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地桃花组织培养与快速繁殖的方法与流程

花匠小妙招
2024-11-22 16:11

技术特征：
1.一种地桃花组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)地桃花的消毒剪取当年抽出的、带叶的地桃花茎段，刷洗后减去叶片，留若干叶柄，置于洗洁精溶液中搅拌后用流水冲洗0.5h以上，在无菌环境下依次转入到70％的酒精溶液和0.1％HgCl2溶液内浸泡消毒，即为消毒完成的茎段外植体，取出放入已灭菌的湿滤纸上待接种；(2)腋芽萌发不定芽的诱导用消毒后的刀具将上一步获得的茎段外植体两端各切除少量茎段，以正常的极性方向接种到添加有6-BA0-5mg/L，IBA0-1.0mg/L，AC0-2.0g/L的1/2MS基本培养基中，接好外植体的培养基先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为25±1℃，光照时间为14h光/10h暗，光照强度30-40μmol/m2·s，得腋芽萌发的不定芽；(3)丛生芽的诱导将上一步得到的腋芽萌发的不定芽切成带一叶的茎段，以正常的极性方向接种到添加有ZT0-1.0mg/L，IBA0-1.0mg/L，CH0-1.0g/L，AC0.5-1.0g/L的1/2MS基本培养基中，接好外植体的培养基先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为25±1℃，光照时间为14h光/10h暗，光照强度30-40μmol/m2·s，得不定芽丛；(4)不定芽的增殖将上一步诱导获得的不定芽丛从茎段中分离，然后切成2-3株不定芽的芽块，接种到添加有6-BA0-5.0mg/L，IBA0-1.0mg/L，CH0-1.0g/L，AC0.5-1.0g/L的1/2MS基本培养基中，接好外植体的培养基先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为25±1℃，光照时间为14h光/10h暗，光照t强度30-40μmol/m2·s；(5)再生植株的生根培养切取叶片嫩绿且2-3cm高的不定芽，插入到添加IBA0-1.0mg/L，AC0.5-1.0g/L，1/8-1/4MS基本培养基的生根培养基中，接好外植体的培养基先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14h光/10h暗，光照强度30-40μmol/(m2·s)，得生根的组培苗；(6)炼苗移栽待生根的组培苗的苗高长至5cm以上，根长超过3cm时，将组培苗定植于高压湿热灭菌过的珍珠岩、泥炭重量比为1：1-9的混合基质中，浇透水并用透明的聚乙烯塑料薄膜覆盖以保温保湿，室内温度控制在15-25℃之间；3d后，揭开薄膜一角，让内外空气相通，适应1d后将薄膜全部揭开，于叶面喷雾以保持湿润，待新叶长出后移栽大田中继续种植。2.根据权利要求1所述的地桃花组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述的无菌环境为经紫外线消毒30min以上并开启无菌风的超净工作台，茎段转入70％的酒精溶液中浸泡40s，取出用无菌水冲洗3次，再浸入滴加有吐温-80和1mol/LNaOH溶液的0.1％HgCl2溶液内浸泡消毒9-10min，然后用无菌水充分浸洗3次。3.根据权利要求1所述的地桃花组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述的刀具为经过高温灼烧消毒的解剖刀，培养基的大量元素含量为MS基本培养基的1/2，微量元素、铁盐、有机物质、肌醇等含量均与MS基本培养基相同，该培养基中的蔗糖添加量为30.0g/L，琼脂添加量为8.0g/L，pH为5.8-6.0，培养基预先在121℃下高温高压灭菌20min；4.根据权利要求1所述的地桃花组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤(3)中，培养基的大量元素含量为MSt基本培养基的1/2，微量元素、铁盐、有机物质、肌醇等含量均与MS基本培养基相同，该培养基中的蔗糖添加量为30g/L，琼脂添加量为8.0g/L，pH为5.8-6.0，培养基预先在121℃下高温高压灭菌20min；5.根据权利要求1所述的地桃花组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤(4)中，培养基的大量元素含量为MS基本培养基的1/2，微量元素、铁盐、有机物质、肌醇等含量均与MS基本培养基相同，该培养基中的蔗糖添加量为30g/L，琼脂添加量为8.0g/L，pH为5.8-6.0，培养基预先在121℃下高温高压灭菌20min；6.根据权利要求1所述的地桃花组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤(5)中，生根培养基的大量元素含量为MS基本培养基的1/8-1/4，微量元素、铁盐、有机物质等含量均为MS基本培养基的1/4-1/2，而肌醇添加量为0mg/L，该培养基中的蔗糖添加量为10-50g/L，琼脂添加量为8.0g/L，pH为5.8-6.0，培养基预先在121℃下高温高压灭菌20min。7.根据权利要求1所述的地桃花组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤(6)中，组培苗从组培瓶中取出的方法为：松开组培瓶的瓶盖，往瓶中注入少量无菌水，以防止培养基干裂、组培苗失水，盖住瓶盖，12h后半挪开瓶盖，再过12h，移走瓶盖，让灯光直照组培苗培养2d；然后将培养基捣碎，夹出组培苗，用流水将残留的琼脂冲洗干净。8.根据权利要求1所述的地桃花组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于，步骤(2)中的1/2MS基本培养基中添加了6-BA2.0mg/L，IBA0.2mg/L，AC1.0g/L，步骤(3)中的1/2MS基本培养基中添加了ZT0.5mg/L，IBA0.2mg/L，CH0.5-1.0g/L，AC0.5-1.0g/L，步骤(4)中的1/2MS基本培养基中添加了6-BA1.0mg/L，IBA0.3mg/L，CH0.5g/L，AC0.5-1.0g/L。9.根据权利要求1所述的地桃花组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于，步骤(5)中的1/4MS基本培养基中添加了IBA0.1-0.2mg/L，AC0.5-1.0g/L，蔗糖20-30g/L。10.根据权利要求1所述的地桃花组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于，步骤(6)的混合基质中珍珠岩与泥炭的重量比为1：3-4，且所用基质均经高压湿热消毒。