双氢青蒿素调控神经
摘要
目的:该研究旨在L5脊神经结扎(SNL)模型及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)海马连续注射模型中,评价双氢青蒿素(DHA)对海马神经损伤的干预效果;在原代培养的小胶质细胞-海马神经元中,确认DHA对小胶质细胞-海马神经元相互作用的调控模式。方法:实验小鼠分为假手术(Sham)组、SNL组、DHA组(16 mg·kg^(-1)),每组3只,用腺相关病毒[(连接钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ) dTomato AAV]标记海马CA3谷氨酸能神经元,并以免疫荧光染色追踪其向海马CA1、前额叶皮质(Frc)、前扣带回(ACC)、伏隔核(Nac)及杏仁核(BLA)的投射;实验小鼠分为Sham组、TNF-α海马连续注射模型组、DHA低、中、高剂量(DHA-L、DHA-M、DHA-H)组(4、8、16 mg·kg^(-1))及普瑞巴林组(25 mg·kg^(-1)),每组4只,以高尔基染色统计海马CA1和CA3区锥体神经元形态;分别诱导海马原代神经元、小胶质细胞的持续激活,并进行细胞共培养给予DHA干预,以免疫荧光法统计细胞胞体面积和神经元初、次级树突棘内外的突触后密度蛋白95(PSD95)的表达量。结果:与Sham组比较,SNL组海马CA3谷氨酸能神经元向CA1区、Frc及ACC的投射减少(P<0.01),而向Nac及BLA的投射升高(P<0.01);与SNL组比较,DHA组海马CA3谷氨酸能神经元向CA1区、Frc及ACC的投射升高(P<0.01),而向Nac及BLA的投射显著降低(P<0.01)。与Sham组比较,TNF-α海马连续注射模型组小鼠CA1锥体神经元树突棘密度及树突分支数量均显著减少(P<0.01);与TNF-α海马连续注射模型组比较,DHA-M、DHA-H组海马CA1和CA3锥体神经元树突棘密度及树突分支数明显增多(P<0.05,P<0.01);与DHA-M组比较,DHA-H组海马CA1锥体神经元树突总长度显著增多(P<0.01),DHA-L组CAI神经元树突总长度和CA3神经元树突基部总长度则显著减少(P<0.01)。与空白组比较,甘氨酸组和谷氨酸组细胞胞体面积显著增大(P<0.01);与甘氨酸组和谷氨酸组比较,甘氨酸+谷氨酸组细胞胞体面积显著升高(P<0.01);与谷氨酸组比较,谷氨酸+DHA组细胞胞体面积显著减少(P<0.01);与甘氨酸+谷氨酸组比较,甘氨酸+谷氨酸+DHA组细胞胞体面积显著减少(P<0.01);与谷氨酸+DHA组比较,甘氨酸+谷氨酸+DHA组细胞胞体面积减少(P<0.05)。与空白组比较,谷氨酸组细胞胞体面积显著升高(P<0.01);与谷氨酸组比较,谷氨酸+DHA各剂量组细胞胞体面积显著降低(P<0.01)。与空白组比较,静息原代小胶质细胞+甘氨酸组神经元初、次级树突棘内、外PSD95表达量显著升高(P<0.01);与静息原代小胶质细胞+甘氨酸组比较,活化原代小胶质细胞+甘氨酸组神经元的初、次级树突棘内、外PSD95表达量显著降低(P<0.01);与活化原代小胶质细胞+甘氨酸组比较,活化原代小胶质细胞+甘氨酸+DHA组中神经元的初、次级树突棘内、外PSD95表达量显著升高(P<0.01);与活化原代小胶质细胞+DHA组比较,活化原代小胶质细胞+甘氨酸+DHA组神经元初、次级树突棘内、外PSD95表达量显著升高(P<0.01)。结论:DHA对NP病理状态下,海马小胶质细胞及TNF-α过表达导致的锥体神经元损伤具有显著的修复效果,而该修复与DHA对神经元-小胶质细胞的双重抑制密切相关。展开▼
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