高粱花叶病毒CP蛋白与甘蔗ROC22叶绿体互作蛋白的筛选及验证

• 花匠小妙招
• 2024-11-18 04:23

【摘要】：甘蔗是广西最重要的经济作物之一,在广西经济发展过程中起着重要的作用。高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)是除真菌病害外造成广西蔗区重大经济损失的病毒性病害之一。大多数病毒在侵染植物后影响了叶绿体的功能,为了解SrMV与甘蔗叶绿体之间的互作关系,探索SrMV影响甘蔗叶绿体功能的机制,我们原核表达SrMV可溶性CP蛋白(CP:Coat Protein),纯化后固定化于亲和磁珠上做为诱饵蛋白。同时利用蔗糖密度梯度超高速离心技术分离纯化甘蔗ROC22叶绿体,对其进行超声波破碎,提取活性蛋白,用抗植物性β-actin抗体(β-actin:只存在于细胞质而不存在于植物叶绿体中的一种蛋白质)进行western blot验证叶绿体总蛋白纯净后,以此作为猎物蛋白,进行GST pull down实验,将得到的蛋白洗脱液进行质谱分析,经UniProt蛋白数据库(http://www.uniprot.org/)比对后得到两次重复以上的候选互作蛋白11个,分别为光系统ⅡD2蛋白质,细胞色素b559α亚基,光系统ⅠP700叶绿素a载脂蛋白A2,光系统ⅡCP43反应中心蛋白,光系统Ⅱ蛋白D1,ATP合酶α亚基,ATP合酶β亚基,光系统ⅡCP47反应中心蛋白,叶绿素a-b结合蛋白,光系统ⅠP700脱辅基蛋白A1,光系统Ⅱ47 kDa蛋白。其中ATP合酶α亚基经酵母双杂交和双分子荧光实验验证确定与SrMV CP蛋白存在相互作用,其他蛋白仍有待进一步验证。本研究为后期进一步研究SrMV CP蛋白与甘蔗叶绿体蛋白之间的互作机制打下了基础。

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