首页 > 分享 > 植物脱毒快繁技术.ppt

植物脱毒快繁技术.ppt

花匠小妙招
2024-11-18 15:49

《植物脱毒快繁技术.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《植物脱毒快繁技术.ppt（57页珍藏版）》请在知学网上搜索。

1、第五章、植物离体脱毒快繁技术目前，对细菌和真菌侵染的病害，可通过药物目前，对细菌和真菌侵染的病害，可通过药物处理达到治愈的目的。但还处理达到治愈的目的。但还没有治病毒的特效药没有治病毒的特效药。种子一般不带病毒种子一般不带病毒(豆类植物除外豆类植物除外)，种子繁殖可得，种子繁殖可得无毒植株。但对于无性繁殖植物，无毒植株。但对于无性繁殖植物，必须采取一些必须采取一些特殊方法脱除病毒特殊方法脱除病毒。脱毒快繁的一般过程1、诊断：首先了解供试材料感染病毒的种类、诊断：首先了解供试材料感染病毒的种类2、茎尖培养脱毒或结合热处理、茎尖培养脱毒或结合热处理3、鉴定、鉴定4、繁殖、繁殖5、驯化移植、驯化移

2、植1、热处理脱毒原理：病毒进入植物细胞后，随植物细胞病毒进入植物细胞后，随植物细胞DNA一起一起复制。热处理并不能杀死细胞，只是复制。热处理并不能杀死细胞，只是钝化病毒的活钝化病毒的活性性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失去病毒的侵染能力。去病毒的侵染能力。热处理是一种物理效应，可加速植物细胞分热处理是一种物理效应，可加速植物细胞分裂，在激烈分裂的细胞中正常核蛋白合成占优势，裂，在激烈分裂的细胞中正常核蛋白合成占优势，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。因此使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。因此加速加速分生组织细胞的分裂分生组织细胞的分裂，能

3、够获得无病毒植株。，能够获得无病毒植株。二、脱毒方法(一)热处理脱毒依据依据病毒对高温的敏感，寄主耐高温病毒对高温的敏感，寄主耐高温。利。利用这一差异，选择适当的温度和处理时间，进用这一差异，选择适当的温度和处理时间，进行高温处理，就能使寄主体内病毒浓度降低，行高温处理，就能使寄主体内病毒浓度降低，传递速度减慢或失去活性，而寄主细胞仍然存传递速度减慢或失去活性，而寄主细胞仍然存活，并加快分裂和生长。活，并加快分裂和生长。(1)温汤浸渍处理(2)热空气处理 2、热处理脱毒方法（1）温水浸渍处理适用于适用于休眠器官休眠器官，在，在50左右的温水中浸渍左右的温水中浸渍10min至数小时，方法简便易

4、行，但易使材料受伤。至数小时，方法简便易行，但易使材料受伤。（2）热空气处理热空气处理对热空气处理对活跃生长的茎尖活跃生长的茎尖效果较好。将生效果较好。将生长的盆栽植株移入温热治疗箱内，长的盆栽植株移入温热治疗箱内，一般一般35-40。处理时间因植物而异，短则几十分钟，长可达数月。处理时间因植物而异，短则几十分钟，长可达数月。热处理广泛应用于葡萄、草莓、马铃薯和菊热处理广泛应用于葡萄、草莓、马铃薯和菊花等植物。如：葡萄置于花等植物。如：葡萄置于38可去除扇叶病毒。可去除扇叶病毒。热处理对热处理对葡萄葡萄扇叶病毒、草莓斑驳病毒、苹扇叶病毒、草莓斑驳病毒、苹果花叶病毒等球形病毒有作用，而对另一些病

5、毒果花叶病毒等球形病毒有作用，而对另一些病毒不起作用，因此，必须与茎尖培养相结合脱毒效不起作用，因此，必须与茎尖培养相结合脱毒效果更好。果更好。植物的去病毒技术植物的去病毒技术，实质上就是采取不含，实质上就是采取不含病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.10.5mm带带12个叶原基的茎尖个叶原基的茎尖作为外植体，进行微繁作为外植体，进行微繁殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。（二）茎尖培养脱毒1、茎尖培养脱毒原理病毒在植物体内分布不均匀病毒在植物体内分布不均匀，其数量随植株，其数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染

6、部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染的程度越低，生长点即分生组织（约的程度越低，生长点即分生组织（约0.1-1mm）几乎不含或含病毒很少。几乎不含或含病毒很少。1、传导抑制。植物体、传导抑制。植物体病毒的移动病毒的移动主要靠主要靠2条途条途径：一是通过维管系统，而分生组织中尚未形成维径：一是通过维管系统，而分生组织中尚未形成维管系统；二是通过胞间连丝，但这条途径病毒移动管系统；二是通过胞间连丝，但这条途径病毒移动速度非常慢，速度非常慢，赶不上赶不上茎尖和根尖茎尖和根尖细胞不断分裂和活细胞不断分裂和活跃的生长速度。跃的生长速度。2、酶缺乏。茎尖中缺乏病毒合成所需的酶系，、酶缺乏。茎尖中缺乏

