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植物病害检疫检验技术真菌

花匠小妙招
2024-11-18 03:53

第四章植物病害检疫检验技术
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第一节植物检疫性真菌常见检疫检验技术
直接检验
比重检验
染色检验
洗涤检验
保湿萌芽检验
分离培养检验
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1、适用范围
混杂在种子间的较大病原体（线0℃温度下颜色更明显。
（五）染色检验法
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（六）解剖检查法
有许多病害或一些病害初发生阶段，在种子、苗木及其他植物产品表面没有明显的症状，诊断比较困难
有时为要了解病原物潜伏的场所，常常需要用解剖检验进行鉴定，如散黑穗病菌以菌丝体在胚中越冬,有的果树病害以菌丝体在花芽或鳞片中越冬。
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解剖检验主要采用徒手切片或切片机切片，经过染色，制成玻片标本后，放在显微镜下观察鉴定。对于某些病害或种子苗木及其产品，有时采用粗放的解剖方法也可进行检查。
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（七）保湿萌芽检验
原理：种子携带的真菌，无论外表黏附的还是潜伏种子内的，在种子萌发阶段即可开始侵染，甚至有些在种子还未萌发时就可长出病菌。
主要仪器及试剂：吸水纸、沙土、冰箱、培养箱等。
常规植物病理学方法
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保湿萌芽检验的方法：
1、保湿培养检验
2、沙内萌芽检验
3、土内萌芽检验
4、试管幼苗症状测定
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1．保湿培养检验
此法一般又分为：吸水纸法、冰冻吸水法和琼脂平皿法等。
(1) 吸水纸法
广泛用于各种类型的种子，包括禾谷类、豆类、麻类、烟草、各种蔬菜、观赏植物和树木种子等种传真菌病害的检验。
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吸水纸法的标准操作：
a 用三层无菌吸水纸，吸足无菌水后，滴掉多余的水，放人经消毒的培养皿内，将种子排列在吸水纸上。
b 各粒种子间要保持一定距离，一般不得少于1-，再将培养皿置于适当温湿度的恒温箱培养。
c 在培养期间，每天用12h光照和黑暗交替处理，保持一定周期。
d 作物种子和病菌一般经2-10d培养，种子表面就会长出待检病菌，最后进行镜检。
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优点:设备简单，应用范围广，操作方便；花费少，快速准确，易于掌握；受检病症立体感强，容易鉴定和便于制作标本等。
缺点:在此条件下，有些真菌的菌丝生长不旺盛和产孢量少，而很快被许多杂菌快速生长，超过或掩盖被检病菌。
吸水纸法的特点：
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(2)冰冻吸水法
这是一种改进的保湿培养法，其操作步骤如下：
a 种子排列在吸水纸上，一般谷物种子在10℃下保持3d，使其先萌芽。
b 20℃的温度下，保持2d（其他种子在20℃下保持4d)。
c 再将幼苗在-20℃的温度下，进行冰冻过夜，以死亡的幼苗作为培养基。
d 20℃的温度下，用光／暗交替处理12h，保持5-7d。
为了防止细菌的污染，可在吸水纸上加些抗生素，如2×10-4金霉素或土霉素等数滴。
优点：有利于病原物形成孢子，同时又避免因种子萌芽伸长后造成相互覆盖，便于检查。
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(3)琼脂平皿法
此法与吸水纸法所不同之处，%-％琼脂，经灭菌后倒入无菌培养皿中，制成一定厚度的平面，代替吸水纸。
优点：因含水量均匀一致，有利于病原菌生长，皿内洁净，杂菌少，便于检查，因此常用于植物检疫检验。
琼脂平皿法用于棉花枯、黄萎病菌的检验。
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将沙用清水洗去泥垢，然后用沸水煮过，铺在经酒精或福尔马林液消毒过的萌芽器内，加冷开水至含沙量的60％左右。
沙面应低于容器边缘4cm，在铺平的沙上排列种子，间隔一定距离。排好种子后，再加细沙覆盖2-3cm，并加容器盖，置于25℃的温箱中。
当第一个幼芽长高碰到顶盖时，即应去盖。经过一定时期，将幼芽连根取出，并取出发芽的种子，根据幼苗和未发芽种子所表现的症状及种苗上有无孢子，就可计算发芽率及发病率。
2．沙内萌芽检验
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3．土内萌芽检验
将种子播种在含有灭菌土壤的盆钵或播种箱内，保持适宜发芽的温、湿度。待种子发芽出土后，进行检验，分析其发病情形。
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4．试管幼苗症状测定
做试管斜面，每管放人1粒种子，塞紧管口。再置于20℃下，用人工光照和黑暗各半处理。当幼苗达到管顶时，即可将管盖取掉。待培养期到后，检查幼苗症状。
保湿萌芽检验的优点:
容易检查根部和绿色部分，也可避免相互传染，但操作较麻烦，一般可用于检验珍贵的繁殖材料。
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保湿萌芽检验的缺点：
1、在对寄主生长发育不良，而适宜于病