蕙兰内参基因的筛选与A类花发育基因的表达特性研究
蕙兰(Cymbidium faberi),花姿秀丽,香味浓郁,具有很高的观赏价值。利用基因工程技术培育出新的花卉品种,是世界观赏园艺植物育种的主要研究热点之一。迄今为止,已经分离和克隆了许多观赏植物相关的花器官发育基因,但是关于蕙兰的研究鲜有报道。本研究以蕙兰为试材,通过同源克隆和RT-PCR,以TUA、TUN、ACT、GAPDH、18S rRNA、UBQ、EF1a作为候选基因,用绝对定量的方法进行内参基因的筛选,再结合RACE技术,从花葶中成功分离了蕙兰CfAP11、CfMADS1花发育相关基因的cDNA全长,并通过相对荧光定量PCR的方法,对这些基因在不同器官及不同发育过程中的时空表达特性进行了分析。同时,构建了CFAP11基因的正义、反义植物表达载体,转化烟草,经过RT-PCR、Southem blot鉴定检测后,得到部分阳性植株。主要研究结果如下：1.以TUA、TUB、ACT、GAPDH、18S rRNA、UBQ、EF1a作为候选基因进行克隆,绝对定量表达分析后利用GeNorm、Normfinder进行分析,并进行功能基因的进一步验证。综合内参基因筛选的分析,对所有时期所有器官来说,可以选用ACT、UBQ3和GAPDH三个内参基因同时作为内参用于蕙兰其他功能基因相对表达水平的研究,可以得到相对准确的差异表达结果；对于营养期,可选用两个内参基因UBQ2和UBQ3进行基因表达的归一化处理；对于花蕾期,选用ACT和UBQ3即可进行功能基因的表达分析；对于盛花期,在进行归一化处理功能基因的相对差异表达时可以引入ACT、UBQ3和UBQ2三个内参基因；对于营养器官,宜用UBQ2和ACT两个内参基因；对于生殖器官,宜用ACT、UBQ3和UBQ2三个基因做内参进行数据处理；对于根,可用两个基因UBQ2和ACT做为内参；对于叶,可用两个基因ACT和UBQ3同时作为内参进行数据... （共131页)
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