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灯盏花素中药提取物的制备方法与流程

花匠小妙招
2024-11-18 00:05

灯盏花素中药提取物的制备方法与流程
本发明涉及一种灯盏花素中药提取物的制备方法，尤其是以乙醇为溶剂提取的制备方法。技术背景灯盏花又名灯盏细辛、东菊，属菊科植物短葶飞蓬erigeronbreviscapus(vant.)hand-mazz，主要分布于我国西南地区，尤以云南较多。灯盏花素是从灯盏细辛中提取的黄酮类有效成分，其主要有效成分是灯盏乙素。灯盏花素具有增加血流量、改善微循环、扩张血管、降低血粘度等作用，临床已广泛用于治疗脑梗塞、缺血性心脏病、眩晕、老年性痴呆及肾病综合征。目前灯盏花素主要以乙醇为溶剂提取。如：在现行《中华人民共和国药典》2015版一部收载的两种灯盏花素提取工艺，均为乙醇提取工艺，具体制法为：第一种：取灯盏细辛，粉碎成粗粉，加75％乙醇(6倍、4倍、4倍)加热回流提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至无醇味，加等体积水搅匀，静置过夜，滤过，滤液通过大孔吸附树脂(聚苯乙烯型)柱，用水洗脱，收集洗脱液，浓缩，沉淀，滤过，沉淀用10％硫酸溶液调ph值至2.0～2.5，静置过夜，滤过，沉淀用乙醇洗涤，再用水洗至中性，干燥，干燥品用乙醇精制，重结晶，结晶用乙醇、丙酮洗涤，干燥，粉碎，混合，即得。第二种：取灯盏细辛粉碎成粗粉，加入2～6倍量75％乙醇，加热回流提取三次，每次3小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.2(80℃)的清膏，加水适量，搅匀，加热至80℃，用5％氢氧化钠溶液调节ph值至8，搅拌使溶解，静置24小时，滤过，滤液用10％硫酸溶液调节ph值至1～3，搅拌，静置48小时，抽滤，沉淀用水洗至中性，或先用3～4倍量乙醇洗2～3次，再用水洗涤至中性。加入20倍量85％～95％乙醇及1％量的活性炭，或加入适量甲醇溶解后，加0.1％量的活性炭，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至原体积的60％～80％，静置使析出结晶，滤过，将所得结晶用45％乙醇洗涤5次，于50～80℃，减压真空干燥。取结晶物，加水适量，用30％精氨酸溶液或10％碳酸氢钠溶液调节ph值至7.0～7.5，加热使溶解，离心，取上清液，滤过，滤液通过大孔吸附树脂(聚苯乙烯型)柱，用水洗脱，收集洗脱液，滤过；或用5％盐酸调节ph值至1～3，静置，滤过，沉淀用水洗至中性，取沉淀，加入适量的水搅匀，加热，用20％～30％磷酸氢二钠溶液调节ph值至6.5～7，煮沸，冷却至35～55℃；减压浓缩，加入8～10倍量的丙酮，搅匀，静置，抽滤，用丙酮洗涤沉淀。取沉淀，加入适量50％～70％丙酮溶液拾成混悬液，用10％盐酸溶液调节ph值至1～2，静置，抽滤，取沉淀，用注射用水洗至中性，再用90％乙醇洗涤，烘干，即得。上述的第一种制备方法，“合并提取液，滤过，滤液浓缩至无醇味，加等体积水搅匀，静置过夜”。由于灯盏花素可溶于碱水，热水中略溶，在冷水中几乎不溶，如果浓缩液中不加入碱液，会导致浓缩液中大部分灯盏花素析出，产品收率过低，所以现行生产工艺中该方法已经不再使用。目前灯盏花素原料提取基本上采用的是第二种制备方法。技术实现要素：本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种针对性地去除乙醇提取所带来的杂质的灯盏花素中药提取物的制备方法。