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植物病毒的分离纯化鉴别寄主寄主范围传播方式生物学.ppt

花匠小妙招
2024-11-23 21:59

植物病毒的分离纯化鉴别寄主寄主范围传播方式生物学

普通植物病理学General Plant Pathology 教师：黄家风院系: 农学院植保系 1．枯斑寄主将田间采集的病叶人工接种在寄主植物上，确定其侵染后，利用它在某些植物上产生的枯斑，进行单斑分离，一般三次，可使病毒纯化。因为一个局部枯斑就是一个侵染点，因此一个枯斑中的病毒应该是比较统一的。 2．过滤寄主利用某一寄主对不同病毒的抗性差异将病毒分离开来，即某种寄主对一种病毒是免疫的，而对另一种病毒是感染的，或对一种病毒是感染的，而对其它几种病毒是免疫的。如： 3．专化介体利用介体种间对病毒亲和力和传毒特性的差异来分离病毒，如 TMV蚜虫不传，CMV蚜传； BBWV能蚜传，RTV能被线虫线。（二）鉴别寄主（identification host） 1、鉴别寄主定义：用来鉴别病毒或其株系的具有特定症状反应的植物。凡是病毒侵染后能产生快而稳定、并具有特征性症状的植物都可作为鉴别寄主。 2、鉴别寄主谱：组合使用的几种或一套鉴别寄主，一般包括系统侵染的寄主局部侵染的寄主不受侵染的寄主（三）寄主范围每种病毒都有一定的寄主范围，并在这些寄主上产生一定的症状类型。寄主范围测定有助于了解病毒繁殖、测定、保存时选用什么样的寄主，及病害防治。用以测定植物病毒寄主范围的植物应为： 1）与原寄主亲缘相近的植物； 2）病田周围的作物和杂草； 3）传毒昆虫栖息繁殖的植物。病毒中的花叶型、环斑型常用，而黄化型很难。机械接种的方法有:摩擦接种法、快速擦伤接种法、喷枪接种法、组织接种法、注射接种法、浸根接种法。只能证明这种病可以传染，至于病株中有几种病毒和病毒的性状，嫁接很难提供更多的情况；无法反映病毒在自然界中的传染方式，但对果树和木本植物病毒的研究，嫁接还是很重要的实验方法。 3、种子传染 seed infection 诊断方法： 1）播种试验，从病株上收集种子，播种在防虫温室内经消毒的土壤(干热120℃ 2honrs)中并以同样数目的健康种子作为对照，出苗后根据症状表现和专门检测来判断。 2）酶联免疫 4、介体传染（vector infection）土壤介体的试验 1）以病土种植诱发植物或指示植物，观察发病情况； 2）为了进一步确定病毒介体是线虫还是真菌：将病土置室温晾干1—2周后或稍长时间，播种诱发植物或指示植物，丧失侵染性——线虫介体；保持侵染性——真菌介体介体昆虫的虫传试验（以蚜虫为例）（1）传毒蚜虫的获得与饲养取单个孤雌胎生蚜或卵生雌蚜，放在对病毒免疫的植物上加以繁殖；笼罩隔离饲养。（2）毒源植物： ①必须是人工严格分离的病株 ②应选症状明显，生长幼嫩的病株 ③存活时间长，对毒源专化性强，敏感性高，病毒易于增殖的植物。（3）供试植物：必须保证是 ①无毒健康的植物， ②必须是易培育且敏感的植物，或选具有明显鉴别特征的鉴别寄主。 ③供试植物一般为苗期：双子叶植物：第一片真叶展开时，单子叶植物：2—3片或2叶1心期。（4）蚜虫接种试验程序 ①饥饿（非持久性病毒）：无毒蚜虫(培养皿): 1—18hrs, 一般0.5—2hrs为宜。 ②饲毒：将无毒蚜虫用毛笔转移至毒源植物，罩上防虫罩，进行饲毒，饲毒时间10—60s（非持久性）有的可维持20hrs. ③接种（毒）杀死饲过毒的蚜虫转移至健株，时间可维持24hrs,然后用杀虫剂杀死 ④观察，将蚜虫接过毒的植株置于防虫温室内，观察植物发病。二、血清学技术Serological Technology 血清学技术是病毒诊断和鉴定的基础方法，其基本原理是抗体与抗原之间的专化性结合。（一）植物病毒的抗原性 1）抗原（antigen）：凡能刺激动物机体产生免疫反应的异体物质。 2）可作抗原的抗原物质： virus、bacterium、fungus、phytoplasm、RLO、生物细胞及其研磨物、自溶物等；有些低分子量的物质，如核酸、多糖、脂类，