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植物病原细菌鉴定

花匠小妙招
2024-11-24 17:19

是否存在细菌，确定是否细菌病害。植物细菌病害的主要症状类型有组织坏死，溃疡，萎蔫、腐烂，灼伤和过度生长等。一般认为不同属的植物病原细菌引起的主要症状类型不同，对病原细菌鉴定有一定价值。如土壤杆菌属细菌只引起过度生长和畸形；叶斑或叶枯型的细菌病害由黄单胞菌属或假单胞菌属细菌所引起；软腐病可能由欧文氏菌属或假单胞菌属细菌为害造成；而植物萎蔫病可能由几个植物病原菌属的为害。

通过对某种植物病原细菌的形态，生理生化，血清学等性状以及所致病害症状的研究，确定其在某一细菌分类系统中分类地位的过程。常见的病害，则依据病害症状，对照已有的文献记载可判断是哪一种病原细菌所致病害，如系不常见的病害或某种病原细菌的新寄主，尤其是新病原细菌时，则需症状观察和病原鉴定相结合，才会作出准确判断。植物病原细菌的鉴定程序按柯赫氏法则分5个步骤进行。

第一步，观察寄主症状，并用显微镜检查病组织内是否存在细菌，确定是否细菌病害。植物细菌病害的主要症状类型有组织坏死，溃疡，萎蔫、腐烂，灼伤和过度生长等。一般认为不同属的植物病原细菌引起的主要症状类型不同，对病原细菌鉴定有一定价值。如土壤杆菌属细菌只引起过度生长和畸形；叶斑或叶枯型的细菌病害由黄单胞菌属或假单胞菌属细菌所引起；软腐病可能由欧文氏菌属或假单胞菌属细菌为害造成；而植物萎蔫病可能由几个植物病原菌属的为害。但是，只凭症状判断不完全可靠。因为不同的病原菌可造成相似的症状，如真菌和细菌均可引起软腐或萎蔫症状，而细菌软腐病又可由不同属的细菌引起，有时不同病原细菌为害同一种寄主植物还可引起不同的细菌病害。为了准确地诊断，必需分离，进一步鉴定病原菌。

第二步，从病组织中分离培养病原细菌，获得纯培养。分离病原细菌以前，先将植物病组织制片，在光学显微镜下检查，如果在病组织切口处有雾状细菌脓溢出，证明是细菌病害。进而采用稀释分离法分离病原细菌，取病组织小块，表面清洗或消毒后，加少量灭菌水，捣碎制成悬浮液，再用接种环蘸取悬浮液在平板上作划线分离，或将悬浮液作系列稀释后混入培养基中作平板稀释分离，纯化后得到纯培养。大多数病原细菌都可用牛肉汁、蛋白胨，葡萄糖琼脂培养基培养。病原细菌生长适温一般为28～30℃。

第三步，用纯培养病原细菌接种植物，获得与原先病植物上相同的症状。从病组织分离获得纯培养细菌，则证明它对该寄主植物有致病性。接种到相应的寄主植物上，在一定条件下若产生与原先病植物上相同的症状。快速筛选致病性细菌，有时可利用植物过敏反应。过敏反应是指有些植物病原细菌在注射接种烟草叶片后，使叶肉组织迅速死亡，形成坏死枯斑。腐生细菌或非致病细菌不能引起过敏反应。有时可利用植物过敏反应快速筛选致病性细菌，最常用的是烟草过敏反应。如假单胞菌属细菌和解淀粉欧文氏菌在烟叶上能产生过敏性枯斑。黄单胞菌属致病细菌的筛选则利用番茄或辣椒上诱发的过敏反应。

第四步，则从接种的植物病组织中再分离获得细菌，并与原来病株上分离获得的细菌相比较，若两者相同，则可认定这种细菌是导致该寄主的病原菌。

最后研究这种病原细菌的特性，确定其分类地位。主要根据表型特征即细菌形态，染色反应，鞭毛特点，代谢类型，细菌与氧气的关系，致病性以及生理生化特性等。血清学方法和噬菌体检测法也常用于病原细菌鉴定。