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毛花猕猴桃组培快速繁殖方法.pdf

花匠小妙招
2024-12-02 05:28

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1、(10)授权公告号 CN 101647393 B (45)授权公告日 2012.07.04 CN 101647393 B *CN101647393B* (21)申请号 200910152973.6 (22)申请日 2009.09.24 A01H 4/00(2006.01) (73)专利权人浙江省农业科学院地址 310021 浙江省杭州市石桥路 198 号 (72)发明人吴延军谢鸣隆前进陈俊伟张慧琴徐红霞宋根华 (74)专利代理机构杭州丰禾专利事务所有限公司 33214 代理人沈伾伾 PT 93446 B,1997.07.11, 全文 . CN 1826878 A,200。

2、6.09.06, 全文 . 张远记等 .“毛花猕猴桃原生质体再生植株” .植物学报 .1995, 第 37 卷 ( 第 1 期 ), 第 48 52 页 . (54) 发明名称毛花猕猴桃组培快速繁殖方法 (57) 摘要本发明公开了毛花猕猴桃组培快速繁殖方法，属于植物组织培养技术领域。该方法包括： ( 一 ) 组培培养基的配制； ( 二 ) 外植体的选取与灭菌； ( 三 ) 诱导培养； ( 四 ) 增殖培养； ( 五 ) 生根培养； ( 六 ) 组培苗的驯化与移栽等步骤。该方法培养基针对性强、适用性好，外殖体初代幼芽的诱导率达 80以上；继代幼芽的增殖率达。

3、2 7 倍， 20 30 天苗高可达 2 5 厘米，组培苗素质提高，生根率达 95以上，移栽成活率 95以上。本发明可在果树苗木企业中推广应用。 (51)Int.Cl. (56)对比文件审查员荆丹丹权利要求书 2 页说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利权利要求书 2 页说明书 6 页 1/2 页 2 1. 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法，其特征在于该方法按以下步骤进行： ( 一 ) 组培培养基的配制：包括基本培养基及各阶段培养基的组分与各组分在每升中所含重量为： 1) 基本培养基： MS 或 1/2MS 培养基，其中，蔗糖或。

4、白糖 25 35g/L，琼脂 7 9g/L， pH5.0 6.2 ； 2) 诱导培养基： MS+6-BA 2.0 5.0mg/L+NAA 0.1 0.5mg/L ； 3) 增殖培养基： MS+6-BA1.0 5.0mg/L+NAA 0.1 0.5mg/L 或 IBA0.1 0.5mg/L ； 4) 生根培养基： MS 或 1/2MS+IBA0.05 1.0mg/L 和 / 或 NAA 0.1 0.5mg/L+ 活性炭 1g/L ； ( 二 ) 外植体的选取与灭菌：取毛花猕猴桃半木质化茎段为外植体，经自来水冲洗 1h、 70酒精消毒3040s、 0.1升汞水溶液灭菌510min或2。

5、次氯酸钠水溶液灭菌10 15min 后，以无菌水冲洗并用无菌滤纸吸去表面水分后，备用； ( 三 ) 诱导培养：将灭菌后外植体切成含单芽切段，接种在诱导培养基上，在温度 25 3，光强 2000lux500lux，光照时间 16h/d 的无菌环境下，经 30 35 天培养至外植体诱导萌发出初代幼芽或丛芽； ( 四 ) 增殖培养：将初代幼芽或丛芽接种在增殖培养基上，在同上条件下经 25 45 天培养至分化形成 2 7 倍、芽长 2 5 厘米的继代幼芽或丛芽； ( 五 ) 生根培养：将继代幼芽或丛芽接种到生根培养基中，在同上条件下经 10 15 天培养至幼。

