一种银生长增强超灵敏检测轮状病毒的方法
摘要： 本发明涉及免疫层析分析技术领域，具体涉及一种银生长增强超灵敏检测轮状病毒的方法，该方法在传统胶体金免疫层析试纸条的基础上引入可控银生长技术放大试纸条检测线胶体金探针的光学信号强度，步骤如下：(1)胶体金免疫层析试纸条的制备；(2)银生长液的配置；(3)可控银生长比色信号放大处理。本发明具有操作简单、灵敏度高、稳定性好、检测速度快、结果易读，且无需其他辅助仪器设备，可用于临床和突发事件的现场快速超灵敏检测轮状病毒以及大规模的流行病学调查。
权利要求：
1.一种银生长增强超灵敏检测轮状病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)制备胶体金免疫层析试纸条，采用双抗体夹心法检测轮状病毒的试纸条； (2)银生长液的配置：a)银生长A液：准确称取200～400mg硝酸银和100～200mg聚合物分别溶解于10mL超纯水中，然后将二者混均制备银生长A液；b)银生长B液：准确称取1～2g维生素C钠溶液和1mg柠檬酸三钠分别溶解于10mL和1mL超纯水中，然后将二者混均制备银生长B液； (3)可控银生长比色信号放大处理：a)用移液器准确取100～120μL待测样品溶液加入到检测卡加样孔中，于室温反应5～10min；b)将上述反应后的试纸条依次使用磷酸盐缓冲液和超纯水洗涤后，浸泡于银生长A液中室温反应5min；c)接着将试纸条转移至银生长B液中继续反应2min，肉眼观察实验结果，进行快速定性分析。 2.根据权利要求1所述的一种银生长增强超灵敏检测轮状病毒的方法，其特征在于，步骤(1)中胶体金免疫层析试纸条的制备包括以下步骤： 1)胶体金标记的轮状病毒检测抗体的制备：取1mL粒径为30～40nm柠檬酸包被胶体金溶液，用浓度0.2M的碳酸钾溶液调节该溶液的pH值至7.0～8.0；向溶液加入5μL浓度为1～2mg/mL轮状病毒检测抗体溶液，室温下振荡反应30min；然后再将100μL 1～2mg/mL牛血清白蛋白溶液加至上述混合溶液中继续于室温下振荡反应30min；在4℃条件下，于10000rpm离心20min，弃上清，沉淀物复溶于0.01M pH7.4磷酸盐缓冲溶液(PBS)，得终产物胶体金标记的轮状病毒检测抗体； 2)胶体金免疫层析试纸条的制备：a)结合垫的制备是将胶体金标记的轮状病毒检测抗体喷涂于玻璃纤维膜上；b)具有检测线和质控线的硝酸纤维膜的制备是将浓度为1～2mg/mL轮状病毒捕获抗体和浓度为1～2mg/mL驴抗鼠二抗溶液分别喷涂硝酸纤维膜上绘制两条线平行线，轮状病毒捕获抗体溶液划线作为检测线(T线)，驴抗鼠二抗溶液划线为质控线(C线)；c)胶体金免疫层析试纸条组装：将样品垫、具有金标检测抗体的结合垫、具有T和C线的硝酸纤维膜和吸水纸分别依次粘贴到塑料衬板上，相邻重叠部分的长度为2mm，切割成4mm宽的试纸条，密封干燥，于温度保存。 3.根据权利要求1所述的一种银生长增强超灵敏检测轮状病毒的方法，其特征在于，所述聚合物为聚乙烯亚胺PEI、聚丙烯酸PAA、聚乙烯吡咯烷酮PVP或聚赖氨酸PL。 4.一种利用权利要求1的银生长增强超灵敏检测轮状病毒的方法的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括胶体金免疫层析试纸条和银生长液。
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