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8植物病毒技术总结.ppt

花匠小妙招
2024-11-30 19:23

（a）PCR反应组份 * 一个目的DNA分子经20轮扩增后，可达106 * * * * * * * 2 RT-PCR 大多数植物病毒基因组为RNA，而Taq DNA聚合酶不能以RNA为模板合成DNA链，这就需要首先在逆转录酶的作用下，以RNA为模板合成互补的第一链DNA，之后才能进行常规PCR反应，这一技术称为反转录PCR （Reverse transcription PCR，简称RT-PCR）。 * 3 核酸杂交原理：DNA—RNA碱基互补关系。杂交：DNA—RNA形成异质双链的过程。利用根据已知序列合成或制备的核苷酸片断——探针（probe）是否能与待测核酸杂交，判断与已知片断是否有同源性。 * * * * * 植物病毒病害的初步识别与非侵染性病害的区别： 1. 发病中心有无 2. 在同一株植物上系统感染，不同部位症状不均一 3. 有传染性，病害有扩散的过程 4.特定的症状，花叶、黄化、矮缩、丛生、环斑、耳突、斑驳、蚀刻等菜豆金花叶病毒属 Begmovirus Bean golden mosaic virus, BGMV Tobacco leaf curl virus, TLCV 联体球形， ssDNA 白粉虱传毒，机械、蚜虫种子均不传。 * BGMV * * 纤细病毒属（Tenuivirus) 水稻条纹病毒（Rice stripe virus, RSV) 粒体丝状， 4-6条 ssRNA, 灰飞虱传，寄主范围广 * 类病毒viroid Potato spindle tuber viroid, PSTVd 种子种薯传播，也可经切刀和嫁接传染。 * Circular and linear forms of the Potato Spindle Tuber Viroid observed using a nucleic acid spreading technique followed by high angle shadowing with platinum metal.Magnified 350,000X * Yellowing and distortion of tomato, infected with spindle tuber viroid. Infected fruit will often fail to ripen. (Copyright D Elliott MAF NZ) * 菊花矮化类病毒Chrysanthemum stunt viroid Affected flowers in the foreground are also showing premature opening and colour break. * * Chrysanthemum stunt viroid Affected flower (right) The flower is reduced in size and showing marked colour bleaching. * 植物病毒检测与病毒病害的特征 * 植物病毒病的诊断生物学检测显微镜观测血清学检测分子生物学检测鉴别寄主传染试验物理化学特性核酸杂交 PCR 植物病毒检测 * 鉴别寄主指用来鉴别某一病毒或其株系的具有特定反应的植物。凡是病毒侵染后能产生快而稳定、并具有特征性症状的植物都可作为鉴别寄主。鉴别寄主谱系统侵染的寄主局部侵染的寄主不受侵染的寄主组合使用几种或一套鉴别寄主 * 病毒生物学检测 * 鉴别寄主谱的方法简单易行，反应灵敏，只需要很少的毒源材料。有时因气候或栽培等原因，症状反应不十分稳定。鉴别寄主的优缺点但工作量比较大，需要较大的温室种植寄主植物，且比较费时。 * 生物学检测显微镜观测血清学检测分子生物学检测鉴别寄主传染试验物理化学特性核酸杂交 PCR 植物病毒检测 * 对汁液传播的病毒，可通过病株汁液的体外性状（钝化温度、稀释限点和体外存活期）来测定；这些性状虽易受各种因素影响，但仍可作为区别不同病毒的依据之一，而且对混合侵染病毒的分离及制定病毒提纯方案具有参考价值。植物病毒粒体的稳定性 * 病毒生物学检测物理化学特性 TIP最低的病毒是番茄斑萎病毒，只有45℃；最高的是烟草花叶病毒，为93℃；大多数植物病毒为55～70℃。病毒在病株粗汁液中，经恒温水浴处理10分钟即丧失侵染力的最低温度。