6、苗基部长出 5 10 条毛细根系，再经 20 30 天培养至根长 3 7 厘米； ( 六 ) 组培苗的驯化与移栽：当组培苗长 3 6 厘米时，移至组培室外先将组培瓶盖拧松培养 2 天，后开盖培养 5 天，洗清根部培养基移栽入泥炭珍珠岩 4 1 的基质中，置于大棚温室中，浇水、保湿至组培苗成苗、出圃。 2. 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法，其特征在于该方法按以下步骤进行： ( 一 ) 组培培养基的配制：包括基本培养基及各阶段培养基的组分与各组分在每升中所含重量为： 1) 基本培养基： MS 或 1/2MS 培养基，其中，蔗糖或白糖 25 35g/L，琼脂。

7、 7 9g/L， pH5.0 6.2 ； 2) 诱导培养基： MS+6-BA 2.0 5.0mg/L+NAA 0.1 0.5mg/L ； 3) 增殖培养基： MS+6-BA1.0 5.0mg/L+NAA 0.1 0.5mg/L 或 IBA0.1 0.5mg/L ； 4) 生根培养基： MS 或 1/2MS+IBA0.05 1.0mg/L 和 / 或 NAA 0.1 0.5mg/L+ 活性炭 1g/L ； ( 二 ) 外植体的选取与灭菌：取毛花猕猴桃半木质化茎段为外植体，经自来水冲洗 1h、 70酒精消毒3040s、 0.1升汞水溶液灭菌510min或2次氯酸钠水溶液灭菌10 15m。

8、in 后，以无菌水冲洗并用无菌滤纸吸去表面水分后，备用； ( 三 ) 诱导培养：将灭菌后外植体切成含单芽切段，接种在诱导培养基上，在温度 25 3，光强 2000lux500lux，光照时间 16h/d 的无菌环境下，经 30 35 天培养至外植体诱导萌发出初代幼芽或丛芽； ( 四 ) 增殖培养：将初代幼芽或丛芽接种在增殖培养基上，在同上条件下经 25 45 天培养至分化形成 2 7 倍、芽长 2 5 厘米的继代幼芽或丛芽；权利要求书 CN 101647393 B 2 2/2 页 3 ( 五 ) 生根培养与驯化移栽：是将步骤 ( 四 ) 生长达。

9、 2 5 厘米的继代幼芽或丛芽洗去基部培养基后，把该基部在 100mg/LIBA 水溶液中浸蘸 1s 10s，并用泡开的苔藓包裹后植入穴盘内；或将该洗去培养基后的芽苗基部，用泡开并挤干水分的苔藓包裹、栽入穴盘内，再用 0.6 1.0mg/L IBA 水溶液浇湿苔藓；将上述两处理的穴盘放置在阴凉处，每天浇水 1 至 2 次以保持苔藓湿润，经 7 14 天培养至诱导发根，当根长 3 厘米以上时，去除根部苔藓并栽入由泥炭和珍珠岩按体积 4 1 配制的基质中，并按常规管理至成苗。权利要求书 CN 101647393 B 3 1/6 页 4 毛花猕猴桃组培。

10、快速繁殖方法技术领域 0001 本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种猕猴桃科猕猴桃属植物毛花猕猴桃的组织培养快速繁殖方法。背景技术 0002 毛花猕猴桃 (Actinidia eriantha Benth.)，别名白毛猕猴桃、毛冬瓜，是我国特有的一个猕猴桃种，主要分布于我国长江以南。毛花猕猴桃果实富含维生素 C 和多种活性物质，其维生素 C 含量高达 568.9 1137.0mg/100g.FW，并具有降低血脂、抗脂质过氧化、清除活性氧自由基、抑制肿瘤细胞及提高免疫力等功能；同时，与其它猕猴桃种相比其果皮极易剥离，上述优良的综合性状已引起猕猴桃研。

11、究者和商业生产者的广泛重视。但当前该品种的供苗量不足已成为当前发展的限制因素之一，因此，该品种苗木的快速繁殖方法已受到了广泛的重视。传统生产中多使用嫁接苗或者少量扦插苗，现尚无成熟的可以用于大量生产毛花猕猴桃的组织培养育苗方法。但通过嫁接繁殖优良苗木的速度较慢，而扦插繁殖成活率相对较低并易使植株带菌，种子播种繁殖的实生苗其性状不稳定极不适合园艺作物商业化栽培，同时，长期进行上述常规繁殖会造成品种退化。毛花猕猴桃的研究至今尚在起步阶段，是目前正在开发的新一代猕猴桃，可供参考的资料很少，如张远记，母锡金，蔡起贵等 . 毛花猕猴桃原生质体再生植株 J. 植物学报，。

