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李属坏死环斑病毒

花匠小妙招
2024-11-23 11:44

新疆农业大学学报201437(4):327332JournalofXinjiangAgriculturalUniversity文章编号:1007-8614(2014)04-0327-06李属坏死环斑病毒(PNSV)T-LAMP检测方法的建立韩剑1罗明1殷智婷1周国辉2张祥林3(1新疆农业大学农学院乌鲁木齐830052;2华南农业大学资源与环境学院广州510642;3新疆出入境检疫检验局乌鲁木齐830052)摘要:针对李属坏死环斑病毒(PNSV)外壳蛋白(CP)基因保守序列设计了1套特异性识别CP基因中6个不同区段的环介导等温扩增(LAMP)引物。通过对反应条件的优化建立了适用于PNSV的T-LAMP检测技术对优化后的方法进行特异性、灵敏度评价。结果显示此方法能够特异性的检测出PNSV对马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、黄瓜花叶病毒(CMV)、蚕豆萎蔫病毒(BBWV)的检测均为阴性灵敏度高于T-PC10倍。关键词:李属坏死环斑病毒(PNSV);反转录环介导等温扩增(T-LAMP);CP基因;检测中图分类号:S436629文献标识码:ADevelopmentofeverseTranscriptionLoop-mediatedIsothermalAmplificationAssayforDetectionofPrunusNecroticingspotVirusHANJian1LUOMing1YINZhi-ting1ZHOUGuo-hui2ZHANGXiang-lin3(1CollegeofAgronomyXinjiangAgriculturalUniversityUrumqi830052China;2CollegeofNaturalesourcesandEnvironmentSouthChinaAgriculturalUniversityGuangzhou510642China;3XinjiangEntryandExitInspectionandQuarantineBureauUrumqi830052China)Abstract:AsetoffourspecificLAMPprimersweredesignedtorecognizesixdistinctregionsaccordingtothegenesequenceofcoatproteininprunusnecroticringspotvirus(PNSV)Basedonoptimizationofreactioncondi-tionsT-LAMPdetectionmethodwasdevelopedwhichwastreatedwithspecifictechniquesandwasevaluatedItsuggestedthatPNSVcanbefoundbythemethodTheamplifiedfragmentswerenotfoundinthesamplesofpotatovirusX(PVX)potatovirusY(PVY)cucumbermosaicvirus(CMV)broadbeanwiltvirus(BBWV)andthesensitivityforthedetectionofPNSVwas10timeshigherthanthetraditionalT-PCmethodKeywords:prunusnecroticringspotvirus(PNSV);reversetranscriptionloop-mediatedisothermalamplifica-tion(T-LAMP);coatproteingene(CP);detection李属坏死环斑病毒(Prunusnecroticringspotvi-rusPNSV)可危害多种果树、花卉等经济作物寄主遍及21个科、47个属189种植物寄主一旦感染终生带毒逐年加重可引起叶片坏死环斑和穿孔果实畸形品质下降腐烂加快树体急剧衰退提早枯死导致大幅度减产甚至绝产13。要从根本上解决PNSV的防治问题必须采取有效的预防措施加强种子、苗木的检疫检验建立无病苗木繁育体系从源头上杜绝病原才是控制PNSV发生蔓延和安全防控的根本途径而构建和应用先进的收稿日期:20140423基金项目:新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(2012211B25)通讯作者:**E-mail:luomingxjau@sinacom