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桂花金属离子胁迫下lncRNA内参基因和应用

花匠小妙招
2024-11-24 12:06

本发明涉及植物分子生物学领域，特别涉及桂花金属离子胁迫下lncrna内参基因和应用。

背景技术：

1、桂花osmanthus fragrans，是木犀科植物中一种具有独特香气的木本花卉，是中国传统园林中常见的植物之一。桂花树通常高达3-10米，叶片呈椭圆形或卵形，常绿。桂花的花朵小巧玲珑，花瓣呈白色、淡黄色或橙红色。桂花在秋季开花，其浓郁的香气远近闻名，被誉为“十里桂花香”。除了观赏价值，桂花还具有药用和食用价值，并且作为蜜源植物吸引了许多蜜蜂。尽管桂花的生态和经济价值显著，然而，关于桂花在金属离子胁迫下的生理和分子机制研究相对较少。特别是，关于桂花在金属离子胁迫条件下lncrna(长链非编码rna)表达的研究目前尚未见报道。

2、lncrna是一类长度超过200核苷酸的非编码rna分子，尽管不编码蛋白质，但在调控基因表达和植物的生长发育、应激反应等方面具有重要作用。在植物中，lncrna已被证明在响应生物和非生物胁迫(如干旱、盐胁迫、金属离子胁迫等)中发挥关键作用。研究桂花在金属离子胁迫下lncrna的表达情况，可以揭示其响应机制，为桂花的抗逆性改良提供理论基础。在利用qrt-pcr技术分析lncrna表达水平时，选择合适的内参基因是确保实验结果准确性和可靠性的关键。然而，不同物种和胁迫条件下的内参基因稳定性可能存在差异，因此有必要对桂花在金属离子胁迫下的内参基因进行筛选和验证。这些结果对于揭示桂花的胁迫响应机制和提高其抗逆性具有重要意义。

技术实现思路

1、鉴于现有技术的不足，本发明目的在于获得桂花在金属离子胁迫条件下表达稳定的lncrna内参，该lncrna能够满足实时荧光定量检测桂花转录表达水平的要求，提高桂花lncrna表达分析研究的稳定性、可靠性和效率。

2、为了达到以上目的，本发明所采用的技术方案如下：

3、桂花金属离子胁迫下lncrna内参基因，所述lncrna内参基因包括以下(1)～(4)中的至少一种；

4、(1)cu2+离子胁迫下的内参基因lnc00067193和18s；

5、(2)fe2+离子胁迫下的内参基因lnc00229717和act7；

6、(3)al3+离子胁迫下的内参基因lnc00087780和lnc00265419；

7、(4)金属离子胁迫下的内参基因lnc00239991和lnc00067193；

8、其中，lnc00067193的核酸序列如seq id no.1所示，18s的核酸序列如seq idno.2所示，lnc00229717的核酸序列如seq id no.3所示，act7的核酸序列如seq id no.4所示，lnc00087780的核酸序列如seq id no.5所示，lnc00265419的核酸序列如seq id no.6所示，lnc00239991的核酸序列如seq id no.7所示。

9、进一步的，本发明提供用于检测所述lnc00067193的专有引物，其序列为：正向引物5’-gcatcggcgattgtgaga-3’(seq id no.8)；反向引物5’-aagcgaaggtccgtttgg-3’(seqid no.9)。

10、用于检测18s的专有引物为：正向引物5’-ccataaacgatgccgaccag-3’(seq idno.10)；反向引物5’-gccttgcgaccatactccc-3’(seq id no.11)。

11、用于检测lnc00229717的专有引物为：正向引物5’-cttagccgcccatccca-3’(seqid no.12)，反向引物5’-cacccgcattatccgttga-3’(seq id no.13)。

12、用于检测act7的专有引物为：正向引物5’-aaatcactgccttggctccta-3’(seq idno.14)；反向引物5’-gcacttcctgtggacgataga-3’(seq id no.15)。

13、用于检测lnc00087780的专有引物为：正向引物5’-cgaactgcccttatggttattc-3’(seq id no.16)，反向引物5’-cctggcgtagattccttgc-3’(seq id no.17)。

