、 WS、 HE、 HB 母液配制 母液配制顺序是: 用灵敏度为 。 往烧杯中加入适量蒸馏水。 将药品放入烧杯内 ,并用玻璃棒搅拌使其溶解 ,难溶时可适当加温以加速溶解。 要待一种药品完全溶解再加入下一种药品 所加入的药品应依次加入,直至药品全部加入溶解为止 ,定容 . 母液装入相应的瓶内,特别是有机成分的母液应该放入 4℃ 冰箱。 ( 2)、外植体的选择及处理 1 选择优良的基因型 从健壮的植株上取材 选择外植体的大小 选取外植体的时间 (季节因素、天气因素) ( 2)、外植体的选择及处理 2 取材母株的预处理 外植体休眠期的处理 外植体的消毒 外植体的消毒 第一,要选取植物组织内部无菌的材料 从健壮的植株上取材,不要取有伤口的或有病虫的材料; 晴天,最好是中午或下午取材,不要在阴雨天或露水未干时取材。 第二,杀死材料表面带有的各种微生物 常用消毒剂的使用及其效果 常用的消毒剂 漂白粉 : 一种常用的低毒有效的消毒剂,它是由多种成分组成的复合化合物,一般含 1020%( W/V)次氯酸钙,易吸潮散失有效氯而失效,使用浓度一般为 51
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