本发明所述的灯盏花素中药提取物的制备方法由以下步骤组成：一、醇提：将灯盏细辛全草用65～85％乙醇浸泡2-12小时，加热煮沸，每次1-2小时，提取3次以上，至提取液基本无色为止；二、浓缩：合并提取液，浓缩至60℃时相对密度为1.05～1.25的清膏；三、碱溶：在步骤二的清膏中加入清膏体积0.2～1倍的水稀释，并加入碱溶液调ph至5～8，静置，过滤，除去色素及其他不溶的杂质；四、乙醇或丙酮中酸沉：取步骤三滤液体积1～3倍的乙醇或丙酮，温度加热至40～60℃，加酸调ph值至1，加入滤液，边加边搅，持续加酸使混悬液ph值保持在1～3之间，同时加热使混悬液温度保持在35～55℃之间，加完滤液后，停止加热，静置6～18小时；五、过滤：将步骤四的混悬液过滤，沉淀先用乙醇洗涤，再用纯化水洗至中性；六、将步骤五得到的沉淀物，采用大孔树脂柱吸附、加碱成盐用丙酮精制便可得到符合药典标准的灯盏花素中药提取物。步骤三中所述的碱溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠中的一种或几种。氢氧化钠、氢氧化钾碱液浓度不宜超过10％，碳酸钠、碳酸氢钠浓度不宜超过30％，过高会破坏灯盏花素分子结构。步骤四中所述的酸为盐酸、硝酸、硫酸等无机酸或其他有机酸如冰醋酸中的一种或几种。盐酸、硝酸、硫酸浓度不宜超过10％，过高会破坏灯盏花素分子结构，生成烊盐。步骤四也可以取步骤三滤液体积1～3倍的乙醇或丙酮，温度加热至40～60℃，在加滤液前加酸调ph值至1，待滤液加完后再加酸调ph值至1～3，同时加热使混悬液温度保持在35～55℃之间，加完滤液后，停止加热，静置6～18小时。步骤六采用的是现行工艺制备方法，但精制灯盏花素时必须用丙酮，才能确保含量达到90％以上，符合国家药典标准。本发明与现行工艺的区别在于：现行工艺一般采用乙醇提取浓缩，加适量水加碱溶解后静置、过滤，滤液直接酸沉，因其中的缩合鞣质在酸水中不溶，随灯盏花素一起沉淀，导致灯盏花素含量低，且因含有大量粘稠的缩合鞣质，导致沉淀物非常难滤；本发明采用的工艺路径为：乙醇提取浓缩，加适量水加碱溶解后静置、过滤，将过滤后的滤液加入乙醇(或丙酮)中酸沉，利用缩合鞣质在有机溶剂中易溶解的特点，有效的去除滤液中的缩合鞣质，通过多次试制，采用此方法过滤后沉淀物中灯盏花素含量均在75％以上，其中，采用乙醇为溶剂缩合鞣质的去除率在90％以上，采用丙酮为溶剂则可完全去除缩合鞣质。而且，因去除了粘稠的缩合鞣质，极大地提高了过滤效率。杂质的鉴别及定量分析：分别取四组样品，每组均为灯盏花素原料药10克，其中样品1为实施例1所得产品，样品3为实施例2所得产品，样品2、4为现有技术得到的灯盏花素原料药。样品2的制备方法为：取挑选除去杂草、泥沙及石块的灯盏细辛全草100kg，投入提取罐内，加75％的乙醇(6倍、5倍、4倍)加热回流提取3次，将提取液浓缩至60℃时相对密度1.1，浓缩液体积为100l，加30l水再加10％碳酸氢钠溶液调浓缩液ph值至7，静置，过滤，滤液加盐酸调ph值至1，静置12小时，过滤，沉淀用乙醇洗涤，纯化水洗至中性。取沉淀，按2015版药典项下灯盏花素标准检测，灯盏花素含量为44.1％。样品4的制备方法为：取挑选除去杂草、泥沙及石块的灯盏细辛全草100kg，投入提取罐内，加75％的乙醇(6倍、5倍、4倍)加热回流提取3次，将提取液浓缩至60℃时相对密度1.1，浓缩液体积为100l，加30l水再加5％氢氧化钠溶液调ph值至7，静置，过滤，滤液加盐酸调ph值至2，静置，过滤，沉淀用乙醇洗涤，纯化水洗至中性。取沉淀，按2015版药典项下灯盏花素标准检测，灯盏花素含量40.4％。杂质的鉴别：1、分别取2克1、2、3、4号样品，加入适量纯化水搅拌成糊状，加10％碳酸氢钠溶液搅拌溶解，分别加入铁氰化钾的氨溶液，样品2、4呈深红色，并很快变成棕色，样品1略显色，样品3不变色，可判断样品2、4中含有鞣质，样品1含有少量鞣质。2、分别取2克1、2、3、4号样品，加入适量纯化水搅拌成糊状，加10％碳酸氢钠溶液搅拌溶解，分别加入三氯化铁溶液，样品2、4溶液呈绿色，样品1略显色，样品3无变化，可判断样品1、2、4中所含杂质为缩合鞣质。杂质的定量分析：分别取2克1、2、3、4号样品，按照药典采用磷钼钨酸比色法检测，样品1中含缩合鞣质0.2％，样品2、4中分别含缩合鞣质31.2％、33.9％。