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转基因菊花遗传分析和杂交育种的研究

转基因菊花遗传分析和杂交育种的研究

2.1.2 非转基因菊花

未转基因的地被菊‘晚粉’、‘玫瑰红’、‘赛旗红’、‘铺地金’、‘紫勋章’五个品种。 2.1.3 外源基因检测试剂与引物

PCR引物:PCR反应中所使用的引物是根据潮霉素抗性基因设计的,序列为: 5’primer:CGT CTG CTG CTC CAT CAC AG 3’primer:GGA AGT TCA TTT CAT TTG GA

2.2 试验方法

2.2.1 转基因菊花的表型观察

用4种培养基(MS, 1/2MS, 1/2MS+NAAO.1, 1/2MS+IBAO.1)对4个转基因菊花株系及对照未转基因品种‘美矮黄’进行生根培养试验,选出较好的培养基(1/2MS十NAAO.1)用作菊花的生根培养,待茎段长出根后,搬入温室中进行炼苗,并移栽到育苗盘中。

每隔25d测量转基因植株及对照未转基因植株的平均株高、冠幅等指标;开花时开始记录菊花的最终株高、花期、花色、花径、重瓣性等指标,并进行对比分析。对最终株高数据采用SPSS统计软件进行方差分析,多重比较统一用邓肯氏法。 2.2.2 转基因菊花的杂交技术

用‘晚粉’、‘赛旗红’、‘玫瑰红’、‘铺地金’、‘紫勋章’等5个菊花品种作父本,与转基因菊花和对照未转基因植株杂交,对其最终株高进行观测和统计分析。

在菊花现蕾时,用硫酸纸进行套袋隔离。柱头分泌物出现时,每朵花重复授粉5-6次,当菊花种子完全变黑后,采种并统计杂交结实率,晒干后称千粒重。 2.2.3 种子发芽试验

将杂交的种子浸泡在经高温灭菌的培养皿中24h左右,每个培养皿内依序排放50粒种子,设3个重复,然后置25℃的发芽箱内进行培养,每天观察记载种子发芽数。 2.2.4 菊花温室促成栽培与生长发育节律的观测

将种子分别撒播到平底式育苗盘中,基质为泥炭、蛙石、珍珠岩和少量细沙按一定比例混合,按常规管理,种子萌动时开始记录。观测种子的萌发期、子叶出土期、真叶展开期、真叶发育期、成苗期等指标。移栽后开始一记录菊花的株高、冠幅、现蕾期和花期等指标。 2.2.5 外源基因在转基因菊花中的遗传稳定性检测

随机选取08ב玫瑰红’的后代7株,采用CTAB提取法进行DNA的提取。以被检植株总DNA、阳性对照总DNA为模板,进行PCR扩增反应,并设置空白对照。 2.2.6 菊花杂交后代若干性状的观察

开花时观测菊花的株高、冠幅、花色、花径和重瓣性等指标,并进行归类和对比分析。对株高数据采用SPSS统计软件进行方差分析,多重比较统一用邓肯氏法。 2.2.7 菊花F1代的优株选择

开花时对表现较好的单株进行性状的观测和描述,主要包括花色、花径、心径、瓣数、

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所属分类:花卉
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