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植物病害检检验技术真菌.ppt

花匠小妙招
2024-11-18 03:53

植物病害检检验技术真菌

第一节植物检疫性真菌常见检疫检验技术直接检验比重检验染色检验洗涤检验保湿萌芽检验分离培养检验检查要求：洗涤检验法原理：主要用于检查附着在种子表面的各种真菌孢子。种子表面常附着真菌孢子，将一定量的样品放入容器内，加一定量的无菌水，充分振荡，可使病菌孢子洗涤下来，而后离心后，可沉淀，镜检沉淀物可确定其种类和数量。主要仪器和试剂：振荡器、离心机、显微镜、0.1％吐温溶液等（四）比重检验法比重检验法一般用于检验种子、粮谷、豆类中的菌瘿、菌核和病秕籽粒等。（五）染色检验法（六）解剖检查法有许多病害或一些病害初发生阶段，在种子、苗木及其他植物产品表面没有明显的症状，诊断比较困难有时为要了解病原物潜伏的场所，常常需要用解剖检验进行鉴定，如散黑穗病菌以菌丝体在胚中越冬,有的果树病害以菌丝体在花芽或鳞片中越冬。吸水纸法的特点：优点:设备简单，应用范围广，操作方便；花费少，快速准确，易于掌握；受检病症立体感强，容易鉴定和便于制作标本等。缺点:在此条件下，有些真菌的菌丝生长不旺盛和产孢量少，而很快被许多杂菌快速生长，超过或掩盖被检病菌。（八）分离培养检验分离培养主要应用于检验潜伏于种子、苗木或其他植物新产品内部，不易发现和鉴定的病原菌；或当种子、苗木或其他植物产品上虽有病斑，但无特殊性的病原菌可供鉴定的场合。不同的病原菌，其所用的培养基、分离方法、培养条件等不尽相同，必须因病制宜地加以使用。通过分离培养所得到的待检病菌，应通过必要的步骤进行仔细鉴定。分离真菌的方法有： 1、组织分离法：将样品材料经表面消毒并冲洗后切成小块，轻轻置于培养基平板表面，写好标签后，即可培养观察。（九）接种方法（十）核酸技术第二节植物病原细菌检疫检验技术主讲：王晓东副教授（一）直接检测 1.直观检验直观检验是以症状为主的田间检测，植物细菌病害的产地检疫主要是以这种方式进行的。通过肉眼观察植株的症状、菌脓以及镜检观察，并结合田间诊断结果而做出。快速诊断细菌性病害方法----细菌溢（二）间接检测 1. 活菌检测（1）分离培养法检验 A 分离病原细菌一般用稀释分离法。稀释分离有以下两种方法。培养皿稀释分离法平板划线分离法培养皿稀释分离法平板划线分离法取小块病组织用灭菌玻棒研碎。静置一定时间，用灭菌的移植环蘸取以上组织液在琼胶平板上划线培养；先在平板的一侧顺序划3～5条线，再将培养皿转60°将移植环灭菌后,从第二条线末端，顺序划出3-5条线。目的都是使细菌分开形成分散的菌落。传统鉴定方法培养性状观察培养性状对细菌的鉴定是很重要的。不同属的植物病原细菌，它们的培养性状显然不同。培养性状要分别在培养液、琼胶斜面和琼胶平板上观察。描述时，要指明培养基、培养时间和培养温度等。细菌的色素非水溶性色素: 水溶性色素: 细菌的形态革兰氏染色法鞭毛染色生理和生物化学性状用细菌的培养物接种于一些特定的培养基上或检测管内，通过产酸、产气、颜色变化等反应，检测细菌的耐性、好氧或厌氧性、对碳素、氮素和大分子化合物的利用和分解能力等，以达到鉴定的目的。常见的生化反应目前，在传统测定的基础上，发展了测定细菌多项生理生化指标并且借助于计算机统计和决策的快速测定方法。常见的有生化测定试剂盒、Biolog测定、甲基脂肪酸气相色谱分析法等。（2）浓缩接种及离体叶检测法把繁殖材料或种子的提取液经浓缩后，通过注射、针刺、摩擦、剪叶或喷雾接种等方法，接种到感病植物上观测是否发病及其症状特点（3）噬菌体检验原理：噬菌体侵染细菌，裂解寄主细胞，在固体平板上培养，则出现噬菌斑。噬菌体具有专化性，利用此特点，可鉴别细菌的种类。噬菌体是侵染细菌的病毒，能在活细菌细胞中寄生、繁殖，并裂解寄主细胞。过敏性反应——致病性的初步测定为了确定分离到的大量菌种哪些是致病性的，用常规接种方法比较费事，有的要经过相当长的时间。用植物的过敏性反应，来快速筛选致病性细菌。方法是将浓度107/ml的细菌的悬浮液注射在烟草叶片的细胞间致病性细菌往往在6-24h内就在注射点周围出现过敏性枯斑，而腐生性细菌则不表现这种反应。注射Pseudomonas属细菌的，一般在6-10h 即出现枯斑，注射 Xanthomonas属细菌的要10-24h。烟草、蚕豆叶片也是很好的试验材料。（1）免疫吸附分离检测法原理：结合血清学与平板分离技术，利用与抗原高度亲和性的抗体，来捕获目标细菌，样本中其他细菌均被冲洗掉，再将目标细菌转移或释放到培养基上生长。方法：平皿免疫吸附评价测定法和免疫吸附稀释培养法