兰花组织培养技术 摘要:在适宜的条件下,将兰花植株的外植体在无菌环境中应用人工培养基,通过外植体的采集与处理、 培养基的制作、外植体的接种、继代增殖以及驯化移栽等操作技术,可在短期内获得大量幼小的无病毒植株,从而达到增殖扩繁的目的。组织培养技术是经济有效快速繁殖优良品种的方法,也是产生脱毒苗的重要途径。 关键词: 组织培养兰花外植体试管苗 花属兰科多年生草本植物,中国兰花为兰科属中的地生兰。其香味怡人,花色淡雅,品种丰富,素有“花中君子”之称。具有很强的观赏价值和经济价值,深受人们的喜爱。此外,其也是目前世界上栽培较广的切花材料之一,兰花的切花生产,需要大批量的种苗,要获得优质高产,兰花种苗必须具备种性一致,生长齐一,长势旺盛的特点。在种苗生产上运用最广泛的是组培快繁和分株。生产实践证明,运用组织培养快繁技术生产种苗,其长势旺盛,品种复壮,抗病性强,切花质量好,对加快优良品种的培育,挽救珍惜濒危种类等起到十分重要的作用。 兰花在植物分类学上属于单子叶植物中的一个科,为多年生草本植物,附生、地生或腐生。兰花根呈圆柱 状,属肉质组织,茎很短,高度约为2~ 3cm,兰叶大多叶边全缘,有的略有锯齿。其花属于不整齐花范畴,总 状花序。兰属植物的果实为蒴果,呈三角或六角形,俗称“兰荪“。 一、无菌培养物的建立 (一)培养容器的洗涤及培养基的制作 培养容器的洗涤 容器的洗涤是否干净直接影响组织培养的成败,为保证培养材料在瓶内生长健壮,在培养前期一定要对容 器进行彻底的洗涤与灭菌。以达到“瓶壁锃亮、水膜均匀,不挂水珠”为标准。洗涤时用洗衣粉水洗刷,再用 清水冲洗 3~4 次,干燥后备用。 培养基的制作 培养基是植物组织培养的“血液” ,血液的成分及其供应状况直接关系到外植体的生长于分化。组培快繁中 最常用的培养基主要是MS培养基。母液要根据药剂的化学性质分别配置,一般配成大量元素、 微量元素、铁盐、 有机物、激素类母液。其配置方法是先进行大量元素的配置,称量时应注意多余的药品不能回放在瓶中,应做 其它处理。电子天平在使用时先对其进行调平,然后进行微量元素母液、有机物母液的配制。 MS母液配好以后,则可进行培养基的制作,继之对琼脂和蔗糖进行称取、溶解,琼脂呈现半透明状时将 糖加入容器中溶解,再加入事先吸取好的各类母液混合均匀后转入1L 容量瓶中对其进行定容,然后根据培养基 的要求对 PH进行调整( PH值控制在 5.6 ~5.8 测定不得少于 3~4 次)。进行分装时,一般以培养瓶的1/4 ~ 1/3 为宜,分装后立即进行灭菌。 培养基采用湿热灭菌法,把分装后的培养瓶置入高压锅中进行高温高压灭菌。当压力升至0.11MPa(温度 121℃)时,维持 15~30min, 即可达到灭菌的目的。 (二)外植体的采集及接种 外植体的采集 外植体的采集是依据不同的培养目标而异。通常选取一些生长健壮的当年生枝条、饱满而未萌芽的侧芽作 为外植体。其取材季节对于大多数植物而言,都应在生长开始的季节采样,对于利用茎尖培养的植物一般材料 越小成活率越低,所以茎尖培养成活的临界大小应为一个茎尖分生组织带1~ 2 个叶原基,约为0.2 ~0.3mm,茎 段长约 0.5cm。 外植体的清洗 待外植体采回后,先用流水冲洗半小时左右,使其表面吸附物消除,在转入其他容器中加上洗涤剂进行清 洗;在将易感染的各部分剥去、洗净,再切去上部幼叶。 消毒与接种 接种是组织培养是否成功的关键因素。接种前必须对接种室、接种人员,接种材料进行彻底的消毒与灭菌。 针对外植体的灭菌处理,则先将外植体在75%的酒精中浸 10s,再用蒸馏水冲洗三次。再剥取2~ 3 片叶,放入 5%次氯酸钠水溶液5min,再用无菌水冲洗3~ 4 次,剥至留下最后一枚叶片,以生长点为中心切去0.3 ~0.4cm 的方块,将切下的外植体接入准备好的培养瓶中进行培养。 外植体经消毒接入启动培养基或者诱导培养基中诱导出花芽,再转入继代培养基中,则诱导产生簇生的原 球茎。 培养 培养温度为 20~25℃,每天 12~16h,光照强度为 1000~2000Lx。 二、继代增殖 经适宜培养后,约4~ 6 周后可在外植体周围形成许多球状物,即原球茎,将其分割接入培养基中,以促使 嫩茎长出更多的原球茎,从而分化培养成苗。切取茎尖时要带两个左右叶原基,茎尖大小对增值速率也有影响, 同时,继代周期对原球茎增殖也有影响原球茎随继代周期的延长而增加。 (一)试管苗生根壮苗培养 在生根培养基中,转入单株生长或单株丛生的无根小苗培养其生根。生根培养基多采用1/2MS 培养基,加 入适量生长素。当小植株生出3~ 5 条水平根,每根长2~3cm时为最适宜的出瓶炼苗阶段。通常将其从根状茎 基部切下转入壮苗培
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