12、 1995， 37(1) ： 48-52 ；张远记，钱迎倩，蔡起贵等，毛花猕猴桃原生质体再生植株根尖染色体数目变异与细胞多核现象 J. 植物学报， 1997， 39(2) ： 102-105，他们经原生质体培养途径获得再生植株；又如 WANG T， ATKINSON RG， JANSSEN BJ.The choice of Agrobacteriuim strain fortransformation of kiwifruitJ.Acta Horticulturae， 2006(a)， 753-759 ； WANG T， RANY， ATKINSON RG， GLEAVE AP。

13、， GOHEN D.Transformation of Actinidia eriantha ： A potential species for functional genomics studies in ActinidiaJ.Plant Cell Rep， 2006(b)， 25 ： 425-431 ；他们的研究虽然也获得了毛花猕猴桃遗传转化植株，但它们的研究目的、使用的外植体及培养再生途径与本发明完全不同。 0003 猕猴桃属植物共有54个种，其中21个种下又有分类群，种与种间差异极大，其中，不同种猕猴桃组织培养研究中较为成功的有美味猕猴桃种和中华猕猴桃种，但即使在同一。

14、种内不同分类群或品种其培养方式也各不相同，例如，田娜，徐子勤，何近刚 . 猕猴桃高频直接再生体系的建立 J. 武汉植物学研究， 2007， 25(1) ： 79 83 ；秦永华，张上隆，朱道圩 . 猕猴桃的组织培养和遗传转化研究进展 J. 细胞生物学杂志， 2004， 26(1) ： 57 61 ；兰大伟，刘永立，原田隆 . 狗枣猕猴桃叶片离体培养的器官、体细胞胚形成与植株再生 J. 果树学报 2007， 24(2) ： 218 222 ；胡家金，熊兴耀，张秋明，甘霖 . 美味猕猴桃原生质体培养及植株再生技术研究 J. 湖南农业大学学报， 1998， 24。

15、(3) ： 184-190 ；朱道圩，秦永华，郅玉宝，易明林，陈占宽 . 软枣猕猴桃 (Actinidia arguta) 原生质体培养与细胞团再生的初步研究 J. 河南农业大学学报， 2001， 35(3) ： 221-223 ；在这些研究中多使用了价格昂贵的 ZT， GA 或者酪氨酸；也有需要暗培养或其它特殊操作程序，如在生根前切下小苗置于 50ppm 说明书 CN 101647393 B 4 2/6 页 5 IBA 溶液中浸泡 2 小时或在 2ppm IBA 溶液中浸 24 小时后，再转入生根培养基上诱导生根的；也有些研究目的是为基因遗传转化或为其它生理。

16、研究打基础，为此采用了原生质体、子叶或胚组织等外植体，经脱分化形成愈伤组织后再分化过程获得再生。因此适合美味种与中华种的培养方式并不适合毛花猕猴桃种。发明内容 0004 本发明目的是，针对毛花猕猴桃传统嫁接繁殖、扦插繁殖及种子播种繁殖分别存在的，繁殖速度较慢和成活率较低、植株易带菌及性状不稳定、易造成品种退化等缺陷，提出一种繁殖系数高，生产周期短、程序简单、成本低廉适于毛花猕猴桃快速繁殖的组织培养方法。 0005 本发明目的通过以下技术方案得以实现。 0006 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法，该方法按以下步骤进行： 0007 ( 一 ) 组培培养基的配制：。

