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园艺植物生物技术第二章园艺植物脱毒

花匠小妙招
2024-11-18 15:50

* * * * * * * * * 热处理的方法热水浸泡：是将剪下的接穗或种植材料，在 50~55 ℃的热水中浸泡数分钟或35 ℃温水处理30-40 h, 方法简便，但易使材料受损伤，到 55 ℃时则大多数植物会被杀死。该方法适合甘蔗、木本植物和休眠芽。高温空气是将旺盛生长的植物在 35~40 ℃条件下生长发育，处理时间的长短，因病毒种类不同可由数分钟到数周不等，热处理之后要立即把茎尖切下来嫁接到无病的砧木上或进行组培。该方法对活跃生长的茎尖效果较好，既能消除病毒，又能使寄生植物有较高的存活机会，目前热处理大多采用这种方法。缺陷：热处理只对那些球状的病毒 ( 如葡萄扇叶病毒、苹果花叶病毒 ) 或线状的病毒 ( 如马转薯 X，Y 病毒、康乃馨病毒 ) 有效果，而对杆状病毒 ( 如牛蒡斑驳病毒、千日红病毒 ) 不起作用。香石竹在38－40℃条件下经两个月处理可除去全部病毒。菊花在35℃－38℃的条件下处理60d可使病毒失活。马铃薯在37℃条件下处理10－20d能除去卷叶病毒。柑橘黄化病毒30℃－40℃条件下处理7－12周。 4.热处理结合茎尖培养或微嫁接技术脱毒将热处理与茎尖分生组织培养结合起来，则可以取稍大的茎尖进行培养，这样能够大大提高茎尖的成活率和脱毒率。 5.抗病毒药剂脱毒在茎尖培养和原生质体培养中，在培养基内加用抗病毒醚(ribavirin)，能抑制病毒复制。山家弘士 (1986)发现抗病毒醚对苹果褪绿叶斑病毒 (ACLSV) 和苹果茎沟病毒 (ASGV)，在苹果植株体内都有抑制增殖效果。目前用此法也不可能脱除所有病毒，如果使用不当，药害现象比较严重，此种脱毒处理还处于探索阶段。五脱毒苗的鉴定及检测技术脱毒效果的检测 1、形态检测法脱毒苗叶色浓绿，均匀一致，长势好 2、指示植物法指示植物法是利用病毒在其他植物上产生的枯斑和某些病理症状，作为鉴别病毒及病毒种类的标准，也叫枯斑或空斑测定法。接种某种病毒后能快速表现特有症状的植物称为指示植物（indicator plant），又称鉴别寄主。 2、接种方法汁液摩擦接种法嫁接法：小叶嫁接法双重芽嫁接法双重切接法指示植物直接嫁接法汁液摩擦接种法：从被鉴定植物上取1~3g幼叶 →研碎→过滤→取滤液涂抹于指示植物的叶面上（金刚砂）→保温15~25℃ →接种后2~6d 可见症状出现。血清学鉴定植物病毒是由蛋白质和核酸组成的核蛋白(抗原 antigen)，给动物注射后会产生一种相应的免疫球蛋白，称为抗体（antibody）抗体是动物在外来抗原的剌激下产生的一种免疫球蛋白，抗体主要存在于血清中，故含有抗体的血清即称为抗血清 (antiserum) 。这种抗原和抗体所引起的凝集或沉淀反应就叫做血清反应。因此，利用已知的抗体与未知的抗原能否特异结合形成抗原-抗体复合物（血清学反应）的情况可以判断病毒的有无。常用血清学鉴定方法（1）免疫电镜技术（2）酶联免疫吸附分析（3）直接组织免疫杂交分析抗原吸附免疫修饰（加入抗体）反应（染色，酶促反应）洗脱观察电子显微镜鉴定法现代电子显微镜 (electron microscope) 的分辨能力可达 0.5nm，因此利用电子显微镜观察，比生物学鉴定更直观，而且速度更快。对不表现可见症状的潜伏病毒来说，血清法和电镜法则是惟一可行的鉴定方法。能否观察到病毒，还取决于病毒浓度的高低，浓度低则不易观察到。分子生物学检测法核酸杂交技术（人工标记的病原互补DNA，杂交，显影） PCR技术双链核糖核酸分析病毒复制时以单链RNA为模板合成双链RNA，一般不易被降解。所以一旦植物感染病毒，体内就会存在双链RNA。所以提取待检测样本的总RNA，将DNA和单链RNA降解后，凝胶电泳分析样品中是否有双链RNA 脱毒苗的保存与繁殖原原种：脱毒试管苗出瓶移栽后的苗木被称作原原种 (initail stocks)，一般多在科研单位的隔离网室内保存。脱毒原原种苗每年应进行一次病毒检测，发现问题即淘汰。检测机构要将病毒检测结果报告有关部门。原种：脱毒原原种苗定植于无土壤线虫、无病源和防虫隔离区内，分株繁殖的第一代植株为脱毒原种苗由脱毒原种苗定植于无土壤线虫、无病源和防虫隔离区内，分株繁殖后代为脱毒生产用苗。脱毒苗的保存离体保存防虫纱网棚室隔离区种植