取材和消毒:将欲脱毒品种块茎催芽,芽长4-5cm时,剪芽并剥去外叶,自来水下冲洗40min,于无菌室内用漂白粉溶液消毒后,无菌水冲洗2-3次。
剥离和接种:在无菌室内,于40倍解剖镜下,剥取带1个叶原基地茎尖,接种于MS茎尖培养基试管中。试管中的MS茎尖培养基包括大量元素、微量元素、有机成分和生长素、细胞分裂素、蔗糖和琼脂,pH值为5.7,经高压灭菌后使用,每试管接种1个茎尖。
培养条件:接种的茎尖培养于25°C、1500-3000LX光照条件下培养室内,3个月则长成3-4片叶的小植株。在无菌条件下,进行切段扩繁一次,取部分苗进行病毒检测。
病毒检测:病毒检测是茎尖脱毒不可缺少的步骤,常用鉴别寄主即指示植物或血清学方法进行检测,及时淘汰血清学阳性反应或在指示植物上有症状的茎尖苗,无任何反应的茎尖苗即脱毒苗用作繁殖。
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