17、包括基本培养基及各阶段培养基的组分与各组分在每升中所含重量为： 0008 1) 基本培养基： MS 或 1/2MS 培养基，其中，蔗糖或白糖 25 35g/L，琼脂 7 9g/ L， pH5.0 6.2 ； 0009 2) 诱导培养基： MS+6-BA2.0 5.0mg/L+NAA 0.1 0.5mg/L ； 0010 3) 增殖培养基： MS+6-BA1.0 5.0mg/L+NAA 0.1 0.5mg/L 或 IBA0.1 0.5mg/ L ； 0011 4) 生根培养基： MS 或 1/2MS+IBA0.05 1.0mg/L 和 / 或 NAA 0.1 0.5mg/L+。

18、活性碳 1g/L ； 0012 ( 二 ) 外植体的选取与灭菌：取毛花猕猴桃半木质化茎段为外植体，经自来水冲洗 1h、 70酒精消毒 30 40s、 0.1升汞水溶液灭菌 5 10min 或 2次氯酸钠水溶液灭菌 10 15min 后，以无菌水冲洗并用无菌滤纸吸去表面水分后，备用； 0013 ( 三 ) 诱导培养：将灭菌后外植体切成含单芽切段，接种在诱导培养基上，在温度 25 3，光强 2000lux500lux，光照时间 16h/d 的无菌环境下，经 30 35 天培养至外植体诱导萌发出初代幼芽或丛芽； 0014 ( 四 ) 增殖培养：将初代幼芽或丛芽接。

19、种在增殖培养基上，在同上条件下经 25 45 天培养至分化形成 2 7 倍、芽长 2 5 厘米的继代幼芽或丛芽； 0015 ( 五 ) 生根培养：将继代幼芽或丛芽接种到生根培养基中，在同上条件下经 10 15 天培养至幼苗基部长出 5 10 条毛细根系，再经 20 30 天培养至根长 3 7 厘米； 0016 ( 六 ) 组培苗的驯化与移栽：当组培苗长 3 6 厘米时，移至组培室外先将组培瓶盖拧松培养2天，后开盖培养5天，洗清根部培养基移栽入泥炭珍珠岩41的基质中，置于大棚温室中，浇水、保湿至组培苗成苗、出圃。 0017 所述的生根培养与驯化移栽：将步骤。

20、 ( 四 ) 生长达 2 5 厘米的继代幼芽或丛芽洗去基部培养基后，把该基部在100mg/L IBA水溶液中浸蘸1s10s，并用泡开的苔藓包裹后植入穴盘内；或将该洗去培养基后的芽苗基部，用泡开并挤干水分的苔藓包裹、栽入穴盘内，再用 0.6 1.0mg/L IBA 水溶液浇湿苔藓；将上述两处理的穴盘放置在阴凉处，每天浇水 1 至 2 次以保持苔藓湿润，经 7 14 天培养至诱导发根，当根长 3 厘米以上时，去除根部说明书 CN 101647393 B 5 3/6 页 6 苔藓并栽入由泥炭和珍珠岩按体积 4 1 配制的基质中，并按常规管理至成苗。 0018。

21、本发明的有益效果是： 0019 1) 本发明提出的毛花猕猴桃组织培养基针对性强、适用性好，外殖体初代幼芽的诱导率达 80以上；继代幼芽的增殖率每个培养周期达 2 7 倍， 20 30 天苗高可达 2 5 厘米，组培苗素质提高，生根率达 95以上，移栽成活率 95以上。 0020 2) 本发明达到了仅采用少量外植体材料即能实现大批量扩繁毛花猕猴苗株的目的，该组培周期仅为 80 90 天就可移栽入温室，并可周年供苗，极大的降低了育苗成本，提高了育苗效率，可实行规模化生产，推动毛花猕猴桃种植业大力发展。 0021 3) 本发明在增殖培养至形成继代幼芽或丛芽的基础上。

