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一种通过叶片诱导丛生芽快速繁殖蝴蝶兰方法

花匠小妙招
2024-11-25 23:53

专利名称：一种通过叶片诱导丛生芽快速繁殖蝴蝶兰方法
技术领域：
本发明涉及一种通过叶片快速繁殖蝴蝶兰的方法，本发明属于无性繁殖的组培方法。
背景技术：
蝴蝶兰是统名花，以其形态优美别致、花朵硕大、花色艳丽、色泽丰富、花期长，被称为“兰花之后”，而为单轴茎附生花卉，植株极少萌发侧芽枝，常规的繁殖方法难以满足市场需求，而组织培养是快速繁殖蝴蝶兰的最有效途径。1960年，Morel提出了离体无性繁殖兰花的方法。随着蝴蝶兰的推广，对蝴蝶兰快繁体系的研究也逐渐深入。利用成熟果荚进行无菌播种，获得播种苗；利用无菌播种苗进行诱导拟原球茎或丛生芽；外植体进行消毒，获得丛生芽或拟原球茎；也有通过无菌叶片脱分化培养获得原球茎，原球茎进一步增殖分化成丛生芽，进行繁殖。目前通过叶片直接诱导丛生芽的培养方面尚未见到详细的报道。尽管蝴蝶兰快繁技术取得一定进展，但蝴蝶兰丛生芽繁殖系数低、拟原球茎需分化专用培养基、且拟原球茎分化变异率高，这些都是制约蝴蝶兰工厂化生产的因素。

