蝴蝶兰花朵艳丽，是重要的盆栽观赏花卉，但其易受乙烯影响，花期较短。研究人员从乙烯生成过程中的关键酶——ACC合成酶（ACS）入手，克隆蝴蝶兰ACS基因片段（46
题型：非选择题-解答题 难度：0.65 引用次数：253 题号：18688785
蝴蝶兰花朵艳丽，是重要的盆栽观赏花卉，但其易受乙烯影响，花期较短。研究人员从乙烯生成过程中的关键酶——ACC合成酶（ACS）入手，克隆蝴蝶兰ACS基因片段（461bp），并构建ACS反义基因（RACS）植物表达载体，导入蝴蝶兰植株后使其表达，降低植株体内ACS的水平，从而获得花期延长的蝴蝶兰新品系。下图为ACS反义基因重组质粒的构建过程。回答下列问题：
注：Ampr为氨苄青霉素抗性基因，Kanr是卡那霉素抗性基因，LacZ是一种报告基因（其表达产物易被检测）。PstI、EcoRI、SacI、XbaI为几种限制酶。
1．PCR技术扩增ACS基因的过程中需要根据基因的结构设计
种引物，为保证ACS基因准确插入到质粒中，需在引物的
_________端分别添加限制酶
_________的识别序列。
2．基因表达载体PMD19-ACS除了图示结构外，还有
（答两点）等。报告基因LacZ的编码产物β-半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。利用该原理，筛选时在培养基中加入相关抗生素和X-gal等成分，其中
_________的菌落是导入了重组PMD19-ACS质粒的菌落。
3．T4DNA连接酶的作用是在DNA片段两个单链的游离的磷酸基和羟基末端之间形成
键。ACS基因转录产物与重组质粒PCAMBIA3301-RACS中目的基因转录产物的碱基序列
_________（填“相同”或“互补”）；构建重组质粒PBI221-RACS和重组质粒PCAMBIA3301-RACS时都使用了双酶切，该方法的优点是
_________。
4．采用冻融法将PCAMBIA3301-RACS质粒导入根癌农杆菌，涂布在含有
的培养基上培养48小时。待菌落长出后，挑取单菌落进行扩大培养。用目的基因序列特异引物进行PCR检测，若电泳结果为
_________，则证明重组质粒PCAMBIA3301-RACS已经导入根癌农杆菌中，可用于下一步的遗传转化。
更新时间：2023/04/16 13:49:47 |
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相似题推荐【推荐1】科学家利用基因工程改造的大肠杆菌基因组生产人胰岛素，如图是运用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。回答下列问题：
(1)适合作为目的基因的载体需要满足一些条件，根据基因表达载体的组成分析，图中质粒没有标出的结构是
___________。
(2)大肠杆菌内目的基因转录时，转录的模板是
(填“a.链”或“b链”)，目的基因表达产物没有生物学活性的原因是
____________________________。
(3)在 PCR 反应体系中，主要成分有缓冲液、4种脱氧核苷酸、两种引物、
等。其引物的作用是
___________________。
(4)PCR 的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。影响DNA 分子在凝胶中的迁移速率的因素有
等 (例举出2点即可)。
(5)为获得更多的目的基因，可利用PCR 技术进行扩增，该技术需要设计引物，引物与DNA结合发生在PCR的
阶段；PCR 第四次循环时需要消耗
______对引物。为保证目的基因与载体的正向连接，在设计PCR引物时，应在引物的
_______(填“3””或“5””)端添加限制酶
_______(填种类)的识别序列。根据上述信息，写出上游引物的15个碱基序列： 5’
_____________3’。
(6)科学家利用蛋白质工程技术，研制出了易吸收、起效快的赖脯胰岛素，获得赖脯胰岛素基因的途径是：从预期的蛋白质功能出发→
→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列。
【推荐2】细胞中NF-κB蛋白的活性水平与肿瘤的发展呈正相关。为了高效地筛选出以NF-κB为靶点的抗肿瘤药物，研究人员利用基因工程构建了NF-κB-GFP的报告基因载体。具体原理为把已确定的NF-κB基因与报告基因GFP（其表达产物荧光蛋白可被实时检测）正确连接，使报告基因能与NF-κB基因同步表达，其工作模式见下图1。回答下列问题：
(1)构建NF-κB-GFP报告基因载体时，首先利用PCR技术扩增GFP基因序列，能否准确扩增出GFP基因的关键是
__________。降温至50℃时，PCR反应体系中完成的反应主要是
__________。
(2)GFP基因所在DNA分子上有3种限制酶（BamHI、EcoRI、HindⅢ）的识别序列；如下图2所示。限制酶BamHI在碱基G和G之间进行切割，画出其切割后产生的黏性末端（体现出限制酶的切割位点）
。应使用限制酶
__________对GFP基因所在的DNA进行切割，再连接到质粒上，该方法的优点是
__________。最后得到NF-κB-GFP报告基因载体，该载体中GFP基因和NF-κB基因表达时使用的启动子
__________（填“相同”或“不同”）。
(3)将NF-κB-GFP报告基因载体导入肿瘤细胞常用的方法是
__________。体外培养肿瘤细胞需要提供
__________（答出2点即可）条件；再放入气体具体组成成分为
___________的培养箱中进行培养。
(4)将导入成功的肿瘤细胞置于含待检测抗肿瘤药物的培养基中培养一段时间，并检测细胞中GFP蛋白表达量的变化。若药物抗肿瘤效果显著，可观测到的现象为
。
【推荐3】哺乳动物体内一定含量的w—3多不饱和脂肪酸（LCPUFA）可以起到预防心血管疾病的作用，但LCPUFA在大多数动物体内不能合成，只能从食物中摄取。科研人员从秀丽隐杆线虫中获得LCPUFA合成酶基因fat—1（1229bp），培育转fat-1基因家兔，其部分流程如图一所示。
(1)PCR扩增fat-1基因的前提是
____，以用于特异性制备PCR扩增需要的引物。PCR扩增过程中，经过5轮循环后，得到的产物中只含一种引物的DNA分子占比为
____。
(2)在构建PEBf质粒时，为确保fat-1基因按正确方向插入，需要双酶切，还需对fat-1基因的引物进行相应设计。已知fat-1基因转录的模板链为a链，与b链结合的引物5端添加了限制酶识别序列GAATTC，则另一引物5’端需添加的限制酶识别序列为
，理由是
____。
(3)转染是将外源分子如DNA、RNA等导入真核细胞的技术。为了检验图一家兔成纤维细胞是否转染成功，科研人员分别提取培养液中各细胞的DNA，利用fat-1基因引物进行PCR扩增后电泳，部分结果如图二所示。据图分析，1组和2组分别是
细胞组PCR产物。
(4)检测转基因家兔细胞中是否含有LCPUFA合成酶，可采用
技术。如果fat-1基因已正确插入PEB质粒且成功转染，但在转基因家兔细胞中没有检测到LCPUFA合成酶，从构建基因表达载体的角度分析，可能的原因是
____。
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