7、病毒合成所需的酶系，存在高水平内源激素，可抑制病毒的增殖。存在高水平内源激素，可抑制病毒的增殖。茎尖分生组织不带病毒茎尖分生组织不带病毒，可能有，可能有4方面的方面的原因原因：3、能量竞争。当植物细胞分裂、能量竞争。当植物细胞分裂DNA复制复制时，病毒时，病毒DNA随着复制。因此，植物细随着复制。因此，植物细胞分裂和病毒繁殖之间存在相互竞争。胞分裂和病毒繁殖之间存在相互竞争。在旺盛分裂的分生组织中，代谢活动很在旺盛分裂的分生组织中，代谢活动很高，正常核蛋白合成占优势，使病毒无高，正常核蛋白合成占优势，使病毒无法进行复制。法进行复制。4、抑制因子存在。在植物体内存在有一、抑制因子存在。在植物体内

8、存在有一种种“病毒钝化系统病毒钝化系统”（抑制因子假说），（抑制因子假说），在分生组织中的活性最高，因而使分生在分生组织中的活性最高，因而使分生组织不受侵染。组织不受侵染。2、培养基一般以一般以White、MS为基本培养基，提高钾盐为基本培养基，提高钾盐和铵盐含量有利于茎尖生长。和铵盐含量有利于茎尖生长。MS培养某些植物茎培养某些植物茎尖时，有些离子浓度过高应稀释。尖时，有些离子浓度过高应稀释。在双子叶植物中，激素可能在第在双子叶植物中，激素可能在第2对叶原基中对叶原基中合成，所以茎尖的圆锥组织生长激素不能自给，必合成，所以茎尖的圆锥组织生长激素不能自给，必须加入生长素与细胞分裂素，浓度要合适

9、。在生长须加入生长素与细胞分裂素，浓度要合适。在生长素中应避免用易促进愈伤组织化的素中应避免用易促进愈伤组织化的2，4-D，宜用宜用NAA或或IBA；细胞分裂素用细胞分裂素用KT或或BA；GA3对某些对某些植物茎尖培养有用。植物茎尖培养有用。材料选择、消毒材料选择、消毒微茎尖的剥取微茎尖的剥取接种接种3、茎尖的培养方法3、茎尖的培养方法需要一台需要一台解剖镜解剖镜（8-40倍）。倍）。剥离茎尖要剥离茎尖要迅速迅速并尽快接种，或在一个衬有并尽快接种，或在一个衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，以防茎尖变干以防茎尖变干。茎尖分生组织由于有彼此重叠的叶原基的严茎尖分生

10、组织由于有彼此重叠的叶原基的严密保护，只要仔细解剖，密保护，只要仔细解剖，(无须表面消毒无须表面消毒)就可得就可得到无菌的外植体。有时消毒处理会增加培养物的到无菌的外植体。有时消毒处理会增加培养物的污染率。污染率。即：叶片包被严紧的芽，如菊花、兰花，只即：叶片包被严紧的芽，如菊花、兰花，只须须75%酒精中浸蘸一下，而叶片包被松散的芽，酒精中浸蘸一下，而叶片包被松散的芽，如香石竹、马铃薯等，则要用如香石竹、马铃薯等，则要用0.1%次氯酸钠表次氯酸钠表面消毒面消毒10min。茎尖长茎尖长（）（）叶原基数叶原基数小植株数小植株数脱毒植株脱毒植株数数脱毒率脱毒率（）（）0.1215024480.2

11、72421842.90.646400离体茎尖大小对马铃薯脱毒效果的影响离体茎尖大小对马铃薯脱毒效果的影响切取茎尖越小脱毒效果越好，但太小不易成切取茎尖越小脱毒效果越好，但太小不易成活，过大又不能保证完全除去病毒，所以活，过大又不能保证完全除去病毒，所以茎尖茎尖大小要合适。大小要合适。剥取茎尖过程剥取茎尖过程:解剖镜解剖镜下用解剖针将叶片剥掉，下用解剖针将叶片剥掉，解剖针要常消毒解剖针要常消毒。当。当一个半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀一个半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将带片将带1-2个叶原基个叶原基的分生组织切下，接到培养基上。的分生组织切下，接到培养基上。将接