22、，还提供了一种移出培养基直接在室外诱导生根的方法，大大降低了电、培养基及人工成本，并可缩短育苗周期 4 7 天。具体实施方式 0022 通过以下实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明的内容并不局限于此。 0023 实施例 1 ： ( 培养基 1) 0024 1) 基本培养基： MS 培养基，其中蔗糖 25g/L，琼脂 8g/L， pH5.8 ； 0025 2) 诱导培养基： MS+6-BA2.0mg/L+NAA 0.2mg/L ； 0026 3) 增殖培养基： MS+6-BA5.0mg/L+NAA 0.1mg/L ； 0027 4) 生根培养基： MS+IBA 0。

23、.05mg/L+NAA 0.2mg/L。 0028 实施例 2 ： ( 培养基 2) 0029 1) 基本培养基： MS 或 1/2MS 培养基，其中白糖 35g/L，琼脂 9g/L， pH5.0 ； 0030 2) 诱导培养基： MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.4mg/L ； 0031 3) 增殖培养基： MS+6-BA2.0mg/L+NAA 0.3mg/L ； 0032 4) 生根培养基： 1/2MS+IBA 1.0mg/L。 0033 实施例 3 ： ( 培养基 3) 0034 1) 基本培养基： MS 或 1/2MS 培养基，其中蔗糖 30g/L，琼脂 7g/。

24、L， pH6.2 ； 0035 2) 诱导培养基： MS+6-BA3.0mg/L+NAA 0.1mg/L ； 0036 3) 增殖培养基： MS+6-BA3.0mg/L+NAA 0.5mg/L ； 0037 4) 生根培养基： 1/2MS+NAA 0.3mg/L+IBA 0.4mg/L。 0038 实施例 4 ： ( 培养基 4) 0039 1) 基本培养基： MS 或 1/2MS 培养基，其中蔗糖 25g/L，琼脂 7.5g/L， pH5.8 ； 0040 2) 诱导培养基： MS+6-BA2.0mg/L+NAA 0.3mg/L ； 0041 3) 增殖培养基： MS+6-B。

25、A4.0mg/L+NAA 0.4mg/L ； 0042 4) 生根培养基： 1/2MS+IBA 0.6mg/L+ 活性碳 1g/L。 0043 实施例 5 ： ( 培养基 5) 0044 1) 基本培养基： MS 或 1/2MS 培养基，其中蔗糖 30g/L，琼脂 7g/L， pH5.5 ； 0045 2) 诱导培养基： MS+6-BA4.0mg/L+NAA 0.5mg/L ； 0046 3) 增殖培养基： MS+6-BA1.0mg/L+NAA 0.2mg/L ； 0047 4) 生根培养基： 1/2MS+IBA 0.8mg/L。说明书 CN 101647393 B 6 4。

26、/6 页 7 0048 实施例 6 ： ( 培养基 6) 0049 1) 基本培养基： MS 培养基，其中白糖 30g/L，琼脂 7g/L， pH6.0 ； 0050 2) 诱导培养基： MS+6-BA3.0mg/L+NAA 0.5mg/L ； 0051 3) 增殖培养基： MS+6-BA3.0mg/L+IBA 0.5mg/L ； 0052 4) 生根培养基： MS+NAA 0.1mg/L+IBA 0.2mg/L+ 活性碳 1g/L。 0053 实施例 7 ： ( 培养基 7) 0054 1) 基本培养基： MS 培养基，其中蔗糖 25g/L，琼脂 7.5g/L， pH6.2。

27、； 0055 2) 诱导培养基： MS+6-BA4.0mg/L+NAA 0.3mg/L ； 0056 3) 增殖培养基： MS+6-BA4.0mg/L+IBA 0.4mg/L ； 0057 4) 生根培养基： MS+IBA 0.1mg/L。 0058 实施例 8 ： ( 培养基 8) 0059 1) 基本培养基： MS 或 1/2MS 培养基，其中蔗糖 30g/L，琼脂 7g/L， pH6.0 ； 0060 2) 诱导培养基： MS+6-BA4.0mg/L+NAA 0.5mg/L ； 0061 3) 增殖培养基： MS+6-BA5.0mg/L+IBA 0.3mg/L ； 00。