14、用于检测lnc00265419的专有引物为：正向引物5’-cattattgttacgccgaccac-3’(seq id no.18)，反向引物5’-gatcgtttagccgctctttct-3’(seq id no.19)。

15、用于检测lnc00239991的专有引物为：正向引物5’-tttcttggtcgtgtctttagca-3’(seq id no.20)，反向引物5’-caagttgcgggagacgttat-3’(seq id no.21)。

16、进一步的，本发明还涉及所述桂花金属离子胁迫下lncrna内参基因或其专有引物在桂花lncrna荧光定量pcr分析中的应用。

17、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

18、本发明通过文献资料查阅、数据库搜索和rna测序，确定了17个参考基因作为候选基因，设计了17个内参基因的引物序列。通过5种算法(delta-ct、genorm、normfinder、bestkeeper和reffinder)评估候选基因的稳定性，获得了桂花cu2+离子胁迫下最佳内参lnc00067193和18s、fe2+离子胁迫下最佳内参lnc00229717和act7、al3+离子胁迫下最佳内参lnc00087780和lnc00265419、以及金属离子胁迫下最佳内参lnc00239991和lnc00067193，并设计了内参基因的实时荧光定量pcr引物，该引物特异性强，扩增效率高，能够大大的提高采用实时荧光定量检测桂花lncrna时的检测效率，并提高了检测结果的可信度。

技术特征：

1.桂花金属离子胁迫下lncrna内参基因，其特征在于，所述lncrna内参基因包括以下(1)～(4)中的至少一种；

2.用于检测权利要求1所述lnc00067193的专有引物，其特征在于，正向引物5’-gcatcggcgattgtgaga-3’，反向引物5’-aagcgaaggtccgtttgg-3’。

3.用于检测权利要求1所述18s的专有引物，其特征在于，正向引物5’-ccataaacgatgccgaccag-3’，反向引物5’-gccttgcgaccatactccc-3’。

4.用于检测权利要求1所述lnc00229717的专有引物，其特征在于，正向引物5’-cttagccgcccatccca-3’，反向引物5’-cacccgcattatccgttga-3’。

5.用于检测权利要求1所述act7的专有引物，其特征在于，正向引物5’-aaatcactgccttggctccta-3’，反向引物5’-gcacttcctgtggacgataga-3’。

6.用于检测权利要求1所述lnc00087780的专有引物，其特征在于，正向引物5’-cgaactgcccttatggttattc-3’，反向引物5’-cctggcgtagattccttgc-3’。

7.用于检测权利要求1所述lnc00265419的专有引物，其特征在于，正向引物5’-cattattgttacgccgaccac-3’，反向引物5’-gatcgtttagccgctctttct-3’。

8.用于检测权利要求1所述lnc00239991的专有引物，其特征在于，正向引物5’-tttcttggtcgtgtctttagca-3’，反向引物5’-caagttgcgggagacgttat-3’。

9.权利要求1所述桂花金属离子胁迫下lncrna内参基因在桂花lncrna荧光定量pcr分析中的应用。

10.权利要求1所述桂花金属离子胁迫下lncrna内参基因的专有引物在桂花lncrna荧光定量pcr分析中的应用。

技术总结
本发明公开了桂花金属离子胁迫下lncRNA内参基因和应用，属于植物分子生物学领域。本发明获得了桂花Cu2+离子胁迫下最佳内参lnc00067193和18S、Fe2+离子胁迫下最佳内参lnc00229717和ACT7、Al3+离子胁迫下最佳内参lnc00087780和lnc00265419、以及金属离子胁迫下最佳内参lnc00239991和lnc00067193。这些结果填补了桂花金属离子胁迫下没有lncRNA内参的技术空白，为桂花金属离子胁迫下lncRNA的定量提供了有力的支持，为桂花lncRNA功能研究提供了理论基础。

技术研发人员：张莹婷,陈洪国,杨洁,邹晶晶,李泽卿,蔡璇,曾祥玲
受保护的技术使用者：湖北科技学院
技术研发日：
技术公布日：2024/11/11