首页 > 分享 > 一种嘉宝果的组织培养方法与流程

一种嘉宝果的组织培养方法与流程

花匠小妙招
2024-12-02 10:20

本发明涉及嘉宝果种植技术领域，具体涉及一种嘉宝果的组织培养方法。

【背景技术】

嘉宝果，又名珍宝果、树葡萄，属于桃金娘科常绿灌木，树姿优美，全年枝叶浓绿茂盛，一年四季都可开花、结果，嘉宝果同一枝干可以同时开花、结果、成熟，嘉宝果每年春、秋二季开花。嘉宝果直径约一英寸，多汁的果肉内含一至四颗小种子，其果实富含水分、氨基酸、钙等多种营养成分，成熟果其果肉呈多汁半透明、柔软多汁、风味特殊、气味芬芳，果皮含单宁酸另有轻微的树脂味道。长期食用有利于预防心血管疾病，增强抵抗力，尤其对女性的活力年轻、皮肤亮丽有着显著促进和提高肾功能作用，新鲜水果除了可以生吃外，也可以做成蜜饯、果酱和风味极佳的嘉宝果酒。因此，嘉宝果的种植在国内具有广阔的市场前景和经济效益。

嘉宝果具有很高的经济和观赏价值，但是嘉宝果生长缓慢，繁殖效率很低，当前嘉宝果繁殖的方法不外乎两种：嘉宝果目前最主要的种子繁殖方法和嫁接法，多数嘉宝果品种的实生苗木需6-10年方能开始结果，利用嫁接法可提早结果，嫁接后约3年可结果；嘉宝果不易扦插存活，国内研究其为一典型难发根物种，同样繁殖效率低，无法适应市场需求。现需开发一种可实现快速繁殖嘉宝果的技术。

技术实现要素：

本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种嘉宝果的组织培养方法使其快速繁殖，不仅操作简单，且大大提高了嘉宝果的成活率，适用于大规模系统化种植，可为农户增产增收。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种嘉宝果的组织培养方法，包括以下步骤：

s1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；

s2：取嘉宝果2～4mm的嫩枝茎尖，将其依次用5％洗洁精水溶液浸泡10～15min、自来水冲洗15～20min、次氯酸钠溶液浸泡3～5min、过氧化氢溶液浸泡3～5min，再以无菌水冲洗3～5次，最后用消毒滤纸吸干表面水分，置于灭菌的培养皿中，即得到消毒的外植体；其中，所述无菌水为高压灭菌过滤消毒的蒸馏水；

s3：建立无菌系：将器具及双手消毒后，取出经过高温灭菌的培养瓶，在超净工作台里按无菌操作要求打开培养瓶的瓶盖，将消毒好的外植体放在培养基上，盖好瓶盖，在培养室温度为25～27℃、光照强度为2000～3000lux、光照时间为10～12h/d的条件下培养40～45d，茎尖分化后得到丛生芽；

s4：丛生芽增殖培养：将所得丛生芽置于增殖培养基中，在培养室温度为25～27℃、光照强度为2000～3000lux，光照时间为10～12h/d的条件下培养50d得到健壮植株；

s5：丛生芽继代培养：将所得健壮植株切成单芽置于继代培养基中，在培养温度为25～27℃、光照强度为2000～3000lux、光照时间为10～12h/d的条件下培养50天得到带根的完整植株幼苗后，在室温25～27℃的室内打开培养瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2～3d后取出幼苗；

s6：将幼苗从培养瓶中出瓶后，将幼苗根部的培养基洗掉，然后立即将其移栽到基质中，当幼苗高度生长达到50cm以上时，即可出圃。

进一步地，在步骤s2中，所述次氯酸钠溶液的质量浓度为1.8～2.0％；所述过氧化氢溶液的质量浓度为8～10％。

进一步地，在步骤s3中，所述培养基为ms培养基+1.0～1.5mg/l的6-ba+0.5～1.0mg/l的naa+0.5～1.0mg/l的2,4-d+25～30g/l蔗糖+3.5～4.5g/l琼脂，将上述物质装入培养瓶中调节ph值为4.8～5.2后进行密封，再将培养瓶于125～130℃条件下蒸汽灭菌10～12min后冷却备用。