28、62 4) 生根培养基： 1/2MS+NAA 0.5mg/L。 0063 实施例 9 ： ( 培养基 9) 0064 1) 基本培养基： MS 或 1/2MS 培养基，其中白糖 25g/L，琼脂 7g/L， pH5.8 ； 0065 2) 诱导培养基： MS+6-BA3.0mg/L+NAA 0.5mg/L ； 0066 3) 增殖培养基： MS+6-BA2.0mg/L+IBA 0.2mg/L ； 0067 4) 生根培养基： 1/2MS+NAA 0.4mg/L。 0068 实施例 10 ： ( 培养基 10) 0069 1) 基本培养基： MS 或 1/2MS 培养基，其中蔗。

29、糖 30g/L，琼脂 8g/L， pH5.8 ； 0070 2) 诱导培养基： MS+6-BA4.0mg/L+NAA 0.5mg/L ； 0071 3) 增殖培养基： MS+6-BA1.0mg/L+IBA 0.1mg/L ； 0072 4) 生根培养基： 1/2MS+NAA0.3mg/L+ 活性碳 1g/L。 0073 实施例 11 ： ( 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法 1) 0074 按以下步骤进行： 0075 1) 基本培养基和各阶段培养基配方同于实施例 1 ； 0076 2) 外植体的处理与消毒：采用毛花猕猴桃优良单株的茎尖和茎段 ( 一年中抽生的新梢都可作为外植体 )，。

30、用洗涤剂和自来水冲洗干净后，经 70酒精浸泡 30s，再用 0.1 升汞溶液浸泡灭菌 10min 后，无菌水冲洗并用无菌滤纸吸去表面水分，切成含单芽切段，备用； 0077 3) 诱导培养：在温度 25 3，光强 2000lux500lux，光照时间 16h/d 的无菌条件下经 30 天诱导培养，直接从外植体诱导出初代幼芽或丛芽； 0078 4) 增殖培养：将初代幼芽或丛芽接种在增殖培养基上，在同上条件下增殖培养 35 天至分化出大量的继代幼芽或丛芽； 0079 5) 生根培养：将继代幼芽或丛芽接种到生根培养基上，在同上条件下生根培养 35 天至诱导芽。

31、苗基部长出根系； 0080 6) 组培苗驯化、移栽：当组培苗生长达 3-5 厘米以上，并长出发达根系时，先将组说明书 CN 101647393 B 7 5/6 页 8 培瓶移至常温下拧松瓶盖培养 2 天后，开盖培养 5 天，取出组培苗，洗去根部培养基后移栽入泥炭珍珠岩 4 1 基质中，最初两周适当遮阴后置大棚温室中，浇水、保湿至组培苗成苗、出圃。 0081 实施例 12 ： ( 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法 2) 0082 本例中，步骤 1) 基本培养基和各阶段培养基配方同于实施例 2 ；步骤 2) 外植体经 70酒精浸泡 40s，再用 0.1升汞溶液浸。

32、泡 5min 进行消毒；步骤 3) 的诱导培养为 35 天；步骤 4) 的增殖培养为 25 天；步骤 5) 的生根培养为 30 天；其余步骤工艺同于实施例 11。 0083 实施例 13 ： ( 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法 3) 0084 本例中，步骤 1) 基本培养基和各阶段培养基配方同于实施例 3 ；步骤 2) 外植体经 70酒精浸泡 35s，再用 0.1升汞溶液浸泡 8min 进行消毒；步骤 3) 的诱导培养为 32 天；步骤 4) 的增殖培养为 30 天；步骤 5) 的生根培养为 40 天；其余步骤工艺同于实施例 11。 0085 实施例 14 ：。

