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四川两种林木真菌病害病原的分子检测技术研究

花匠小妙招
2024-11-20 12:58

四川两种林木真菌病害病原的分子检测技术研究

【摘要】： 由枯斑拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis funerea Desm.)引起的松赤枯病是松树幼龄林常见的病害,已成为我省主要针叶林木病害。云杉叶疫病是由一种根球壳孢菌(Rhizosphaera kalkhoffii Bubak.)引起的重要林木真菌病害,在云南香格里拉、川西地区均有发生。本研究以枯斑拟盘多毛孢菌、根球壳孢菌为研究对象,通过设计特异性引物扩增松树(Pinus.sp.)、云杉(Picea.sp)针叶基因组DNA的方法来快速、高效地检测松赤枯病病原、云杉叶疫病病原,为林木病害病原的快速分子诊断及其病害防控措施的制定提供参考。本研究以rDNA的ITS区序列在真菌分类上的应用为基础,针对枯斑拟盘多毛孢菌共合成引物7对,筛选出一对最优引物,标号为AF,其序列为：F(5'-3'):GTCAACCAGCGGAGGGAT18bpR(5'-3'):CGCCGTTGTATTTCAGGAG19bp针对根球壳孢菌共合成引物6对,筛选出一对最优引物,标号为EU2,其序列为：F(5'-3'):CCAACCAAACTCTTGTATTAA21bpR(5'-3'):GGGTATCCCTACCTGATCCGA21bp在松赤枯病病原菌的分子检测过程中,2011年3月前高山松(P.densata)、华山松(P.armandi)、马尾松(P.massoniana)和云南松(P.yunnanensis)的针叶上均没有检测到枯斑拟盘多毛孢菌的存在；2011年3月,在石象湖地区的马尾松松针和二郎山地区的云南松针尖部、中部开始检测到枯斑拟盘多毛孢菌的存在；2011年6月,在二郎山地区的云南松松针基部也检测到枯斑拟盘多毛孢菌的存在。在云杉叶疫病病原菌的分子诊断过程中,全年共采样9次,在2011年7月前,二郎山地区云杉针叶上均没有检测到根球壳孢菌,之后,开始检测出根球壳孢菌,但以8月的检测效果为佳。将每次检测到病原菌的PCR产物进行测序,所得序列经BLAST比对后均确定为该病原菌。试验结果表明,根据GenBank库已有的枯斑拟盘多毛孢菌、根球壳孢菌序列,通过其ITS区序列设计特异性引物,对松针、云杉基因组DNA进行PCR扩增的方法来检测松赤枯病、云杉叶疫病是可行的。使用这种方法可以提前两个月检测出松赤枯病病原菌,也可以初步推定二郎山地区云杉落针非云杉散斑壳菌[Lophoderm ium Piceae(Fuckel) V.Hohn]引起而是由根球壳孢菌所致,并发现该地区常见的川西云杉(P. likiangensis)和粗枝云杉(P.asperata)针叶组织中均有根球壳孢菌的存在。该方法可以在病害表现出症状前一定时间内快速准确地检测出病原菌是否存在,对林木病害的提前快速诊断方法与技术进行了有益探索,也为病害的进一步防控措施的拟定提供了依据。

【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012

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