进一步地，在步骤s4中，所述增殖培养基为ms培养基+0.5～1.0mg/l的iaa+0.5～1.0mg/l的naa+25～30g/l的蔗糖+3.5～4.5g/l的琼脂，ph值为5.0。

进一步地，在步骤s5中，所述继代培养基为1/2ms培养基+1.0～1.5mg/l的iaa+1.0～1.5mg/l的iba+25～30g/l的蔗糖+3.5～4.5g/l的琼脂，ph值为5.0。

进一步地，在步骤s6中，所述基质是由泥炭、珍珠岩按照体积比为2:1混合得到。

本发明提供一种嘉宝果的组织培养方法，相对于现有技术的有益效果在于：

本发明通过对嘉宝果的嫩枝茎尖的诱导培育获得幼苗。利用了嘉宝果的嫩枝茎尖作为外植体进行组织培养，相对于已经嘉宝果的其他组织，其愈伤组织的分化能力更强，分化率更高，且嫩枝茎尖对消毒剂更敏感，剪取外植体后，将其依次用洗洁精水、自来水、次氯酸钠溶液、过氧化氢溶液消毒灭菌，洗洁精水、次氯化钠、过氧化氢的浓度均根据嘉宝果的特性进行选择，且消毒和灭菌时间严格控制，一方面可保证外植体消毒和灭菌充分，另一方面确保外植体的组织结构不被破坏，消毒和灭菌效果好，为下一步处理做好充足准备；然后，根据外植体的营养要求，通过研究摸索筛选出适宜嘉宝果组织不同培养阶段所需的培养基的种类和浓度，并严格控制相应的培养的温度和湿度，在本发明培养条件下进行诱导培育，有效地提高了嘉宝果的诱导率、继代系数及生根率。本发明所采用的每一技术手段都是相互配合、相互促进的，且步步为营、环环相扣的，所产生的总的技术效果远远高于单个技术手段所产生的技术手段的简单加和。

总之，本发明提供一种嘉宝果的组织培养方法使其快速繁殖，操作简单，通过建立无菌系培育嘉宝果丛生芽，再经过丛生芽增殖培养、丛生芽继代培养、生根培养、炼苗后移栽驯化所得种苗具有品质高，成活率高，结果年限提前的优点，能够有效解决嘉宝果自然繁殖率低的问题，同时为嘉宝果产业化育苗提供有力的保障，适用于大规模系统化种植，可为农户增产增收。

【具体实施方式】

以下通过具体实施例对本发明作进一步详述。

实施例1

一种嘉宝果的组织培养方法，包括以下步骤：

s1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；

s2：取嘉宝果2～4mm的嫩枝茎尖，将其依次用5％洗洁精水溶液浸泡10min、自来水冲洗15min、质量浓度为1.8％的次氯酸钠溶液浸泡3min、质量浓度为8％的过氧化氢溶液浸泡3min，再以无菌水冲洗3～5次，最后用消毒滤纸吸干表面水分，置于灭菌的培养皿中，即得到消毒的外植体；

s3：建立无菌系：将器具及双手消毒后，取出经过高温灭菌的培养瓶，在超净工作台里按无菌操作要求打开培养瓶的瓶盖，将消毒好的外植体放在培养基上，盖好瓶盖，在培养室温度为25℃、光照强度为2000lux、光照时间为10h/d的条件下培养40d，茎尖分化后得到丛生芽；其中，所述培养基为ms培养基+1.0mg/l的6-ba+0.5mg/l的naa+0.5mg/l的2,4-d+25g/l蔗糖+3.5g/l琼脂，将上述物质装入培养瓶中调节ph值为4.8后进行密封，再将培养瓶于125℃条件下蒸汽灭菌10min后冷却备用；

