病原微生物检测方法 病原微生物检测方法 病原微生物检测方法 病原微生物检测方法 一,生物化学方法 原理:生化方法检测病原微生物实际上是测定微生物特异性酶。由于各种微生物所具有的系统不完全相同 ,对许多物质的分解能力亦不一致。因此可利用不同底物产生的不同代谢产物来间接检测该微生物内酶的有无 ,从而达到检测特定微生物的目的。 辛酯酶法:快速检测沙门氏菌。沙门氏菌能产生辛酯酶,这一性能是除沙门氏菌外的各属肠杆菌科细菌所不具备的。以4-甲基伞形酮辛酯(MUCAP)为底物,经沙门氏菌的辛酯酶降解后,释放出4-甲基伞形酮(4MU),在紫外灯下观察其发出的蓝色荧光。 精品资料 你怎么称呼老师? 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点,你是否会认为老师的教学方法需要改进? 你所经历的课堂,是讲座式还是讨论式? 教师的教鞭 “不怕太阳晒,也不怕那风雨狂,只怕先生骂我笨,没有学问无颜见爹娘 ……” “太阳当空照,花儿对我笑,小鸟说早早早……” 病原微生物检测方法 二,血清免疫学方法 免疫学技术是利用特异性抗原抗体反应,观察和研究组织细胞、特定抗原(抗体)的定性和定量技术。为了显示和观察这种抗原抗体反应,需要预先将某种标记物结合到抗体上,借标记物的荧光或酶的有色反应、放射性或高电子密度,在光镜或电镜下进行定性、定位或定量研究。 荧光抗体技术 酶联免疫技术 病原微生物检测方法 三,分子生物学方法 分子生物学及分子遗传学的发展 ,使人们对微生物的认识逐渐从外部结构特征转向内部基因结构特征 ,微生物的检测也相应的从生化、免疫方法转向基因水平的检测。 核酸杂交法 PCR及其衍生技术 基于16S rRNA的检测技术 病原微生物检测方法 四,分子生物学与免疫学相结合的方法 免疫 PCR (immuno polymerase chain reaction , IM PCR) PCR-ELISA 病原微生物检测方法 五,用生物传感器进行病原微生物的鉴定 生物传感器是将新兴的传感器技术和分子诊断技术相结合而成的一种新技术。生物传感器包含两部分,即分子识别器件和换能器。 利用大肠杆菌抗体的免疫吸附反应,使用集成化SPR 传感器快速检测大肠杆菌O157 : H7 ,采用亲和素- 生物素系统放大检测的反应信号,并引入复合抗体作为二次抗体,使该传感器对大肠杆菌的检测限由106 cfu/ ml 下降到105 cfu/ ml。 病原微生物检测方法 六,生物芯片 生物芯片技术是将生物大分子,如寡核苷酸cDNA、基因组DNA、肽、抗原以及抗体等固定在诸如硅片、玻璃片、塑料片、凝胶和尼龙膜等固相介质上形成生物分子点阵,当待测样品中的生物分子与生物芯片的探针分子发生杂交或相互作用后,利用激光共聚焦显微扫描仪对杂交信号进行检测和分析。 根据芯片上探针的分子种类而将之分为:DNA 芯片(即基因芯片) 和蛋白质芯片。 病原微生物检测方法 七,蛋白质指纹图谱技术 蛋白质指纹图谱技术用于各种疾病特异性蛋白指纹的识别和判断,可以直接检测不经处理的尿液、血液或细胞裂解液等。人体血清里有成千上万个蛋白,人一旦发生了某种疾病,蛋白质成分就必然会起变化。 可以分析得出SARS与非SARS 病人血清中的蛋白质成分变化。该技术不是利用单独的蛋白质峰的出现和消失来判断SARS ,而是用5 个蛋白质峰的出现和消失来判断,好比刑侦破案中甄别5 个手指的指纹,故此称为“指纹图谱”。 病原微生物检测方法 八,LAMP技术 环介导等温扩增(loop—mediated isothermal amplification,LAMP)技术是近年来发展出的一种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。与传统PCR方法相比,LAMP不需要热循环,为等温扩增。且由于LAMP反应中产生大量的副产物一白色焦磷酸钾沉淀,扩增产物可不经过电泳,通过肉眼观察或浊度计即可判定结果。 用于检测:丙型肝炎病毒(HCV) 、严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS—CoV) 、乙脑病毒(JEV) 、甲型流感病毒(AIV) 、 腮腺炎病毒(MV)等。 谢谢 病原微生物检测方法 荧光抗体技术 荧光抗体技术是根据抗原抗体反应具有高度的特异性,把荧光素作为抗原标记物,在荧光显微镜下检查呈现荧光的特异性抗原抗体复合物及其存在部位。 直接法是在检测样品上直接滴加已知特异性荧光标记的抗血清,经洗涤后在荧光显微镜下观察结果。间接法是在检测样品上滴加已知的细菌特异性抗体,待作用后经洗涤,再加入荧光标记的第二抗体。 返回 病原微生物检测方法 酶联免疫技术 酶联免疫技术是根据抗原- 抗体的免疫反应与酶的高效催化作用原理有机结合,通过酶催化底物进而发生一系列的化学反应,使溶液呈现出颜色变化,从而显示抗原抗体特异性反应的存在。 Dot-ELISA法(DIBA法): Dot-ELISA
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