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洋甘菊fps基的克隆表达及盐胁迫研究.pdf文档全文免费阅读、在线看

花匠小妙招
2024-11-20 01:16

洋甘菊fps基的克隆表达及盐胁迫研究

燃料一捅晏洋甘菊@砌r耙口r肠c矗口啪。垅珊口L)又称母菊，为菊科母菊属一年生草本，含有挥发性芳香油，具有抑菌、消炎、解痉镇静、止痛及改善肺癌病人症状等作用，是一种极具开发价值的芳香植物和药用植物。洋甘菊挥发油的主要成分为倍半萜类物质，其生物合成途径属于类异戊二烯代谢途径，而法呢基焦磷酸合酶(FPS) 是这个途径的限速酶之一。本文克隆了洋甘菊FPS基因，构建了FPS基因的原核表达载体，并在大肠杆菌中诱导表达，为通过基因工程有效调控母菊奠等倍半萜类物质的生物合成奠定基础。另本文对洋甘菊盐胁迫后种子萌发特征，生理指标及显微结构进行了研究，为洋甘菊的进一步开发和利用提供理论依据和技术支撑。主要研究内容及结果如下： 1．克隆了洋甘菊FPS基因，并构建克隆载体进行测序及生物信息学分析。根据洋甘菊法呢基焦磷酸合酶m】埘A全长序列(AccessionNo：EF675758．1)，用软件Pr岫erI，remier 5设计引物，以洋甘菊花总RNA为模板，通过RT．PCR法获得约 l000bp大小的片段，并将其连接在pMD19．T载体上，转化到大肠杆菌感受态细胞进行培养，测序并进行生物信息学分析，结果表明：FPS基因全长为1098bp，行同源性比较，对其疏水性，蛋白跨膜及信号肽分析表明洋甘菊FPS为非跨膜蛋白。 2．构建了原核表达载体，诱导表达并优化了同的蛋白表达条件。将得到的洋重组质粒转至大肠杆菌BL2 检测得到同的蛋白分子量约为38KDa，并对目的蛋白进行Wasternblotting检测。对目的蛋白表达条件进行优化，表明目的蛋白最佳诱导时间为6小时。 3潮0定了不同盐(NaCl)浓度胁迫下种子的萌发率、发芽势、根长、茎长及生物量的变化，同时研究了叶绿素含量，可溶性糖，过氧化物酶，脯氨酸的变化，并用石蜡切片法观察了盐胁迫前后洋甘菊根，茎，叶等的显微结构的变化。结果表明：随着盐浓度的升高，洋甘菊种子萌发率，发芽势等萌发特征指标均呈下降趋势，相对盐害率增加，且随着盐浓度的升高，叶绿素含量先升高后降低，可溶性总糖、脯氨酸、过氧化物酶含量随盐浓度的升高呈上升趋势。盐胁迫前后洋甘菊外部形态发生明显变化，显微结构中叶肉细胞层数明显增加，盐胁迫前后的茎和根气隙增多，这些变化是对盐环境的一种适应。关键词：洋甘菊，法呢基焦磷酸合酶(FPS)，克隆，原核表达，蛋白质印迹，盐胁迫 AbStract German annual herbs台omAsteraceae Ch撇Qmile似al旷f幻n谊c矗铡omf冶L．)，an family，is 0neoftlle medicinalandaromaticmostusedworldwide．German plants Chamomileessemialoil hasbeen to pl’oved baving and e疏cts．Theessentialoil conSistsof wbjchisthe a删-cal’cillogcnic maillly sesqute巾enoids nlainactive inGern姗Chmomile．111e of component biosyntheticpathWay is sesquterpenoids relatedtois叩renoid the oneofthe biosynthesis．AndFamesyl