通过上述一系列的鉴别反应分析，可以判断样品2、4中的杂质基本为缩合鞣质，且含量较高。采用现行工艺，浓缩液碱溶过滤后直接加酸沉淀，因其中的缩合鞣质在酸水中的溶解度低，与灯盏花素一起产生沉淀，且缩合鞣质较为粘稠，过滤困难，影响生产效率。采用本发明制备方法因缩合鞣质在乙醇(丙酮)溶液中的溶解度较大，所以鞣质基本溶解在乙醇(丙酮)溶液中，沉淀物容易过滤，且沉淀物中的灯盏花素含量较高。杂质的对比分析，见表1：表1样品序号样品中有无缩合鞣质样品中缩合鞣质含量1少量0.2％2有31.2％3无04有33.9％灯盏花素含量对比分析：两种提取方法的高效液相色谱图的对比分析，见表2：表2附图说明图1为本发明实施例1高效液相色谱图。图2为本发明实施例2高效液相色谱图。图3为样品2高效液相色谱图。图4为样品4高效液相色谱图。图1中：序号保留时间峰面积备注12.7521.49227.5145.91839.3325.192412.14884.148513.9321338.42灯盏花素吸收峰，含量79.4％621.50595.857733.11520.083图2中：序号保留时间峰面积备注12.4993.30722.7405.47834.0174.50744.5249.12858.2803.97469.1771.631710.4243.819812.2472.696913.63167.1461015.7691369.52灯盏花素吸收峰，含量82.7％1117.3123.8541222.9712.0851324.52569.1901437.44516.243图3中：序号保留时间峰面积备注12.6492.91824.1874.6236.7392.9448.79313.023510.7679.313611.1255.259712.685731.80灯盏花素吸收峰，含量44.1％813.9173.890917.8083.4621018.4073.8191119.20213.9741226.22715.2761328.92845.643图4中：序号保留时间峰面积备注12.0559.1522.4927.8132.6511.1247.6253.8158.792.4269.814.57710.4813.54812.5817.85914.72712.76灯盏花素吸收峰，含量40.4％1017.212.621121.212.991222.7516.701332.3913.901434.7145.62具体实施方式实施例1：取挑选除去杂草、泥沙及石块的灯盏细辛全草100kg，投入提取罐内，加75％的乙醇，加热回流提取3次(6倍、5倍、4倍)，每次1小时。将提取液浓缩至60℃相对密度1.1，浓缩液体积为100l，利用灯盏花素在碱性溶液中易溶的性质，加30l水再加5％氢氧化钠溶液调浓缩液ph值至7，静置，过滤，滤液加入1.5倍量用盐酸将ph值调至1且温度加热至50℃的乙醇中，加热使混悬液温度保持在45～50℃，滤液加完后再次加盐酸调混悬液ph值至1，静置12小时，过滤，沉淀用乙醇洗涤，纯化水洗至中性。取沉淀，烤干，按2015版药典项下灯盏花素标准检测，灯盏花素含量为79.4％。实施例2：取挑选除去杂草、泥沙及石块的灯盏细辛全草100kg，投入提取罐内，加85％的乙醇按实施例1加热回流提取3次，合并提取液浓缩至60℃时相对密度1.1，浓缩液体积100l，加30l水再加10％碳酸氢钠溶液调浓缩液ph值至7，静置，过滤，滤液加入两倍量用盐酸将ph值调至1且温度加热至55℃的丙酮中，加滤液过程中，持续加盐酸使混悬液ph值保持在1～2之间，同时，加热使混悬液温度保持在45～50℃，滤液加完后，停止加热，静置12小时，过滤，沉淀用乙醇洗涤，再用纯化水洗至中性。取沉淀，烤干，按2015版药典项下灯盏花素标准检测，灯盏花素含量为82.7％。文中所述乙醇百分比为体积百分比。其它百分比为重量百分比。当前第1页12