发明内容
针对上述问题，本发明提供了一种通过叶片诱导丛生芽的快速繁殖蝴蝶兰的新方法，本方法具有繁殖速度快、生长周期短、降低生产成本的优点，对于蝴蝶兰产业化生产具有重要意义。本发明的方法是先用蝴蝶兰花梗芽进行消毒、培养得到无菌材料，无菌材料去叶，用无菌花梗芽萌发获得丛生芽，丛生芽进行繁殖的同时，利用常规繁殖中废弃的叶片如无菌叶片及丛生芽叶片进行诱导丛生芽，叶片与丛生芽繁殖继代进行，即每代丛生芽的叶片都能再利用，诱导新的丛生芽，最后以丛生芽培养为组培苗。用蝴蝶兰花梗芽获得无菌材料的步骤中，蝴蝶兰花梗芽经过75%乙醇棉球进行擦拭，剥离花梗芽苞片，将裸露出花梗芽的芽段经0. 升汞浸泡10-15分钟，用无菌水反复冲洗后接入诱导培养基l/3MS+BA2-;3mg/L+NAA0. ang/L+蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+蔗糖20g/L。培养条件包括温度25士2°C、光照时间10-12小时/天、光照强度1200_1500Lx。经过45天-60天的培养，获得无菌小苗。无菌小苗进行快繁的过程中，对无菌叶片进行分切，直径约Icm的方块，边缘用刀片划伤，将叶片平铺在诱导丛生芽的专用培养基花宝1号2g/L+BA2-5mg/ L+NAA0. 1-0. ang/L+蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+蔗糖20g/L。同时，利用去除叶片的小芽，进行常规的丛生芽诱导l/3MS+BA2-;3mg/L+NAA0. 2mg/L+蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+ 蔗糖20g/L。培养条件包括温度25士2°C、光照时间10-12小时/天、光照强度1200-1500Lx。经过45天-60天的培养，获得丛生芽。在诱导过程中，叶片四周萌发出丛生芽，最多一块叶片分化出13个丛生芽。用叶片诱导的丛生芽，及用小芽诱导的丛生芽完成增殖、壮苗、生根的步骤中，在增殖的多次继代过程中，叶片和小芽不断诱导分化出新的丛生芽。通常在完成10次继代增殖后，将丛生芽进行壮苗，随后转入生根培养基。本方法中，所用的培养基介绍如下MS为基本培养基配方，1/3MS表示大量元素的用量为正常用量的1/3，其它微量等成份不变；BA，NAA为常用的植物激素；蛋白胨是牛肉蛋白胨；椰子水为椰子内的液体；花宝1号是进口肥料，购于香港。叶片诱导丛生芽的现象，具体见图片。关于诱导率，统计结果表明，所处理的3个品种，均可以通过叶片诱导出丛生芽。不同品种的叶片诱导丛生芽的比率30-70%。一块直径约Icm的叶片诱导丛生芽的数量高达13个芽，平均3个芽。本发明通过叶片诱导丛生芽，达到快速繁殖蝴蝶兰的目的，与现有技术相比，本方法具有以下优点。(1)传统的方法是通过叶片等其它器官诱导拟原球茎，该途径需要经过拟原球茎再分化阶段，步骤增多，耗费成本，且原球茎分化过程中变异率较高。该发明优点在于利用蝴蝶兰常规快繁中废弃的叶片，在同一培养基中直接诱导出丛生芽，通过此途径可获得大量丛生芽，降低了成本，大大地缩短了新品种的培育周期，对于新品种快速推向市场具有突破性的技术革新。株叶片平均至少可切下4块叶片，一块叶片平均诱导出3个芽，叶片诱导的芽数为 12个芽。考虑到诱导成功率30-70%，按30%核算，可诱导出3.6个芽。即增值率翻了近3 倍。利用叶片诱导丛生芽应用前景可观，对于珍贵的新品种需短期快繁出大量的克隆苗，应用该方法可有效缩短蝴蝶兰的快繁时间，在蝴蝶兰的工厂化生产中有很大的应用价值。
具体实施例方式以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实施例1航蝴1号红花蝴蝶兰花梗芽经过75%乙醇棉球进行擦拭，剥离花梗芽苞片，将裸露出花梗芽的芽段经0. 升汞浸泡12分钟，用无菌水冲洗后接入诱导培养基: l/3MS+BA3mg/L+NAA0. ang/L+蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+蔗糖20g/L。培养条件包括温度25 士 2 °C、光照时间10-12小时/天、光照强度1200-1500LX。经过48天的培养，获得无
菌小苗。利用无菌叶片进行切段，切为直径约Icm的方块，叶片边缘用刀片划伤，将14块叶片平铺在诱导丛生芽的专用培养基花宝1号+BA5mg/L+NAA0. ang/L++蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+蔗糖20g/L。培养条件包括温度25士2°C、光照时间10-12小时/天、光照强度1200-1500LX。经过56天的培养，叶片边缘丛生芽。在诱导过程中，叶片四周萌发出丛生芽，总计获得32个丛生芽。
权利要求
1.一种通过叶片快速繁殖蝴蝶兰的方法，其特征在于，利用叶片诱导丛生芽，最后以丛生芽作为繁殖对象培养无性系组培苗。
2.根据权利要求1所述的一种通过叶片快速繁殖蝴蝶兰的方法，其特征在于，所述叶片是通过以下步骤得到步骤一，取蝴蝶兰花梗芽进行消毒、培养得到无菌材料；步骤二，无菌材料去叶，用无菌花梗芽萌发获得丛生芽；步骤三，丛生芽组织进行繁殖，分切扩繁；步骤四，切取无菌材料或/和丛生芽叶片作为新的繁殖原材料。
3.根据权利要求2所述的一种通过叶片快速繁殖蝴蝶兰的方法，其特征在于，所述步骤一中，蝴蝶兰花梗芽经过75%乙醇棉球进行擦拭，剥离花梗芽苞片，将裸露出花梗芽的芽段经0. 升汞浸泡10-15分钟，用无菌水冲洗后接入诱导培养基l/3MS+BA2-;3mg/ L+NAAO. ang/L+蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+蔗糖20g/L。培养条件包括温度25士2°C、光照时间10-12小时/天、光照强度1200-1500LX。经过45天-60天的培养，获得无菌小苗。
4.根据权利要求1-3任一所述的一种通过叶片快速繁殖蝴蝶兰的方法，其特征在于，在所述利用蝴蝶兰叶片诱导丛生芽过程中，无菌条件下，将叶片分切成直径约Icm的方块，叶片边缘用刀片划伤，将叶片平铺在诱导丛生芽的专用培养基花宝1号2g/L+BA2-5mg/ L+NAAO. 1-0. 2mg/L+ 蛋白胨 2g/L+ 椰子水 100ml/L+ 蔗糖 20g/L。
5.根据权利要求4所述的一种通过叶片快速繁殖蝴蝶兰的方法，其特征在于，在所述利用蝴蝶兰叶片诱导丛生芽过程中，同时，利用去除叶片的小芽，进行常规的丛生芽诱导 l/3MS+BA2-3mg/L+NAA0. ang/L+ 蛋白胨 2g/L+ 椰子水 100ml/L+ 蔗糖 20g/L，培养条件包括温度25士2°C、光照时间10-12小时/天、光照强度1200-1500LX。
全文摘要
本发明公开了一种通过叶片诱导丛生芽快速繁殖蝴蝶兰的方法，尤其是一种将蝴蝶兰花梗芽进行消毒、培养得到无菌材料，无菌材料去叶，用无菌花梗芽萌发获得丛生芽，丛生芽进行繁殖的同时，利用无菌材料或/和丛生芽中的叶片进行诱导丛生芽，最后以丛生芽作为繁殖对象培养组培苗来快速繁殖蝴蝶兰的方法。本方法具有繁殖速度快、生长周期短、降低生产成本的优点。
文档编号A01H4/00GK102283110SQ20101029619
公开日2011年12月21日申请日期2010年9月29日优先权日2010年9月29日
发明者侯学瑛, 姬澎, 张占路, 徐明全, 赵贵林, 郑平, 陈肖英申请人:深圳市农科植物克隆种苗有限公司, 深圳市农科集团公司