s4：丛生芽增殖培养：将所得丛生芽置于增殖培养基中，在培养室温度为25℃、光照强度为2000lux，光照时间为10h/d的条件下培养50d得到健壮植株；其中，所述增殖培养基为ms培养基+0.5mg/l的iaa+0.5mg/l的naa+25g/l的蔗糖+3.5g/l的琼脂，ph值为5.0；

s5：丛生芽继代培养：将所得健壮植株切成单芽置于继代培养基中，在培养温度为25℃、光照强度为2000lux、光照时间为10h/d的条件下培养50天得到带根的完整植株幼苗后，在室温25℃的室内打开培养瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2d后取出幼苗；其中，所述继代培养基为1/2ms培养基+1.0mg/l的iaa+1.0mg/l的iba+25g/l的蔗糖+3.5g/l的琼脂，ph值为5.0；

s6：将幼苗从培养瓶中出瓶后，将幼苗根部的培养基洗掉，然后立即将其移栽到基质中，当幼苗高度生长达到50cm以上时，即可出圃；其中，所述基质是由泥炭、珍珠岩按照体积比为2:1混合得到。

实施例2

一种嘉宝果的组织培养方法，包括以下步骤：

s1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；

s2：取嘉宝果2～4mm的嫩枝茎尖，将其依次用5％洗洁精水溶液浸泡15min、自来水冲洗20min、质量浓度为2.0％的次氯酸钠溶液浸泡5min、质量浓度为10％的过氧化氢溶液浸泡5min，再以无菌水冲洗3～5次，最后用消毒滤纸吸干表面水分，置于灭菌的培养皿中，即得到消毒的外植体；

s3：建立无菌系：将器具及双手消毒后，取出经过高温灭菌的培养瓶，在超净工作台里按无菌操作要求打开培养瓶的瓶盖，将消毒好的外植体放在培养基上，盖好瓶盖，在培养室温度为27℃、光照强度为3000lux、光照时间为12h/d的条件下培养45d，茎尖分化后得到丛生芽；其中，所述培养基为ms培养基+1.5mg/l的6-ba+1.0mg/l的naa+1.0mg/l的2,4-d+30g/l蔗糖+4.5g/l琼脂，将上述物质装入培养瓶中调节ph值为5.2后进行密封，再将培养瓶于130℃条件下蒸汽灭菌12min后冷却备用；

s4：丛生芽增殖培养：将所得丛生芽置于增殖培养基中，在培养室温度为27℃、光照强度为3000lux，光照时间为12h/d的条件下培养50d得到健壮植株；其中，所述增殖培养基为ms培养基+1.0mg/l的iaa+1.0mg/l的naa+30g/l的蔗糖+4.5g/l的琼脂，ph值为5.0；

s5：丛生芽继代培养：将所得健壮植株切成单芽置于继代培养基中，在培养温度为27℃、光照强度为3000lux、光照时间为12h/d的条件下培养50天得到带根的完整植株幼苗后，在室温27℃的室内打开培养瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗3d后取出幼苗；其中，所述继代培养基为1/2ms培养基+1.5mg/l的iaa+1.5mg/l的iba+30g/l的蔗糖+4.5g/l的琼脂，ph值为5.0；

实施例3

一种嘉宝果的组织培养方法，包括以下步骤：

s1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；

s2：取嘉宝果2～4mm的嫩枝茎尖，将其依次用5％洗洁精水溶液浸泡12min、自来水冲洗18min、质量浓度为1.9％的次氯酸钠溶液浸泡4min、质量浓度为9％的过氧化氢溶液浸泡4min，再以无菌水冲洗3～5次，最后用消毒滤纸吸干表面水分，置于灭菌的培养皿中，即得到消毒的外植体；

s3：建立无菌系：将器具及双手消毒后，取出经过高温灭菌的培养瓶，在超净工作台里按无菌操作要求打开培养瓶的瓶盖，将消毒好的外植体放在培养基上，盖好瓶盖，在培养室温度为26℃、光照强度为2500lux、光照时间为11h/d的条件下培养42d，茎尖分化后得到丛生芽；其中，所述培养基为ms培养基+1.2mg/l的6-ba+0.8mg/l的naa+0.7mg/l的2,4-d+28g/l蔗糖+4g/l琼脂，将上述物质装入培养瓶中调节ph值为5.0后进行密封，再将培养瓶于128℃条件下蒸汽灭菌11min后冷却备用；

