透射电镜和ELISA技术快速检测兰花病毒的方法研究项目总结报告
透射电镜和ELISA技术快速检测兰花病毒的方法研究项目总结报告一、项目基本情况兰花是我国的传统名花以独有的秀雅多姿、花香幽远而著称具有很高的经济价值。栽培品种主要有中国兰和洋兰两大部分。随着经济的发展浙江省的兰花产业近年发展迅速与其他名贵花卉共同成为了一些地方的重要农业支柱产业。然而兰花病害在国兰和洋兰上普遍存在造成了不同程度的危害尤其是病毒病感染后严重降低成品花的品质。另外在国外引进的兰花种苗中也普遍携带了病毒使病毒随着种苗的流通而快速扩散而各兰花企业又缺乏有效的病毒检测手段目前兰花病毒病已成为影响兰花种植的一个严重问题。因此迫切需要建立快速简便的病毒检测技术为兰花病毒病防治和检疫提供快速简便的检测手段。据国内外文献报道侵染兰花的病毒有二十多种其中发生最广、危害最严重的主要是建兰花叶病毒(Cymbidiummosaicvirus,CymMV)和齿兰环斑病毒(OdontoglossumringspotvirusORSV)两种。建兰花叶病毒属线形病毒科、马铃薯X病毒属线状粒体长约为475490nm直径13nm螺旋对称外壳蛋白由257个氨基酸残基组成分子量为27640核酸为线状正链ssRNA。齿兰环斑病毒属烟草花叶病毒属杆状粒体长300nm直径18nm螺旋对称外壳蛋白由157个氨基酸组成分子量为17598核酸为线状正链ssRNA。CymMV和ORSV在兰花上引起花叶、坏死、叶脉褪绿、条斑等症状当两者复合侵染时可导致植株矮化叶片畸形等重症严重影响其经济价值和观赏价值。目前国内外检测这两种病毒主要采用生物测定法、酶联免疫吸附测定ELISA、RT-PCR技术、电镜检测等。生物测定依靠寄主症状反应时间周期长ELISA所用的检测试剂盒必须从国外购买检测成本达7元/样品无法在生产中实际应用同时试剂盒中的多抗血清存在非特异性高、准确性和均质性差等不足RT-PCR技术虽然灵敏度高但有时存在假阳性不能确诊不适用于在兰花基地大规模检测电镜检测虽然方便但对设备及技术的要求较高。为了满足广大兰花企业日益增长的病毒检测需求为兰花病毒病研究和组织培养生产无毒种苗提供有效的检测方法我们用分子生物学技术结合电镜等大型仪器制备以上两种病毒的单克隆抗体建立以单抗为基础的ELISA快速检测技术对栽培兰花或脱毒组培苗进行病毒检测为兰花脱毒种苗生产提供技术支持。1
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