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卵母细胞化学辅助激活液

花匠小妙招
2024-11-20 14:01

Cheacome mediumTM卵母细胞化学辅助激活液

Cheacome kit P1.0

（Porcine Oocytes chemical-assisted activation Medium）

（猪卵母细胞化学辅助激活液）

猪卵母细胞化学辅助激活液

产品价值：

Cheacome kit P1.0猪卵母细胞化学辅助激活液，含有6mL的Cheacom A液和B液，联合使用可以辅助激活200-230枚成熟卵母细胞或重构胚胎，与Matcome mediumTM 、Washcome mediumTM、Acticome mediumTM 、Blacome mediumTM、Mancome mediumTM和Transcome mediumTM系列产品联合使用，在优化条件下：

猪孤雌激活胚胎囊胚发育率在理想条件下可以达到80%左右，即可获得大约160-180枚孤雌激活囊胚；

猪体细胞克隆胚胎囊胚发育率在理想条件下可以达到60%以上的囊胚发育率，即可获大约得120-130枚体细胞克隆胚胎。

培养1-2d的早期猪体细胞克隆胚胎移植给代孕母猪后，代孕母猪的一个情期受胎率可以达到80%以上，平均窝产仔数可以达到5头以上。

产品用途：

Cheacome kit P1.0由Cheacome A液和 Cheacome B液组成，是一种猪卵母细胞、重构胚胎的电激活或化学激活（一般为离子霉素激活）后的辅助激活产品，用于孤雌激活胚胎（Parthenogenetic embryo）、单精子注射（Intracytoplasmic sperm injection，ICSI）胚胎、体细胞克隆（Somatic cell nuclear transfer，SCNT）胚胎和基因组编辑（Genome editing）胚胎的辅助激活，可取得高效的胚胎体外、体内发育效果，与Blacome mediumTM、Matcome mediumTM、Acticome mediumTM、Mancome mediumTM、Washcome mediumTM和Transcome mediumTM系列产品联合使用，可以获得更为理想的效果。

名称

Items

货号

Catalog

规格

Size

附加信息

Additional information

保质期

Shelf life

存储条件

Storage

Cheacome A（蓝盖）

6mL

即用型，已添加BSA

1月

-20℃

Cheacome B（白盖）

6mL

即用型，已添加BSA

1月

-20℃

缓冲体系：

本培养液利用碳酸氢钠作为缓冲剂，适宜于在二氧化碳培养箱中进行胚胎培养。

质量控制：

本培养液在百级生物洁净度下，经0.22μm一次性高效过滤器过滤灭菌。每批产品的检测指标包括：

序号

检测项目

限度要求

检测方法

检测依据

pH值

7.2±0.1

使用梅特勒-托利多pH计检测

2010年版药典 pH值检测法

渗透压

280±5

使用全自动露点渗透压仪检测

2010年版药典渗透压摩尔浓度检测法

澄清度

澄清

2010年版药典

胚胎发育检测

≧50%

猪孤雌激活胚胎体外囊胚发育率检测

企业标准

使用方法：

使用前倒置放置，并于4℃冰箱过夜解冻，然后在CO2培养箱中平衡至少4h以上备用。

使用攻略：

以下推荐操作步骤仅供参考：

A. 将所需体积的Cheacome medium kit P1.0猪卵母细胞化学辅助激活液于4℃冰箱过夜解冻，以明显看不见冰块为止；

B. 根据需要化学辅助激活卵母细胞或重构胚的量，准备一定数量的六孔培养板，此处以辅助激活200个卵母细胞或重构为例。准备好一个六孔培养板作为Cheacome A液盘，每个孔加Cheacome A液1ml（先轻轻上下颠倒离心管以混匀液体，然后用移液器吸取液体，为什么？），盖上石蜡油（以完全覆盖住液面为止，过多过多少都不好，为什么？），分别在培养板盖子及底部做好实验标记（好处有哪些？），然后放置到CO2培养箱平衡不少于4h，备用；Cheacome B液盘用同样方式准备。如下图所示；

C. 选取电激活或化学激活完成的卵母细胞或重构胚200个，每100个一组先移入到Cheacome medium A液的孔中进行分批激活，分别在“孔1”和“孔2”快速清洗一遍，移入到“孔3”中；另外100个卵母细胞或重构胚同样利用上述方法完成，分别在“孔6”和“孔5”清洗，放入“孔4”中进行计时，并激活3h，如下图所示。

Cheacom medium A盘制作方法

图 Cheacom medium A盘制作方法

D．3h后利用步骤C的方法，分别在Cheacome medium B盘中清洗卵母细胞或重构胚胎，将其放入“孔3”和“孔4”中计时，并激活9-12h，化学辅助激活完成，如下图所示；

Cheacom medium B盘制作方法

图 Cheacom medium B盘制作方法

E．将化学辅助激活好的卵母细胞或重构胚放入Blacome mediumTM 系列产品，PEM1.0或PEM2.0进行可达7d的胚胎培养可以获得理想的胚胎发育效率。也可以自行配制胚胎培养液进行胚胎培养。

实用妙招：

化学辅助激活液中活性成分既有助于胚胎维持正确的倍性，又有助于彻底激活卵母细胞，但长期存在会影响胚胎发育。在实践中，进行胚胎培养前，常利用多次清洗的方法除去残留的化学辅助激活液，若每次移液针在吸取胚胎的时候携带10μL液体，并在均装有1mL新鲜胚胎培养液的“孔1”和“孔2”中分别彻底清洗胚胎后放入“孔3”做长期胚胎培养，那么在此过程中化学辅助激活液成分被稀释了多少倍？如果每次移液针携带50μL液体的情况下，又是多少倍呢？

答案：

设定化学辅助激活液的浓度为a，

A．对于携带10μL液体的情况：

10a为溶质的量，清洗后，浓度变为10a/（10+1000）；清洗后，溶质的量变为10a/（10+1000）×10=100a/1010，二次清洗后，浓度变为100a/1010/（10+1000）=100a/1010×1010=a/10201；所以此种情况下，稀释了10201倍。

B．对于携带50μL液体的情况：

50a为溶质的量，清洗后，浓度变为50a/（50+1000）；清洗后，溶质的量变为50a/（50+1000）×50=a/1050，清洗后，浓度变为a/1050/（50+1000）=a/1050×1050=a/11025；所以此种情况下稀释了11025倍。

在携带液体足够少的情况下，吸取胚胎非常关键。