s4：丛生芽增殖培养：将所得丛生芽置于增殖培养基中，在培养室温度为26℃、光照强度为2400lux，光照时间为11h/d的条件下培养50d得到健壮植株；其中，所述增殖培养基为ms培养基+0.8mg/l的iaa+0.8mg/l的naa+27g/l的蔗糖+3.8g/l的琼脂，ph值为5.0；

s5：丛生芽继代培养：将所得健壮植株切成单芽置于继代培养基中，在培养温度为26℃、光照强度为2600lux、光照时间为11h/d的条件下培养50d得到带根的完整植株幼苗后，在室温26℃的室内打开培养瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗3d后取出幼苗；其中，所述继代培养基为1/2ms培养基+1.2mg/l的iaa+1.3mg/l的iba+28g/l的蔗糖+4.2g/l的琼脂，ph值为5.0；

对比例1

一种嘉宝果的组织培养方法，包括以下步骤：

s1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；

s2：取嘉宝果2～4mm的嫩枝茎尖，将其依次用5％洗洁精水溶液浸泡12min、质量浓度为9％的过氧化氢溶液浸泡4min，再以无菌水冲洗3～5次，最后用消毒滤纸吸干表面水分，置于灭菌的培养皿中，即得到消毒的外植体；

对比例2

一种嘉宝果的组织培养方法，包括以下步骤：

s1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；

s3：建立无菌系：将器具及双手消毒后，取出经过高温灭菌的培养瓶，在超净工作台里按无菌操作要求打开培养瓶的瓶盖，将消毒好的外植体放在培养基上，盖好瓶盖，在培养室温度为23℃、光照强度为1500lux、光照时间为11h/d的条件下培养42d，茎尖分化后得到丛生芽；其中，所述培养基为1/2ms培养基+0.8mg/l的6-ba+0.8mg/l的naa+28g/l蔗糖+4g/l琼脂，将上述物质装入培养瓶中调节ph值为5.0后进行密封，再将培养瓶于128℃条件下蒸汽灭菌11min后冷却备用；

对比例3

一种嘉宝果的组织培养方法，包括以下步骤：

s1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；

s4：丛生芽增殖培养：将所得丛生芽置于增殖培养基中，在培养室温度为23℃、光照强度为1500lux，光照时间为11h/d的条件下培养50d得到健壮植株；其中，所述增殖培养基为1/2ms培养基+0.3mg/l的iaa+0.2mg/l的naa+15g/l的蔗糖+3.8g/l的琼脂，ph值为5.0；

对比例4

一种嘉宝果的组织培养方法，包括以下步骤：

s1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；

s5：丛生芽继代培养：将所得健壮植株切成单芽置于继代培养基中，在培养温度为26℃、光照强度为2600lux、光照时间为11h/d的条件下培养50d得到带根的完整植株幼苗后，在室温26℃的室内打开培养瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗3d后取出幼苗；其中，所述继代培养基为1/4ms培养基+0.5mg/l的iaa+0.5mg/l的iba+20g/l的蔗糖+4.2g/l的琼脂，ph值为5.0；

实验案例

具体实验方法为：分别采用本发明实施例1-3及对比例1-4的培养方法，培养后统计并计算出组织诱导率、出圃幼苗的成活率、种植首次结果的树龄，具体诱导结果如下表1所示。

表1培养结果

从上表1可看出，采用本发明实施例1-3方法进行嘉宝果组织培养，可培养出组织幼苗苗，组织诱导率高达83％，且组织幼苗的生长成活率高，首次结果时间缩短，实现了快速高效繁殖的目的；说明采用本发明实施例1-3的方案能好的对嘉宝果组织培养。

上述嘉宝果无菌系体系建立的方法打破传统的以种子获得再生植株，同时能够传承母株的优良性状，获得大量组培苗，实现了嘉宝果培养诱导无菌芽，达到快速繁殖的作用。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。