SNT 1146.2

花匠小妙招
2024-11-23 11:45

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1146.2—2009烟草环斑病毒分子生物学检测方法Molecular detection of Tobacco ringspot virus2009-09-02发布2010-03-16 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 1146.2---2009前言本标准的附录 B、附录 C 和附录 D均为规范性附录,附录 A 为资料性附录。本标准由认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国上海出入境检验检疫局负责起草、中国检验检疫科学研究院参加起草。本标准主要起草人：杨翠云、于翠、魏梅生、高辉、乔艳艳。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1146.2—2009烟草环斑病毒分子生物学检测方法1范围本标准规定了烟草环斑病毒分子生物学检测的基本原则和方法。本标准适用于无性繁殖材料、组培苗、鳞球茎和种子苗木中携带的烟草环斑病毒的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。SN/T 1146烟草环斑病毒检疫鉴定方法3原理3.1烟草环斑病毒学名及分类地位中文名：烟草环斑病毒英文名:Tobacco ringspot virus缩写:TRSV分类地位：豇豆花叶病毒科（Comoviridae），线虫传多面体病毒属（Nepovirus）。3.2 烟草环斑病毒基因组基因组含两条 ssRNA。RNA-1长 7.514 kb;RNA-2长 3.929 kb,外壳蛋白基因 1.548kb。其他资料参见附录 A。仪器设备、用具和试剂414.1仪器设备PCR仪、实时荧光定量PCR仪、超净工作台、电子天平（1/10 000g）、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、水浴锅、高速冷冻离心机、一80℃超低温冰箱、高压灭菌锅、制冰机、微波炉、漩涡振荡器。4.2　用具可调式微量移液器(2 μL、10 μL、100 μL、200 μL、1000 μL、5 000 μL)及相应的无 RNase 吸头、无RNase离心管、PCR管和研钵等。4.3试剂RT-PCR试剂(见附录 B)、IC-RT-PCR试剂(见附录 C)和实时荧光 RT-PCR试剂（见附录 D)。5 病毒检测抽样与制样方法按照 SN/T1146规定的方法执行。采用 RT-PCR(见附录 B)、IC-RT-PCR(见附录 C)和实时荧光 RT-PCR(见附录 D)进行病毒检测。6结果判定样品经 RT-PCR、IC-RT-PCR 和实时荧光 RT-PCR 三种方法之一检测为阴性时，证明样品不携带烟草环斑病毒。样品经 RT-PCR 和 IC-RT-PCR 检测为阳性,需要进行序列测定,如果序列测定结果证实与所检测 SN/T 1146.2—2009的烟草环斑病毒病毒一致，可判定样品携带烟草环斑病毒。样品经实时荧光RT-PCR检测为阳性时，也可判定样品携带烟草环斑病毒。7样品保存和结果记录7.1　样品保存经检验确定携带烟草环斑病毒的样品，应在适合的条件下妥善保存。如种子保存在干燥条件下，其他情况的取实验样品保存在一20℃冰箱中，有条件的保存在一80℃冰箱中更好。做好登记和标记工作。7.2结果记录记录包括：样品来源、种类、取样人员、实验的时间、地点、方法和结果、检验检疫员的签字等。RT-PCR 和IC-RT-PCR 检测应有电泳结果照片及序列测定分析,实时荧光 RT-PCR 应有扩增曲线图片。 SN/T 1146. 2--2009附录A(资料性附录)烟草环斑病毒简介A.1　名称中文名：烟草环斑病毒英文名：Tobacco ringspot virus缩写：TRSV分类地位：豆花叶病毒科（Comoviridae），线虫传多面体病毒属（Nepovirus）。A.2 寄主范围寄主范围很广，可侵染54科246种植物，自然侵染寄主有豆类、瓜类、薯类、花卉和果树等。常见的有大豆、马铃薯、甘薯、烟草、西瓜、黄瓜、甜瓜、西葫芦、胡萝卜、莴苣、菜豆、豇豆、茄子、菠菜、香石竹、唐菖蒲、百合、水仙花、鸢尾、天竺葵、李属、苹果、葡萄、甜樱桃、越桔、白蜡树等。A.3 为害症状TRSV影响寄主植物的整个生长期：--因寄主不同可产生不同的症状，造成叶片系统褪绿斑,坏死环斑,茎坏死条纹，危害严重时导致植株矮化,结果少和果实变小。有的症状在后期可恢复，无症带毒。A.4分布地区欧洲：丹麦、前苏联、波兰、捷克、匈牙利、德国、奥地利、瑞士、荷兰、比利时、英国、爱尔兰、法国、西班牙、葡萄牙、意大利前南斯拉夫、罗马尼亚、保加利亚、希腊、土耳其非洲：