33、 ( 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法 4) 0086 本例中，步骤 1) 基本培养基和各阶段培养基配方同于实施例 4 ；步骤 2) 外植体酒精浸泡30s，再用2次氯酸钠水溶液浸泡15min进行消毒；步骤3)的诱导培养为30天；步骤 4) 的增殖培养为 40 天；步骤 5) 的生根培养为 45 天；其余步骤工艺同于实施例 11。 0087 实施例 15 ： ( 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法 5) 0088 本例中，步骤 1) 基本培养基和各阶段培养基配方同于实施例 5 ；步骤 2) 外植体酒精浸泡40s，再用2次氯酸钠水溶液浸泡10min进行消毒；步骤3)的诱导培。

34、养为35天；步骤 4) 的增殖培养为 45 天；步骤 5) 与 6) 将生长达 2 5 厘米的继代幼芽或丛芽洗去基部培养基后，把该基部在 100mg/L IBA 水溶液中浸蘸 1s，并用泡开的苔藓包裹后植入穴盘内，放置在阴凉处，每天浇水 1 至 2 次以保持苔藓湿润，经 7 14 天培养至诱导发根，当根长 3 厘米以上时，去除根部苔藓并栽入由泥炭和珍珠岩按体积41配制的基质中，并按常规管理至成苗；其余步骤工艺同于实施例 11。 0089 实施例 16 ： ( 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法 6) 0090 本例中，步骤 1) 基本培养基和各阶段培养基配方同于实施。

35、例 6 ；步骤 2) 外植体酒精浸泡35s，再用2次氯酸钠水溶液浸泡12min进行消毒；步骤3)的诱导培养为32天；步骤 4) 的增殖培养为 35 天；步骤 5) 与 6) 将生长达 2 5 厘米的继代幼芽或丛芽洗去基部培养基后，把该基部在 100mg/L IBA 水溶液中浸蘸 5s ；其余步骤工艺同于实施例 15。 0091 实施例 17 ： ( 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法 7) 0092 本例中，步骤1)基本培养基和各阶段培养基配方同于实施例7 ；步骤2)至步骤4) 同于例 11 ；步骤 5) 与 6) 将生长达 2 5 厘米的继代幼芽或丛芽洗去基部培养基后。

36、，把该基部在 100mg/L IBA 水溶液中浸蘸 10s ；其余步骤工艺同于实施例 15。 0093 实施例 18 ： ( 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法 8) 0094 本例中，步骤1)基本培养基和各阶段培养基配方同于实施例8 ；步骤2)至步骤4) 同于例12 ；步骤5)与6)将生长达25厘米的继代幼芽或丛芽洗去基部培养基后，用泡开并挤干水分后的苔藓包裹、栽入穴盘基质内，再用 0.6mg/L IBA 水溶液浇湿苔藓，将上述处理的穴盘放置在阴凉处，每天浇水1至2次以保持苔藓湿润；其余步骤工艺同于实施例11。 0095 实施例 19 ： ( 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法。

37、 9) 0096 本例中，步骤1)基本培养基和各阶段培养基配方同于实施例9 ；步骤2)至步骤4) 说明书 CN 101647393 B 8 6/6 页 9 同于例13，步骤5)与6)将生长达25厘米的继代幼芽或丛芽洗去基部培养基后，用泡开并挤干水分后的苔藓包裹、栽入穴盘基质内，再用 0.8mg/LIBA 水溶液浇湿苔藓；其余步骤工艺同于实施例 18。 0097 实施例 20 ： ( 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法 10) 0098 本例中，步骤 1) 基本培养基和各阶段培养基配方同于实施例 10 ；步骤 2) 至步骤 4) 同例 14 ；步骤 5) 与 6) 将生长达 2 5 厘米的继代幼芽或丛芽洗去基部培养基后，用泡开并挤干水分后的苔藓包裹、栽入穴盘基质内，再用 1.0mg/LIBA 水溶液浇湿苔藓；其余步骤工艺同于实施例 18。 0099 本发明采用上述组培培养基及与之配套的快繁方法后，外殖体初代幼芽的诱导率达 80以上；继代幼芽的增殖率每个培养周期达 2 7 倍， 20 30 天苗高可达 2 5 厘米，组培苗素质提高，生根率达 95以上；移栽成活率 90以上。说明书 CN 101647393 B 9 。