12、种的茎尖置于将接种的茎尖置于22左右温度下。左右温度下。2000-3000lx16h/d光照下培养。由于在低温和短日照下，茎尖有可能光照下培养。由于在低温和短日照下，茎尖有可能进入休眠；所以进入休眠；所以较高的温度和充足的日照时间必须保证较高的温度和充足的日照时间必须保证。微茎尖需数月才能成功。微茎尖需数月才能成功。茎尖培养的继代培养和生根培养和一般器茎尖培养的继代培养和生根培养和一般器官的培养相同。官的培养相同。茎尖培养脱毒，由于其脱毒效果好，后代茎尖培养脱毒，由于其脱毒效果好，后代稳定，所以是目前培育无病毒苗最广泛和最稳定，所以是目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径。重要的一个途径。4

13、、影响微茎尖成活及脱毒的因素（1）母体材料病毒侵染程度被单一病毒感染的植株脱毒较容易，复合感染的较难。被单一病毒感染的植株脱毒较容易，复合感染的较难。（2）外植体大小在最适培养条件下，在最适培养条件下，外植体的大小外植体的大小决定茎尖的存决定茎尖的存活率，外植体越大，产生再生植株的机会也就越多。活率，外植体越大，产生再生植株的机会也就越多。除了外植体的大小之外，除了外植体的大小之外，叶原基的存在叶原基的存在与否也影响分与否也影响分生组织形成植株的能力，一般认为，叶原基能向分生生组织形成植株的能力，一般认为，叶原基能向分生组织提供生长和分化所必需的生长素和细胞分裂素。组织提供生长和分化所必需的生

14、长素和细胞分裂素。（2）培养条件在茎尖培养中，在茎尖培养中，光下培养光下培养的效果通常比暗培养效果的效果通常比暗培养效果好，如马铃薯茎尖培养时，当茎已长到好，如马铃薯茎尖培养时，当茎已长到1cm高时，光高时，光照强度便增加到照强度便增加到4000lx。（3）外植体的生理状态茎尖最好要由茎尖最好要由活跃生长活跃生长的芽上切取。的芽上切取。取芽的时间也很重要，一般选取芽的时间也很重要，一般选萌动期萌动期较好。否则较好。否则采用适当的处理，打破休眠才能进行。采用适当的处理，打破休眠才能进行。（三）茎尖与热处理相结合方法能克服单独茎尖培养时，茎尖过小成活率太低，能克服单独茎尖培养时，茎尖过小成活率太低

15、，茎尖太大又脱除不掉病毒的缺点。茎尖太大又脱除不掉病毒的缺点。1、热处理后取较大茎尖培养获得脱毒苗。、热处理后取较大茎尖培养获得脱毒苗。2、取茎尖（或茎段）培养获得无菌苗。然后将试管、取茎尖（或茎段）培养获得无菌苗。然后将试管苗热处理，再取茎尖培养获得脱毒苗。苗热处理，再取茎尖培养获得脱毒苗。（四）其它途径脱毒 1、愈伤组织培养脱毒 2、茎尖微体嫁接 3、化学疗法脱毒 1、愈伤组织培养脱毒愈伤组织细胞带病原菌不均一，部分细胞不带病愈伤组织细胞带病原菌不均一，部分细胞不带病毒，由这些细胞再生的植株是无病毒的。多次继代的毒，由这些细胞再生的植株是无病毒的。多次继代的愈伤组织中病毒含量下降，甚至检测

16、不出病毒。愈伤组织中病毒含量下降，甚至检测不出病毒。愈伤组织的某些细胞不带病毒原因：愈伤组织的某些细胞不带病毒原因：1、病毒的复制速度赶不上细胞的增殖速度；、病毒的复制速度赶不上细胞的增殖速度；2、有些细胞通过突变获得了抗病毒的抗性。、有些细胞通过突变获得了抗病毒的抗性。愈伤组织脱毒的缺陷是植株遗传性不稳定，可愈伤组织脱毒的缺陷是植株遗传性不稳定，可能会产生变异植株。能会产生变异植株。2、茎尖微体嫁接木本植物茎尖培养难以生根成植株，将实生苗砧木本植物茎尖培养难以生根成植株，将实生苗砧木在人工培养基上种植培育，再从成年无病树枝上切木在人工培养基上种植培育，再从成年无病树枝上切取取0.4-1mm茎尖，在砧木上进行试管微体嫁接，以获茎尖，在砧木上进行试管微体嫁接，以获得无病毒幼苗。得无病毒幼苗。3、化学疗法脱毒病毒抑制剂三、脱毒快繁材料的选择应注意以下几点：应注意以下几点：1）品种要可靠）品种要可靠2）要选择经当地栽培确认的高产优质的品种来作）要选择经当地栽培确认的高产优质的品种来作为脱毒材料为脱毒材料3）名贵的植物良种）名贵的植物良种4）植物生长旺盛期，再生率高，脱毒效果好）植物生长旺盛