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菌种鉴定方法

花匠小妙招
2024-11-23 10:38

一、常规鉴定

形态特征和理化特性属于常规鉴定的内容。形态特征包括显微形态和培养特征；理化特性包括营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应和血清学反应等。

二、BIOLOG自动鉴定

BIOLOG鉴定系统以微生物对不同碳源的利用情况为基础，检测微生物的特征指纹图谱，建立与微生物种类相对应的数据库。通过软件将待测微生物与数据库参比，得出鉴定结果。该系统已获美国FDA认可，能鉴定超过2900种常见的好氧细菌、厌氧菌、酵母和丝状真菌等微生物，几乎覆盖了所有重要的与人类、动物、植物相关的微生物。已逐步应用于食品和饮品企业、环保、海洋生物/水产品、制药、农业微生物、生物治理、化妆品、临床等领域的微生物鉴定试验中。

三、分子生物学鉴定

应用分子生物学方法从遗传进化角度阐明微生物种群之间的分类学关系，是微生物分类学研究普遍采用的鉴定方法。分子生物学实验室，配有PCR仪、高速冷冻离心机、电泳仪、HPLC、凝胶成像系统、紫外控温分析系统等先进仪器设备，以及DNAMAN、BIOEDIT、CLUSTALX、TREEVIEW等序列分析软件。采用核酸序列分析法分析细菌16S rDNA/16S-23S rDNA区间序列、酵母18S rDNA/26S rDNA（D1/D2）序列及丝状真菌的18S rDNA/ ITS1-5.8S-ITS2序列，提供科学的鉴定结果。

四、API细菌鉴定

API鉴定系统涵盖15个鉴定系列，约有1000种生化反应，已可鉴定超过600种的细菌。鉴定过程中，可根据细菌所属类群选择适当的生理生化鉴定系列，通过软件将待测细菌与数据库参比，得出鉴定结果。

其中分子生物学鉴定是菌种鉴定最常用的方法。目前，菌种鉴定技术中分辨率最高、结果最为可靠的是——DNA测序技术。16S rDNA是细菌的系统分类研究中最常用的和最适合的分子钟，在结构与功能上具有高度的保守性，大小约1500 bp，可体现不同菌属之间的差异；18S rDNA是编码真核生物18SrRNA的DNA序列，序列中既有保守区（反映物种间的亲缘关系）又有可变区（体现物种间的差异）。真菌的ITS（Internal Transcribed Space）包括ITS1及ITS2两部分，进化速度快，具有多态性，适于对亲缘关系较近的菌株进行区分鉴定。他们主要原理都是通过比较同源基因/序列的差异来进行菌种鉴定，菌种鉴定具体流程如下：

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